楊佳敏，沈小雨，羅 麗，任曉暄，郭孟瑋，趙雅芳，張 玲，申松希，齊丹丹，朱世鵬，許詠思，嵇 波，張露芬，李曉泓，朱 江

0 引 言

紅外熱成像技術(shù)具有簡便、直觀、客觀和無損傷等特點，可用于某些疾病的診斷和輔助診斷，具有一定的臨床價值，并且越來越多的應(yīng)用到針刺經(jīng)絡(luò)的研究中。查閱近20年來關(guān)于針刺經(jīng)絡(luò)與體表溫度變化的相關(guān)文獻［1－2］，其主要從針刺不同手法對穴位皮膚溫度的影響，針刺后經(jīng)脈循行線上的溫度變化，針刺遠端穴位對病變部位溫度的影響以及針刺對經(jīng)絡(luò)溫度失衡的調(diào)節(jié)方面進行研究，為研究經(jīng)絡(luò)的效應(yīng)和臨床刺激手法的運用提供了依據(jù)，但這些研究主要是在人體進行的，缺乏相關(guān)的動物實驗依據(jù)。本研究旨在從動物實驗角度，觀察針刺不同穴位對穴位體表溫度變化的影響，及留針不同時間階段的溫度變化差異。本實驗中通過觀察針刺寒凝證類痛經(jīng)大鼠三陰交穴、關(guān)元穴后，三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)、關(guān)元穴區(qū)在60 min內(nèi)的體表溫度變化，探討針刺后穴區(qū)體表溫度的動態(tài)變化規(guī)律，為進一步說明針刺對穴區(qū)體表溫度的影響，同經(jīng)穴位和它經(jīng)穴位的循經(jīng)性溫度變化規(guī)律以及經(jīng)穴的特異性提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康清潔級SD大鼠，雌性，3月齡，32只，性成熟未交配，體重(220±10)g，由北京軍事醫(yī)學科學研究院提供，合格證號:SCXK2007-004(軍)。動物置于清潔柜中，進食普通飼料，自由飲水，室溫保持在(23±1)℃，濕度(45±5)%，標準12 h晝夜交替周期。實驗在白天進行，實驗開始前，動物至少適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本動物實驗過程均遵守美國國立衛(wèi)生院倡導的實驗動物關(guān)懷、使用指導原則和以減少、替代和優(yōu)化為核心的動物實驗“3R”原則。

1.2 主要試劑和儀器 苯甲酸雌二醇注射液(寧波市三生藥業(yè)有限公司，批號:120207);縮宮素注射液(上海禾豐制藥廠生產(chǎn)，批號:120302);自制美蘭染色溶液;20%氨基甲酸乙酯注射液(批號T20080530)。BC/BD-379HB臥式冰柜;紅外熱像儀(FLIR SC640，F(xiàn)LIR system，美國)，溫度范圍為－40℃～2000℃，熱敏感度為(25°×19°)。

1.3 動物分組 通過陰道涂片法，即每日定時用細棉簽蘸以等滲鹽水，濕潤后輕輕插入大鼠陰道0.5 cm，稍微轉(zhuǎn)動后取出，將帶有陰道內(nèi)容物的棉簽在載玻片上均勻轉(zhuǎn)動后涂片，在顯微鏡下觀察陰道涂片的組織學變化，根據(jù)細胞形態(tài)、種類及數(shù)量篩選出動情間期的雌性大鼠32只，按照隨機數(shù)字表法分為等滲鹽水組、模型組、三陰交組、關(guān)元組，每組8只。等滲鹽水組每日給予同等劑量的等滲鹽水，不冷凍。其余各組大鼠均皮下注射苯甲酸雌二醇，連續(xù)10 d，第1、10 天皮下注射0.5mg/d，第2 －9 天0.2mg/d。末次給藥1 h后，腹腔注射縮宮素2 U/只。將大鼠放入－25℃的低溫冰柜中，持續(xù)受凍4 h左右，中間間隔2 h，開蓋通氣5 s。待大鼠出現(xiàn)寒顫停止，畏寒喜暖，蜷縮少動，朦朧欲睡，反應(yīng)遲鈍，呼吸微弱，毛發(fā)蓬松、豎立、無光澤，尿色淡，糞便濕爛，耳色暗紅，爪甲及尾部紫暗、腫脹等癥狀和體征時，將大鼠取出冰柜，連續(xù)受凍5 d。手針，使用Φ0.25 mm×40 mm的一次性無菌針灸針(中研太和牌，無錫，中國)。三陰交組直刺入三陰交穴［3］4～5 mm，關(guān)元組直刺入關(guān)元穴［3］4～5 mm，針刺即刻及針刺10 min時行平補平瀉的捻轉(zhuǎn)手法30 s，留針20 min后取針。模型組和等滲鹽水組不予針刺。

