朱蓉，李欣，曹俊涵

(成都市食品藥品檢測中心，四川 成都610045)

頂空毛細管氣相色譜法測定異丙托溴銨中7種殘留有機溶劑

朱蓉*，李欣，曹俊涵

(成都市食品藥品檢測中心，四川 成都610045)

目的:建立頂空毛細管氣相色譜法,測定異丙托溴銨中甲醇?丙酮?異丙醇?二氯甲烷?乙酸乙酯?三氯甲烷?甲苯等7種有機溶劑殘留量。方法:色譜柱:DM-624(聚乙二醇PEG-20M)毛細管柱(30.0m×0.53mm,3.00μm)；載氣:氮氣,流速為2.0mL·min-1；柱溫:程序升溫,初始溫度為40℃,保持5min,然后以6℃·min-1升溫到150℃,再以50℃·min-1升溫到230℃,保持3min；檢測器:氫火焰離子化檢測器,溫度為250℃；進樣口溫度:240℃；頂空進樣量:1.0mL。結(jié)果:甲醇?丙酮?異丙醇?二氯甲烷?乙酸乙酯?三氯甲烷和甲苯分別在15.02～900.92mg·L-1(r=0.9999)、21.03～1262.00mg·L-1(r=0.9999)、21.30～1278.16mg·L-1(r=0.9999)、7.80～468.25mg·L-1(r=0.9998)、22.22～1332.97mg·L-1(r=0.9999)、0.31～18.79mg·L-1(r=0.9992)和3.48～209.02mg·L-1(r=0.9998)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為98.1%(RSD=0.19%)、100.1%(RSD=1.08%)、101.4%(RSD=1.03%)、98.1%(RSD=0.40%)、98.1%(RSD=1.55%)、98.9%(RSD=3.08%)和101.8%(RSD=2.12%)。結(jié)論:該方法簡便?靈敏?重復性好,結(jié)果準確,適用于異丙托溴銨中殘留有機溶劑的檢測。

頂空毛細管氣相色譜法；異丙托溴銨；殘留有機溶劑

異丙托溴銨系對支氣管平滑肌有較高選擇性的強效抗膽堿藥，化學名為3-(3-羥基-1-氧代-2-苯基丙氧基)-8-甲基-8-(1-甲基乙基)-8-氮雜雙環(huán)辛烷溴化物。其在合成過程中使用的甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲苯等有機溶劑，往往還會殘留在最終產(chǎn)品中，未能完全除去，且它們均屬于二、三類溶劑，對人體和環(huán)境有潛在危害，人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(ICH)頒布的《殘留溶劑指導原則》[1]和2010版《中國藥典》[2]對異丙托溴銨產(chǎn)品中所涉及的這7種有機溶劑均規(guī)定了殘留限度。本文參照文獻[3]，采用頂空毛細管氣相色譜法測定異丙托溴銨中這7種溶劑的殘留量，所建立的測定方法簡便、靈敏、重復性好，結(jié)果準確，適用于異丙托溴銨中殘留有機溶劑的檢測。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N 氣相色譜儀;頂空進樣器(PerkinElmer公司)。甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲苯、二甲基亞砜(DMSO)均為色譜純。異丙托溴銨樣品(含量100.5%，Aarti Industries有限公司，批號:IB-10002、IB-11001、IB-11002)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:DM-624毛細管柱(30.0m×0.53mm，3.00μm);載氣:氮氣，流速為2.0 mL·min-1;柱溫:程序升溫，初始溫度為40℃，保持5min，然后以6℃·min-1升溫到150℃，再以50℃·min-1升溫到230℃，保持3min;檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID)，溫度為250℃;進樣口溫度:240℃;頂空條件:頂空瓶平衡溫度為100℃，平衡時間為15min，定量環(huán)為1.0mL，定量環(huán)溫度為110℃，傳輸管溫度為115℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液 稱取異丙托溴銨樣品約0.5g，置于頂空進樣瓶中，精密加入DMSO 5mL，用鋁隔膜封好瓶口，超聲處理，使樣品溶解，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液 精確稱取甲醇1.5g、丙酮2.5g、異丙醇2.5g、二氯甲烷0.3g、乙酸乙酯2.5g、三氯甲烷0.03g和甲苯0.45g，置于同一裝有100mL DMSO的250mL量瓶中，混合均勻，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，得儲備液;精密量取儲備液5mL置于100mL量瓶中用DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

