楊麗萍 羅慶豐 吳毓東 孫正魁 樊 帆
乳腺癌是我國婦女高發(fā)的惡性腫瘤,其發(fā)病率占婦女腫瘤的31%,新輔助治療是其有效治療方法和近期研究熱點(diǎn),但是新輔助化療總有效率為50% ~ 60%[1],因此如何預(yù)測新輔助化療有效性對于提高治療效果具有十分重要意義,我們應(yīng)用免疫組化法,檢測新輔助化療該腫瘤患者標(biāo)本的周期調(diào)控蛋白CDK2表達(dá)情況,比較周期調(diào)控蛋白CDK2表達(dá)情況與新輔助化療療效關(guān)系,為乳腺癌規(guī)范的新輔助治療作出有益的探索。
江西省腫瘤醫(yī)院2008年1月至2010年8月收治55例乳腺癌患者,經(jīng)病理檢查確診為浸潤性導(dǎo)管癌,均為女性,年齡33~68歲,平均年齡(50.8±2.6)歲。
CDK2購自北京中杉生物科技有限公司,為即用工作液。儀器 Leica輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)型號RM2235,格蘭仕微波爐型號D90D34ESXLRII-Y8。
新輔助化療方案為 “TAC” 方案 (多西紫杉醇75 mg/m2,阿霉素8 mg/m2,環(huán)磷酰胺500 mg/m2),21天為個(gè)1周期,術(shù)前行2個(gè)周期化療,2周內(nèi)行手術(shù)治療并評價(jià)療效。
術(shù)前用粗針穿刺經(jīng)過病理組織學(xué)檢查證實(shí)為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌,采用MaxvisionTM免疫組化法檢測CDK2表達(dá),按照免疫組化試劑盒的說明進(jìn)行操作,具體步驟:① 4 μm連續(xù)切片,裱于涂有APES的載玻片上,70 ℃烤片2 h;② 二甲苯脫蠟,梯度酒精入水;③ 3%過氧化氫室溫孵育30 min,消除內(nèi)源性過氧化物酶;④ 抗原修復(fù):切片浸于pH 6.0檸檬酸溶液中,微波熱修復(fù)5 min,保溫10 min,自然冷卻;⑤ PBS洗,3 min×2次;⑥ 加入CDK2抗體,4 ℃冰箱12 h;⑦ 復(fù)溫,PBS洗去一抗3 min×2次;⑧ 滴加Maxvision二抗試劑,室溫作用1 h;⑨ PBS洗3 min×2次;⑩ DAB光鏡下顯色,蘇木精復(fù)染,封片。光鏡下觀察乳腺癌組織中CDK2蛋白表達(dá)。陽性對照:購自北京中杉生物科技有限公司CDK2蛋白陽性組織片,陰性對照:PBS代替一抗。
在細(xì)胞核呈棕黃色顆粒沉著者為CDK2陽性。根據(jù)著色強(qiáng)度及著色癌細(xì)胞比例綜合染色結(jié)果:①按切片中細(xì)胞著色有無及深淺評分:無顯色為0分,淡黃色為1 分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。②根據(jù)著色癌細(xì)胞的比例記分:<5%為0分,5%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。最后計(jì)分=①×②。按積分高低分為:<4分為陰性(-),≥4分為陽性(+)。根據(jù)新輔助化療后手術(shù)標(biāo)本判斷療效,按WHO的判定標(biāo)準(zhǔn)[2]分為臨床完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病進(jìn)展(PD)和無變化(SD),總緩解(OR)=CR+PR,無效(NR)=SD+PD。
應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行四格表卡方檢驗(yàn)和R×C行列表檢驗(yàn)分析。
55例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌CDK2陽性表達(dá)率為70.9%,CDK2陽性表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小及腋窩淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無相關(guān)性 (P>0.05),并且與腫瘤組織中ER、PR、CerBb-2水平也無相關(guān)性(P>0.05),CDK2陽性表達(dá)率與乳腺癌組織學(xué)分級無相關(guān)性,見表1。39例CDK2陽性患者新輔助化療總緩解率為61.5%,16例CDK2陰性患者新輔助化療總緩解率為25.0%,兩者總緩解率比較差異具有顯著性意義(P<0.05 ),見表2。