1.4 紅外熱成像記錄步驟 寒凝證類痛經(jīng)模型制備第10天，注射苯甲酸雌二醇后，肌內(nèi)注射氨基甲酸乙酯0.7 mL/100 g麻醉大鼠，用動物剃毛器剃去軀干前部及后肢內(nèi)側(cè)的毛發(fā)，暴露出三陰交穴、血海穴、關(guān)元穴。將麻醉的大鼠固定在透明鼠板上，被攝對象放置于紅外攝像機鏡頭視野內(nèi)，與攝像頭的距離固定為1 m，標記雙側(cè)三陰交穴、血海穴以及關(guān)元穴。記錄動物的基礎(chǔ)溫度，等滲鹽水組腹腔注射等滲鹽水，模型組腹腔注射縮宮素，三陰交組、關(guān)元組針刺，記錄即刻及針刺后 5、10、20、30、40、50、60 min各時間點的溫度。實驗期間，實驗室溫度保持在(23±1)℃，濕度(60±5)%。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。定量資料采用均數(shù)±標準差()表示。若各組均正態(tài)且方差齊，采用One-Way ANOVA分析，繼以LSD進行多組間比較;若各組均正態(tài)而方差不齊，采用Welch檢驗;若各組不服從正態(tài)性檢驗，則采用非參數(shù)檢驗，繼以兩兩組間比較。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠左側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化 與等滲鹽水組比較，三陰交組、關(guān)元組體表溫度變化在針刺即刻至5 min時顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組比較，三陰交組在針刺即刻至5 min時顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 大鼠右側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化 與等滲鹽水組比較，三陰交組在5～10 min時間段顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與模型組比較，三陰交組體表溫度變化在5～10 min、20～30 min時間段顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與關(guān)元組比較，三陰交組在5～10 min，20～30 min時間段顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

2.3 大鼠左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化 等滲鹽水組、模型組、三陰交組和關(guān)元組左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度變化在各時間段差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表3。

2.4 大鼠右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化 與等滲鹽水組比較，模型組在30～40 min時體表溫度變化顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，三陰交組分別在即刻至5 min時下降，5～10 min時間段升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，關(guān)元組在即刻至5 min時下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與模型組比較，三陰交組分別在即刻至5 min時下降，在5～10 min和30～40 min時均升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與關(guān)元組比較，三陰交組在即刻至5 min時下降，5～10 min時升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。見表4。

2.5 大鼠關(guān)元穴區(qū)體表溫度的變化 等滲鹽水組、模型組、三陰交組和關(guān)元組關(guān)元穴區(qū)體表溫度變化在各時間段差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表5。

表1 大鼠左側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 1 Skin temperature changes in the left SP6 induced by needling different acupoints(，℃)

表1 大鼠左側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 1 Skin temperature changes in the left SP6 induced by needling different acupoints(，℃)

與等滲鹽水組比較，*P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05

組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5～10 min 10～20 min 20～30 min 30～40 min 40～50 min 50～60 min等滲鹽水組 8 0.00±0.20 －0.25±0.13 －0.12±0.11 －0.15±0.31 0.03 ±0.22 0.04 ±0.13 0.05 ±0.08 0.06 ±0.12模型組 8 －0.21 ±0.16 －0.38 ±0.17 －0.17 ±0.12 －0.31 ±0.17 －0.13 ±0.13 －0.03 ±0.26 －0.02 ±0.09 －0.09 ±0.14三陰交組 8 －0.10 ±0.47 －0.56 ±0.22*# －0.08 ±0.15 －0.35 ±0.19 0.08 ±0.18 0.03 ±0.17 0.07 ±0.16 0.01 ±0.18關(guān)元組 8 －0.23 ±0.18 －0.48 ±0.11* －0.07 ±0.10 －0.29 ±0.09 －0.09 ±0.07 －0.05 ±0.12 －0.01 ±0.15 －0.09 ±0.11

