楊 超 邊青召 崔志超 劉運江

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心，河北 石家莊 050011)

傳統(tǒng)化療為目前治療晚期乳腺癌的主要手段，但化療出現(xiàn)的惡心、嘔吐、乏力及骨髓抑制等化療毒副反應(yīng)而使許多患者被迫減量甚至放棄化療。近年來，隨著對分子基因?qū)W及腫瘤細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究的不斷深入，新型靶向抗腫瘤藥物的研發(fā)與設(shè)計越來越受到人們的關(guān)注。舒尼替尼是酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的代表性藥物。本實驗旨在探討舒尼替尼單藥作用、與傳統(tǒng)化療聯(lián)合作用與傳統(tǒng)化療相比較的優(yōu)勢，能否替代傳統(tǒng)化療成為晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌的一種治療手段，或是與傳統(tǒng)化療結(jié)合能否提高療效。

1 材料和方法

1.1材料 4T1乳腺癌細(xì)胞株由河北醫(yī)科大學(xué)科研中心饋贈；BALB/c小鼠，雌性，6～8周齡，體重15～18.5 g，購自河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心；舒尼替尼由美國輝瑞公司生產(chǎn)；多西他賽由深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，IRDye 800CW EGF探針購自美國LI-COR公司；Pearl imager成像系統(tǒng)由美國LI-COR公司生產(chǎn)。

1.2方法

1.2.1構(gòu)建荷4T1乳腺癌細(xì)胞的BALB/C小鼠晚期乳腺癌模型 將4TI乳腺癌細(xì)胞置于RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)并傳代，取生長良好的細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，用計數(shù)板計數(shù)，將濃度調(diào)整至1.0×107/ml而以供注射。取32只BALB/c小鼠，將1×106個(0.1 ml)4T1乳腺癌細(xì)胞接種于每只小鼠右胸部皮下，待2 w后腫瘤長至大于200 mm3時開始抑瘤實驗。

1.2.2抑瘤實驗 32只荷瘤鼠隨機隨機分成四組：聯(lián)合組(舒尼替尼+多西他賽組)給予舒尼替尼40 mg·kg-1·d-1，溶于0.1 ml無菌生理鹽水中灌胃+多西他賽15 mg·kg-1·w-1(溶于0.1 ml無菌生理鹽水)腹腔注射；舒尼替尼組(S組)給予舒尼替尼40 mg·kg-1·d-1(溶于0.1 ml無菌生理鹽水中)灌胃+無菌生理鹽水0.1 ml腹腔注射/w；多西他賽組(D組)給予0.1 ml無菌生理鹽水灌胃/d+多西他賽15 mg·kg-1·w-1(溶于0.1 ml無菌生理鹽水)腹腔注射；對照組(C組)給予0.1 ml無菌生理鹽水中灌胃/d+ 0.1 ml無菌生理鹽水腹腔注射/w。各組連續(xù)給藥3 w。對不同的實驗組和對照組開始進行藥物處理后，每周測量1次瘤體長徑和與之垂直的短徑，計算瘤體積，繪制各組腫瘤生長曲線，同時每周稱量各組小鼠體重。

1.3觀察指標(biāo) 處死小鼠前2 d，用氯胺酮將各組小鼠麻醉，然后尾靜脈注射EGF熒光探針，然后應(yīng)用Pearl imager成像系統(tǒng)檢測成像，選擇channe為800 nm時，小鼠全身發(fā)出綠色熒光，全身熒光均勻分布；然后于24 h后再次相同方法、條件下成像，可見小鼠除種植瘤部位其他部位仍有熒光分布，熒光于種植瘤部位、腎臟、膀胱位置處較強，其他部位熒光較弱；48 h后，再次相同方法、條件下成像，可見小鼠熒光分布大部分集中于種植瘤部位、膀胱位置(EGF探針經(jīng)泌尿系統(tǒng)代謝排出體外，并非轉(zhuǎn)移灶)，其他部位熒光微弱；此時認(rèn)為EGF探針已代謝完全，只有種植瘤部位與其特異性結(jié)合，此時記錄腫瘤熒光密度值。實驗結(jié)束前48 h開始用EGF探針尾靜脈注射標(biāo)記種植瘤，48 h候開始記錄熒光密度值；測量種植瘤大小；稱量各組小鼠體重，實驗結(jié)束后處死小鼠，將雙肺取出，體式顯微鏡下計數(shù)雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。