表1 CDK2表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系/例
表2 55例乳腺癌中CDK2 表達(dá)與新輔助化療療效的關(guān)系/例
乳腺癌近年來發(fā)病率逐漸上升,已成為女性高發(fā)腫瘤,新輔助化療的療效已得到肯定,越來越廣泛的應(yīng)用于臨床,是近期乳腺癌規(guī)范治療中的研究熱點(diǎn)[3],但目前臨床工作中發(fā)現(xiàn)使用經(jīng)典的新輔助方案藥物進(jìn)行的新輔助化療其有效率為50%左右,因此探索出乳腺癌對新輔助化療敏感指標(biāo)對于進(jìn)一步提高療效具有重要的意義。多數(shù)學(xué)者采用分子病理標(biāo)記預(yù)測新輔助化療療效,研究結(jié)果不一[4],本課題選擇檢測乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白質(zhì)依賴激酶2(CDK2)表達(dá)與新輔助化療的關(guān)系,為合理選擇新輔助化療提供理論依據(jù)。
細(xì)胞周期蛋白質(zhì)依賴激酶2是控制細(xì)胞分裂中的關(guān)鍵蛋白質(zhì),對細(xì)胞周期起著核心的調(diào)控作用.通過對細(xì)胞周期蛋白的磷酸化修飾,與不同種類的細(xì)胞周期蛋白結(jié)合,對細(xì)胞周期的不同時(shí)相進(jìn)行調(diào)控[5],CDK2在細(xì)胞的生長,增殖中起重要作用,是腫瘤細(xì)胞增殖的限速蛋白,與G1期重要的細(xì)胞周期蛋白E結(jié)合,形成cyclinE-CDK2復(fù)合物[6],同時(shí)CDK2還可以與cyclinD1,形成cyclinD1-CDK2復(fù)合物,通過促進(jìn)pRB的磷酸化發(fā)揮生物學(xué)活性,是激活DNA復(fù)制系統(tǒng)中的重要組成部分[7]。
本研究選擇乳腺癌55例術(shù)前用粗針穿刺經(jīng)過病理組織學(xué)檢查證實(shí)為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌,檢測CDK2標(biāo)記在乳腺癌腫瘤組織粗針穿刺標(biāo)本中表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)CDK2陽性表達(dá)與乳腺癌預(yù)后及激素敏感治療指標(biāo)ER及PR的表達(dá)率比較結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,此結(jié)果與Wright 等[8]認(rèn)為CDK2與PR存在協(xié)同表達(dá)研究結(jié)果一致[10]。同時(shí)乳腺癌的CDK2陽性表達(dá)率與CerBb-2標(biāo)記指標(biāo)及其腫瘤大小,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,該結(jié)果與Zolochevska等[9]研究CDK2調(diào)控腫瘤細(xì)胞從G1進(jìn)入S增殖期,加速前列腺癌細(xì)胞的生長、增殖、轉(zhuǎn)移,及其Merrick等[10]研究CDK2參與了G2到M細(xì)胞周期的調(diào)控,抑制和降低CDK2活性,可以導(dǎo)致細(xì)胞G期阻滯,抑制細(xì)胞DNA合成及細(xì)胞增殖,延緩腫瘤細(xì)胞的生長速度的結(jié)果不一致。值得進(jìn)一步研究CDK2與腫瘤增殖及轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性。新輔助化療療效判定根據(jù)術(shù)后結(jié)合臨床病理學(xué)改變,包括腫瘤大小變化、細(xì)胞核的改變及其腫瘤壞死情況,CDK2陽性組的新輔助化療治療緩解率為61.5%,明顯高于CDK2陰性組25%的緩解率,兩組結(jié)果比較差別具有顯著性意義,CDK2陽性表達(dá)提示腫瘤組織處于快速增殖期G2到M細(xì)胞周期,該時(shí)相采用以細(xì)胞毒性化療藥為主的“TAC”新輔助化療可以殺滅處于增殖期的腫瘤細(xì)胞,取得更加滿意治療效果,本研究表明CDK2陽性表達(dá)對于預(yù)測乳腺癌患者接受以細(xì)胞毒性藥物為主的新輔助化療的療效有一定的參考價(jià)值,為乳腺癌規(guī)范的新輔助治療作出有益的探索。
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