取DMSO空白溶液和對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件，分別進樣檢測，記錄色譜圖(見圖1)。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗色譜圖

由圖1可見，7種溶劑均能達到基線分離，DMSO不干擾各溶劑的測定;以甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯峰計算的理論塔板數(shù)分別為28516、65168、86730、1152494、155837、327212、231278，均不低于5000;根據(jù)溶劑出峰順序，各相鄰溶劑峰之間的分離度分別為17.23、1.59、5.07、19.44、4.21、36.38，均大于1.5。

2.4 線性考察

精密稱取甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯各適量，按表1用DMSO分別稀釋并配制這7種溶劑的線性儲備液各50mL。

精密量取各儲備液適量，分別用DMSO定量稀釋并配得不同的7個質(zhì)量濃度的各溶劑系列標準溶液，進樣檢測，記錄色譜圖。以溶劑峰面積(A )對質(zhì)量濃度(C )進行線性回歸，得回歸方程和線性范圍(見表2)。

表1 7種溶劑線性儲備液的配制Table 1 Preparation of the linear stock solutions of seven solvents

表2 7種溶劑的回歸方程和線性范圍Table 2 Regression equations and linear ranges of seven solvents

2.5 加樣回收率試驗

精密稱取甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯各適量，將2010版《中國藥典》二部附錄中殘留溶劑測定法所規(guī)定的各溶劑限度[2]視作其含量為100%，精密量取表1中7種溶劑儲備液2.0、2.5和3.0mL，分別置100mL量瓶中，用DMSO定容至刻度，搖勻，各精密量取5mL，加入異丙托溴銨樣品0.5g(經(jīng)測定，其中各殘留溶劑含量均低于檢出限)，混勻，即配得各溶劑含量為80%、100%和120%的樣品溶液，每個溶劑含量的樣品溶液平行3份，進樣檢測，記錄色譜圖，并計算各溶劑的回收率，結(jié)果見表3。

表3 7種溶劑的回收率實驗結(jié)果Table 3 Results of recovery test for seven solvents

2.6 進樣精密度試驗

精密量取對照品溶液5mL，置于頂空進樣瓶中，封瓶并超聲處理，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果，測得甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯的峰面積RSD分別為3.55%、3.50%、3.53%、3.54%、3.57%、3.51%和3.59%(n=6)。

2.7 檢測限與定量限考察

精密量取按“2.3”項下方法配制的各溶劑儲備液適量，分別用DMSO定量稀釋，配得各溶劑不同質(zhì)量濃度的溶液，進樣檢測，以信噪比(S/N)為3∶1時測定各溶劑的檢測限，以S/N為10∶1時測定各溶劑的定量限，結(jié)果見表4。

表4 7種溶劑的檢測限和定量限Table 4 Limits of detection and limits of quantification for seven solvents

2.8 重復性試驗

稱取同一批次異丙托溴銨樣品適量(即所含各溶劑殘留量約為藥典規(guī)定限度的樣品量)，用DMSO配制供試溶液6份，進樣檢測。結(jié)果，所測供試溶液中甲醇、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯含量的RSD均小于3.6%(n=6)。

2.9 樣品測定

按“2.2.1”項下方法，配制3批次異丙托溴銨樣品(批號:IB-10002、IB-11001、IB-11002)的供試品溶液，進樣檢測。結(jié)果，3批次樣品中7種殘留溶劑含量均低于檢測限，其中一批次樣品色譜圖見圖2。

圖2 樣品色譜圖

3 討論

3.1 進樣方式的選擇

頂空進樣具有選擇性好、基質(zhì)屏蔽作用強等優(yōu)點，無論從方法的可操作性，還是從色譜儀的保護角度來看，其都是對樣品中殘留溶劑進行毛細管氣相色譜分析時的首選進樣方式。且異丙托溴銨中7種殘留有機溶劑的沸點均不超過100℃，適于頂空進樣。本實驗表明，在100℃的加熱平衡條件下，各溶劑加樣回收率達90%以上，且樣品穩(wěn)定，未發(fā)生熱分解，所采集的色譜圖基線穩(wěn)定，基本無基質(zhì)干擾。故選擇頂空進樣法用于異丙托溴銨中殘留溶劑的毛細管氣相色譜檢測。