表2 大鼠右側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 2 Skin temperature changes in the right SP6 induced by needling different acupoints(，℃)

表2 大鼠右側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 2 Skin temperature changes in the right SP6 induced by needling different acupoints(，℃)

與等滲鹽水組比較，*P ＜0.01;與模型組比較，#P ＜0.01;與關(guān)元組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5～10 min 10～20 min 20～30 min 30～40 min 40～50 min 50～60 min等滲鹽水組 8 －0.03±0.13 －0.20±0.17 －0.05±0.12 －0.05±0.14 －0.06±0.20 0.01±0.18 －0.03 ±0.17 －0.01±0.15模型組 8 －0.22 ±0.10 －0.23 ±0.29 －0.14 ±0.21 －0.30 ±0.26 －0.16 ±0.19 －0.11 ±0.26 0.02 ±0.14 －0.15 ±0.35三陰交組 8 －0.16 ±0.40 －0.25 ±0.32 0.49 ±0.35*#△△ －0.11 ±0.41 0.14 ±0.25#△ 0.05 ±0.17 －0.02 ±0.09 －0.10 ±0.25關(guān)元組 8 －0.20±0.38 －0.40±0.25 －0.06±0.14 －0.32±0.18 －0.09±0.15 －0.12±0.25 －0.06±0.23 －0.06±0.18

表3 大鼠左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 3 Skin temperature changes in the left SP10 induced by needling different acupoints(，℃)

表3 大鼠左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 3 Skin temperature changes in the left SP10 induced by needling different acupoints(，℃)

組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5～10 min 10～20 min 20～30 min 30～40 min 40～50 min 50～60 min等滲鹽水組 8 －0.22±0.14 －0.26±0.18 －0.16±0.10 －0.21±0.21 －0.05±0.09 －0.04±0.15 －0.01±0.10 －0.04±0.08模型組 8 －0.34 ±0.31 －0.37 ±0.26 －0.21 ±0.07 －0.19 ±0.29 －0.16 ±0.13 －0.21 ±0.25 －0.07 ±0.12 －0.02 ±0.15三陰交組 8 －0.27±0.21 －0.39±0.28 －0.35±0.24 －0.17±0.18 －0.11±0.19 －0.03±0.19 －0.02±0.16 －0.06±0.13關(guān)元組 8 －0.28 ±0.16 －0.45 ±0.12 －0.22 ±0.10 －0.35 ±0.18 －0.11 ±0.11 －0.07 ±0.16 －0.05 ±0.16 －0.08 ±0.06

表4 大鼠右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 4 Skin temperature changes in the right SP10 induced by needling different acupoints(，℃)

表4 大鼠右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 4 Skin temperature changes in the right SP10 induced by needling different acupoints(，℃)

與等滲鹽水組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01;與關(guān)元組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5min 5～10min 10～20min 20～30min 30～40min 40～50min 50～60min等滲鹽水組 8 －0.19±0.18 －0.21±0.19 －0.11±0.12 －0.17±0.11 －0.12±0.15 －0.05±0.11 0.04±0.25 －0.06±0.18模型組 8 －0.11±0.18 －0.38±0.15 －0.18±0.14 －0.30±0.19 －0.27±0.40 －0.30±0.26* －0.08±0.19 －0.05±0.07三陰交組 8 －0.23±0.95 －0.64±0.21＊＊#△ 0.18±0.20＊＊##△△ －0.41±0.30 －0.10±0.19 －0.03±0.11## －0.05±0.18 －0.10±0.15關(guān)元組 8 －0.02±0.25 －0.45±0.13* －0.15±0.08 －0.42±0.12 －0.13±0.13 －0.15±0.15 －0.14±0.29 －0.10±0.16

表5 大鼠關(guān)元穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 5 Skin temperature changes in the CV4 induced by needling different acupoints(，℃)

表5 大鼠關(guān)元穴區(qū)體表溫度的變化(，℃)Table 5 Skin temperature changes in the CV4 induced by needling different acupoints(，℃)