2 結(jié) 果

2.1荷瘤小鼠種植瘤大小的比較 所有小鼠接種4T1乳腺癌細(xì)胞株后7 d均可觸及皮下瘤結(jié)節(jié)，成瘤率100%。開始時小鼠精神好，活動狀態(tài)無明顯變化，開始時腫瘤多為圓形或橢圓形，大小均一，后期藥物干預(yù)后種植瘤開始逐漸不規(guī)則，且大小不一。開始抑瘤時4組小鼠體重及種植瘤體積之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。3 w后荷瘤小鼠開始出現(xiàn)頸背部皮毛毛糙，毛色發(fā)暗，稀疏，活動遲緩，消瘦，藥物干預(yù)后期D組及聯(lián)合組小鼠主動攝食較C組及S組少，考慮為化療毒副反應(yīng)所致。給藥后3 w所有藥物干預(yù)組小鼠種植瘤體積較C組為小，其中聯(lián)合組小鼠種植瘤體積最??；聯(lián)合組與D組均較S組種植瘤體積為小，有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P均<0.05)，聯(lián)合組種植瘤體積雖小于D組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。從小鼠種植瘤生長曲線可以看出C組小鼠種植瘤生長迅速，生長曲線較陡直；聯(lián)合組及D組小鼠腫瘤在治療初期腫瘤生長較迅速，后期腫瘤生長延緩，且兩線幾乎重疊；S組小鼠腫瘤生長較C組慢，但曲線也較陡直。見圖1。

表1 各組各時間小鼠種植瘤的體積±s，n=8，mm3)

給藥時間(w)

2.2荷瘤小鼠雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目的比較 小鼠雙肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目不服從正態(tài)分布，各組轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)用中位數(shù)(M)表示：C組：48，D組：14，S組：31.5，聯(lián)合組：7.5。S組轉(zhuǎn)移灶較C組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，D組及聯(lián)合組均較S組及C組有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。將所有腫瘤標(biāo)本及雙肺常規(guī)石蠟包埋后，4～6 μm切片，HE染色，顯微鏡下證實腫瘤為乳腺浸潤性癌，雙肺結(jié)節(jié)證實為乳腺癌轉(zhuǎn)移。見圖2，圖3。

圖2 小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)

圖3 肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)病理證實為乳腺浸潤癌(HE,×200)

2.3荷瘤小鼠種植瘤熒光密度值的比較 各組小鼠種植瘤熒光密度值分別為：S組(6.30±0.29)×103、D組(3.14±0.60)×103、聯(lián)合組(3.07±0.36)mm，所有藥物干預(yù)組小鼠種植瘤熒光密度值較C組為低〔(8.58±0.61)×103，P均<0.05〕；聯(lián)合組與D組均較S組為低(P均<0.05)，聯(lián)合組雖低于D組(P>0.05)。

3 討 論

乳腺癌隨著新的化療藥物的涌現(xiàn)及規(guī)范化的治療，早期乳腺癌患者的預(yù)后已經(jīng)有了顯著改善，無病生存期和總生存期已有了顯著提高，90%以上患者可以獲得長期生存〔1〕，目前對晚期乳腺癌患者的治療收效甚微，晚期復(fù)發(fā)和(或)轉(zhuǎn)移的患者，原發(fā)病變部位以內(nèi)臟或混合為主，一般情況較差，腫瘤負(fù)荷大，存在多臟器轉(zhuǎn)移，多療程化療后骨髓抑制。舒尼替尼是美國輝瑞公司開發(fā)的口服小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI)代表性藥物，用于治療甲磺酸伊馬替尼不耐受或者病情惡化的胃腸道間質(zhì)腫瘤(GIST)和晚期腎細(xì)胞癌(mRCC)〔2～5〕，有報道〔6〕舒尼替尼能夠抑制80多種酪氨酸激酶和多種生長因子受體。臨床前研究顯示不僅對HER2陽性的乳腺癌細(xì)胞株有明顯抑制作用，對多種不同表型乳腺癌細(xì)胞系均有抑制作用。本實驗發(fā)現(xiàn)舒尼替尼對HER2陽性小鼠乳腺癌有一定的抑制作用，這與Fuminori等〔7〕報道的舒尼替尼能夠抑制FVB鼠HER2陽性乳腺癌模型的腫瘤生長的結(jié)果是一致的，他認(rèn)為舒尼替尼治療過程中可減少免疫抑制細(xì)胞的生成，可以減輕免疫抑制，提高機體免疫力，本實驗限于時間及經(jīng)費等問題，單從體重角度探討舒尼替尼服用過程中機體化療副反應(yīng)較小，未聯(lián)合檢測免疫因子及血白細(xì)胞，因此舒尼替尼能否減輕免疫抑制，提高機體免疫力尚需進一步探討。

