高娜娜

宮頸癌是臨床上最常見的一種婦科腫瘤，其發(fā)病率為逐年上升趨勢[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是一個漸進的過程， 其演變過程需要幾年甚者十幾年，如能及時發(fā)現(xiàn)早期宮頸癌并進行治療，可達90%以上的治愈率[3]，及早地發(fā)現(xiàn)、密切監(jiān)測宮頸癌發(fā)生的高危人群是治療癌前病預防宮頸癌發(fā)生的重要手段[4]。研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌發(fā)生的一個主要原因就是高危型HPV的感染[5-6]。早期發(fā)現(xiàn)對于宮頸癌防治具有重要的意義，而有效的篩查方法又是早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌的關鍵，目前檢測高危型HPV的方法很多， PCR及HC2-HPV-DNA是目前最常用檢測高危型HPV的兩種方法[7]。本研究以120例健康體檢的婦女為研究對象，來比較PCR及HC2-HPV-DNA兩種高危型HPV的方法在篩選宮頸癌中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取健康體檢的婦女120例，年齡23～60歲，平均年齡(43.6±2.4)歲。采樣前應注意以下事項：①采樣前3天內(nèi)不沖洗陰道及不適用陰道內(nèi)藥物；②采樣前1天內(nèi)不能有性行為；③采樣前沒有進行相關疾病的治療；④取樣時為非月經(jīng)期。將棉簽用生理鹽水浸濕后試凈宮頸口過多的分泌物，然后暴露宮頸口，用新的濕棉球在宮頸的鱗柱交界處采集宮頸脫落的細胞，并迅速將其放入保存液中，保存待檢。

1.2 研究方法

實時熒光定量PC的引物及探針依據(jù)高危型HPV的L1基因靶序列來設計，其具體操作按照深圳港龍生物技術有限公司提供的高危型HPV的熒光定量PCR檢測試劑盒的說明書進行，并應用熒光定量分析儀ABI 7500來分析結(jié)果，其判定標準為：<500拷貝/mL為陰性，≥500拷貝/mL為陽性。宮頸口脫落細胞中高危型HPV-DNA應用美國Digene公司天津分公司提供的HC2-HPV-DNA檢測試劑盒來檢測，其判定標準為：<1.0 pg/mL為陰性，≥1.0 pg/mL為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行整理與分析，然后采用χ2檢驗及Fisher精確檢驗來進行計數(shù)資料的比較，以P<0.05為其差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PCR及HC2-HPV-DNA的檢測結(jié)果

分別采用PCR及HC2-HPV-DNA兩種方法，對120例健康體檢的婦女進行高危型HPV感染情況的檢測，其檢測結(jié)果顯示PCR檢出陽性率為15.83%(19/120)，HC2-HPV-DNA檢出陽性率為10.83%(13/120)，同時檢出陽性率為9.17%(11/120)，同時檢出陰性率為81.67%(98/120)，兩者比較存在著差異(P<0.05)。

2.2 PCR及HC2-HPV-DNA檢測高危型HPV感染情況

按照年齡大小將120例健康女性分為23～30歲、31～41歲、41～50歲和51～60歲4個年齡組。高危型HPV感染率41～50歲及51～60歲兩組明顯高于其余兩組，PCR及HC2-HPV-DNA兩種檢測方法對各個年齡段患者的高危型HPV感染檢出率存在顯著差異，見表1、圖1。