3.2 樣品溶劑的選擇

異丙托溴銨中7種殘留有機溶劑的極性跨度大，既有水溶性的，也有非水溶性的，但它們均能很好地溶解于DMSO。因此，選用DMSO作為樣品溶劑。

3.3 程序升溫的選擇

2010版《中國藥典》中毛細管頂空進樣方法所采用的程序升溫步驟[2]不適用于異丙托溴銨中殘留有機溶劑的測定，其中初始溫度維持時間過長[3]，可導致極性和沸點相差較大但色譜行為相似的丙酮與異丙醇的色譜峰無法達到基線分離;且升溫速率過快，可導致二氯甲烷、乙酸乙酯和三氯甲烷峰無法分離。所以，本實驗中，為了保障各溶劑峰的分離度符合要求，將初始溫度的維持時間選定為5min，并先選擇6℃·min-1緩慢升溫，待乙酸乙酯峰和三氯甲烷分離出峰后，再以50℃·min-1快速升溫到230℃，保證甲苯等弱極性成分及早出峰，盡量縮短分析時間，使樣品中7種極性差異較大的殘留有機溶劑得到了較為滿意的分離檢測。

[1]人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會.殘留溶劑指導原則[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:236.

[2]國家藥典委員會.殘留溶劑測定法[M]//中華人民共和國藥典(二部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄ⅧP.

[3]張億,朱蓉.頂空毛細管氣相色譜法測定西洛他唑中有機溶劑的殘留量[J].藥物分析雜志,2006,26(7):1026-1027.

Determination of Seven Residual Organic Solvents in Ipratropium Bromide by Headspace Capillary Gas Chromatography

ZHU Rong, LI Xin, CAO Junhan
(Chengdu Center of Food and Drug Control, Chengdu 610045, China)

Objective:To establish a headspace capillary gas chromatography method for the determination of seven organic solvent residues including methanol, acetone, isopropanol, methylene dichloride, ethyl acetate, chloroform and toluene, in ipratropium bromide. Methods:A DM-624(polyethylene glycol PEG-20M) capillary column (30.0m × 0.53mm, 3.00μm) was used with nitrogen as carrier gas at a flow rate of 2.0 mL·min-1, a hydrogen flame ionization detector (FID) at a temperature of 250℃, an inlet temperature of 240℃and a headspace sampling volume of 1.0 mL. The column oven was temperature-programmed as follows: the initial temperature was 40℃for 5 min and then the temperature increased to 150℃at 6℃·min-1and to 230℃at 50℃·min-1for 3 min. Results: The linear ranges of the seven solvents were 15.02-900.92 mg·L-1(r=0.999 9) for methanol, 21.03-1 262.00 mg·L-1(r=0.999 9) for acetone, 21.30-1 278.16 mg·L-1(r=0.999 9) for isopropanol, 7.80-468.25 mg·L-1(r=0.999 8) for methylene dichloride, 22.22-1 332.97 mg·L-1(r=0.999 9) for ethyl acetate, 0.31-18.79 mg·L-1(r=0.999 2) for chloroform and 3.48-209.02 mg·L-1(r=0.999 8) for toluene, respectively. Their average recoveries were 98.1% (RSD=0.19%) for methanol, 100.1% (RSD=1.08%) for acetone, 101.4% (RSD=1.03%) for isopropanol, 98.1% (RSD=0.40%) for methylene dichloride, 98.1% (RSD=1.55%) for ethyl acetate, 98.9% (RSD=3.08%) for chloroform and 101.8% (RSD=2.12%) for toluene, respectively. Conclusion: The method is simple, sensitive, reproducible and accurate. It is suitable for the determination of residual organic solvents in ipratropium bromide.

headspace capillary gas chromatography; ipratropium bromide; residual organic solvent

O657.71；R927.1

B

1001-5094（2014）02-0146-04

接受日期：2013-09-18

*通訊作者：朱蓉，副主任藥師，從事化學藥品分析工作；

Tel：028-85362213；E-mail：zhur63@126.com