本實驗發(fā)現(xiàn)舒尼替尼單藥有一定作用，并未看到與多西他賽聯(lián)合后未能提高療效， 2010年ASCO會議上，一項國際多中心的Ⅲ期研究〔8〕表明，對于593例新診斷的HER2陰性的晚期乳腺癌患者，在多西他賽中加入舒尼替尼治療直至疾病進展，雖然總有效率(ORR)顯著提高，但無進展生存(PFS)和總生存(OS)均未得到顯著改善。Albana等〔9〕報道，舒尼替尼可抑制裸鼠前列腺癌模型腫瘤的生長，舒尼替尼和多西他賽作為單一制劑均具有強大的抗腫瘤活性，雖然多西他賽抗腫瘤活性優(yōu)于舒尼替尼，但體重評估顯示毒性明顯高于舒尼替尼，然而舒尼替尼聯(lián)合低劑量多西他賽抗腫瘤效果與大劑量多西他賽相似，且毒性作用明顯降低。Guru等〔10〕報道，在膀胱癌的種植瘤模型中，舒尼替尼可增加順鉑的療效，顯示舒尼替尼及順鉑均能抑制腫瘤的增殖、促進腫瘤的凋亡、抑制腫瘤微血管的生成。多西他賽作用可能與舒尼替尼存在交叉，聯(lián)合之后，舒尼替尼的作用被多西他賽掩蓋。

本實驗結(jié)果顯其對轉(zhuǎn)移灶無明顯“殺滅”作用，一方面這可能與靶向藥物本身為“抑制劑”而非“殺傷劑”有關(guān)，靶向藥物作用溫和，當(dāng)機體有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(除外單純骨和軟組織轉(zhuǎn)移，如ER陽性絕經(jīng)后患者可用芳香化酶抑制劑治療)，NCCN(National Comprehensive Cancer Network)推薦以傳統(tǒng)解救化療為主。另一方面還可能與轉(zhuǎn)移灶本身“生命力強”有關(guān)，轉(zhuǎn)移灶一旦形成，將會較原發(fā)灶更加耐藥，傳統(tǒng)化療藥物對轉(zhuǎn)移灶的作用也不是十分敏感，其具體機制有待于進一步研究和探討。

本研究結(jié)果提示，在臨床實踐中，對于晚期乳腺癌的治療，尤其是一線化療失敗后，應(yīng)該嚴(yán)格把握單藥和聯(lián)合用藥的區(qū)別，不能盲目地追求聯(lián)合治療。從目前臨床治療水平來看，對于晚期乳腺癌的治療，還不能替代傳統(tǒng)的化療，靶向治療只是輔助治療的一種重要手段。

4 參考文獻

1徐兵河.復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌的化學(xué)治療〔J〕.中國實用內(nèi)科雜志，2007；27：24

2Rock EP,Goodman V,Jiang JX,etal.Food and drug administration drug approval summary：sunitinib malate for the treatment of gastrointestinal stromal tumor and advanced renal cell carcinoma〔J〕.Oncologist,2007；12(1)：107-13.

3Goodman VL,Rock EP,Dagher R,etal.Approval summary：sunitinib for the treatment of imatinib refractory or into-lerant gastrointestinal stromal tumors and advanced renal cell carcinoma〔J〕.Clin Cancer Res,2007；13(5)：1367-73.

4Motzer RJ,Michaelson MD,Redman BG,etal.Activity of SU 11248,a multitargeted inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor and platetel derived growth factor receptor,in patients with metastatic renal cell carcinoma〔J〕.J Clin Oncol,2006；24(1):16-24.

5Faivre S,Delbaldo C,Vera K,etal.Safety,pharmacokinetic,and antitumor activity of SU11248,a novel oral multitarget tyrosine kinase inhibitor,inpatients with cancer〔J〕.J Clin Oncol,2006；24(1):25-35.

6Abrams TJ,Lee LB,Murrary LJ,etal.SU11248 inhibits KIT and platelet 2 derived growth factor recep tor beta in preclinical models of human small cell lung cancer〔J〕.Mol Cancer Ther,2003；2(5):471-8.

7Fuminori A,Ibrahim Y.Therapeutic activity of sunitinib for Her2/neu induced mammary cancer in FVB mice〔J〕.Int Immunopharmacol,2010；10(1):140-5.

8Bergh J,Greil R.Sunitinib(SU)in combination with docetaxel(D)versus D alone for the first-line treatment of advanced breast cancer(ABC)〔R〕.2010 ASCO Annual Meeting.Abstract No：LBA1010.

9Albana C,Nicola T.Sunitinib malate(SU-11248)alone or in combination with low-dose docetaxel inhibits the growth of DU-145 prostate cancer xenografts〔J〕.Cancer Lett,2008；270(2):229-33.

10Guru S,Weiguo J.Sunitinib malate is active against human urothelial carcinoma and enhances the activity of cisplatin in a preclinical model〔J〕.Urol Oncol,2009；27(4):391-9.