圖1 不同年齡段患者高危HPV感染情況

表1 PCR及HC2-HPV-DNA檢測高危型HPV感染情況

注：#為PCR法與HC2-HPV-DNA法相比。

3 討論

宮頸癌為僅次于乳癌的第二常見婦科惡性腫瘤，宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展是一個從宮頸上皮內(nèi)瘤變到浸潤癌的漫長并逐漸演變的過程[8]。正是因為如此，早期發(fā)現(xiàn)、診斷及治療宮頸癌是降低宮頸癌發(fā)病率及死亡率的關鍵，而癌前病變的篩選工作尤為重要。目前唯一病因明確的惡性腫瘤就是宮頸癌，研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌的發(fā)生和HPV的感染密切相關[9]。在自然界中HPV普遍存在，目前發(fā)現(xiàn)有100余種HPV病毒的型別，大多數(shù)為不致病性，僅有少數(shù)型別的HPV才可以致癌[10]。HPV依據(jù)致病能力的高低分為低危型及高危型兩種，而高危型則是引發(fā)宮頸癌的重要因素，從病因上講，對宮頸癌病因進行的監(jiān)測及干預可以降低宮頸癌的發(fā)生，這比治療已確診的宮頸癌患者的意義更遠大，因此能對高危型的HPV感染進行檢測，可以有效地預防宮頸癌的發(fā)生。HPV 是一種常見的病毒，HPV在體內(nèi)感染后有3種演變方式。①進展期：有一部分HPV感染后需經(jīng)一定的潛伏期，然后進一步發(fā)展才會有臨床表現(xiàn)，如腫瘤、尖銳濕疣等；②靜止期：如HPV于皮膚黏膜組織長期存在就不會引起臨床癥狀；③消退期：部有一部分HPV的感染具有自限性，經(jīng)一定階段后能逐漸消失。因此，HPV感染通常要經(jīng)過潛伏期、亞臨床期、臨床癥狀期及HPV相關的腫瘤期。對于潛伏期及亞臨床期，有時可以檢測到HPV的存在，但在初期，部分患者還沒有發(fā)生細胞學的改變，因此更不會有組織學的改變。

檢測高危型HPV的方法目前雖然有很多種，PCR及HC2-HPV-DNA是其中很重要的兩種方法。HC2-HPV-DNA檢測技術的原理是首先捕獲RNA抗體，然后通過化學發(fā)光法來放大信號進而來檢測高危型HPV，而PCR檢測高危型HPV是通過DNA擴增技術[11]。其中HC2-HPV-DNA是唯一種通過美國FDA認證的高危型HPV的檢測方法，是檢測高危型HPV的金標準[12]。本研究使用PCR及HC2-HPV-DNA兩種方法來檢測120例健康女性患者高危型HPV的感染情況，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在檢測出高危型HPV的陽性率方面HC2-HPV-DNA技術低于PCR技術，兩者在陽性檢測率上存在著明顯的差異，這與Chateau等[13]的研究結(jié)果相符合。本研究的結(jié)果還顯示雖然高危型HPV感染率在各年齡段組女性的分布趨勢沒有顯著差異，但是兩種檢測方發(fā)均顯示高危型HPV的感染的陽性率在41～50歲及51～60歲兩個年齡段組中的女性明顯高于其余兩組，且其差異有統(tǒng)計學意義。依照兩種實驗方法的檢測原理而進行分析后，由于HC2-HPV-DNA檢測技術應用了RNA-探針和信號放大技術，因而避免了PCR檢測技術過程中的DNA錯配和交叉反應而造成的假陽性，故HC2-HPV-DNA檢測技術優(yōu)于PCR檢測方法，因此其高危型HPV感染的檢測結(jié)果更加可靠。雖然宮頸癌發(fā)生與高危型HPV感染有關，但是這并不代表任何高危型HPV檢測陽性的健康體檢者都會患宮頸癌。反而言之，宮頸癌患者也并非均為高危型HPV檢測的陽性患者。因此，HC2-HPV-DNA檢測可以作為細胞學檢測的重要補充，在婦女宮頸癌的風險評估中發(fā)揮著重要的作用。因此對可能發(fā)生宮頸癌的高危人群使用HC2-HPV-DN檢測方法來檢測此型HPV感染的陽性率來進行宮頸癌的早期篩查，對宮頸癌的預防及發(fā)生發(fā)展在、起著重要的作用。

綜上所述，本研究通過使用PCR及HC2-HPV-DNA兩種檢測方法對120例健康體檢女性高危HPV的感染率進行研究， 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)HC2-HPV-DNA檢測技術在高危型HPV檢測上優(yōu)于PCR技術，更適合與中老年女進行高危型HPV的檢測，這樣就可以對檢測結(jié)果陽性者進行早期的干預措施，進而可以有效地達到預防宮頸癌的發(fā)生。

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