組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5～10 min 10～20 min 20～30 min 30～40 min 40～50 min 50～60 min等滲鹽水組 8 －0.21±0.23 －0.30±0.21 －0.13±0.14 －0.25±0.26 －0.17±0.13 0.03±0.10 －0.03±0.11 －0.26±0.49模型組 8 －0.27 ±0.20 －0.41 ±0.20 －0.15 ±0.13 －0.33 ±0.20 －0.14 ±0.19 －0.15 ±0.24 －0.07 ±0.11 －0.15 ±0.18三陰交組 8 －0.26±0.20 －0.44±0.28 －0.13±0.18 －0.39±0.23 －0.22±0.20 －0.05±0.17 －0.04±0.15 －0.06±0.16關(guān)元組 8 －0.42±0.42 －0.43±0.36 －0.10±0.16 －0.38±0.30 －0.20±0.06 －0.12±0.15 －0.02±0.15 －0.14±0.13

3 討 論

本研究采用的寒凝證類痛經(jīng)大鼠模型是基于對以往寒凝證動物模型制備方法的綜合評價與選擇［4－8］，結(jié)合類痛經(jīng)大鼠模型的制備方法［9］，通過預(yù)實驗中對制備模型的溫度和時間進行摸索，對－15℃條件下冷凍5、10 d以及－25℃條件下冷凍5、10 d的大鼠體征及血流動力學指標進行分析，結(jié)果顯示在－25℃的低溫冰柜中冷凍4 h，連續(xù)冷凍5 d的方法，從動物的全身表征和血流動力學上均更加符合中醫(yī)寒凝證的特點［10］。類痛經(jīng)模型的建立是基于苯甲酸雌二醇可以增強子宮活動，以及提高子宮平滑肌對縮宮素的敏感性，縮宮素可致子宮平滑肌收縮，引起疼痛反應(yīng)，該造模方法更加符合人類原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病機制。故將寒凝證與類痛經(jīng)模型的制備方法結(jié)合起來制備寒凝證類痛經(jīng)大鼠模型。

趙商勛等［11］對臨床上治療原發(fā)性痛經(jīng)的穴位使用頻次進行整理，發(fā)現(xiàn)三陰交、關(guān)元是臨床治療原發(fā)性痛經(jīng)的首選穴位。針刺三陰交穴可調(diào)理肝脾腎，消除或減輕疼痛。關(guān)元可調(diào)整肝脾腎三經(jīng)［12］。現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)現(xiàn)，支配三陰交穴的神經(jīng)節(jié)段分布在L3－L6［13］，支配關(guān)元穴的神經(jīng)節(jié)段分布在 L1－L6［14］，三陰交穴與關(guān)元穴具有相同的神經(jīng)節(jié)段支配。因此本研究選擇針刺三陰交、關(guān)元，觀察三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)、關(guān)元穴區(qū)的體表溫度變化，進而探討針刺在調(diào)節(jié)不同經(jīng)穴溫度變化上的規(guī)律與差異，以及針刺后是否引起經(jīng)脈循行線上穴區(qū)溫度的循經(jīng)性升高或降低規(guī)律，針刺近端穴位和遠端穴位誘發(fā)循經(jīng)性溫度變化的差異。

相關(guān)文獻報道，針刺可調(diào)節(jié)穴位的體表溫度，穴位體表溫度的變化具有循經(jīng)性的特點［15－17］。張學勛等［18］對30例單純性周圍性面癱患者針刺“腿面頰”穴，得氣后，觀察患者面部迎香、巨髎兩穴的皮膚溫度變化，進一步說明針刺穴位后的得氣與療效的關(guān)系。王艷君等［19］觀察普通針刺手法、平補平瀉手法針刺健康人左側(cè)曲池穴后，同側(cè)商陽穴和對側(cè)少商穴在針刺前后不同時間點的溫度變化，進而說明不同針刺手法對穴位皮膚溫度的影響，發(fā)現(xiàn)穴位皮膚溫度的變化不僅具有循經(jīng)性，而且具有全身性的特點。

本研究中，即刻－5 min時間段，三陰交組、關(guān)元組左側(cè)三陰交穴區(qū)，右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度變化下降，5－10 min時間段，三陰交組右側(cè)三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)體表溫度變化升高，20－30 min時間段，三陰交組右側(cè)三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)體表溫度升高，30－40 min時間段三陰交組右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度變化升高。分析認為針刺即刻的降溫效應(yīng)是針刺作為一種痛刺激，引起了交感神經(jīng)反應(yīng)，微小血管收縮，穴位局部血流量下降。繼之的升溫效應(yīng)，認為隨著針刺時間的延長，針刺的治療效應(yīng)逐步顯現(xiàn)，抑制了交感神經(jīng)的興奮性活動，使之興奮性降低，引起局部血管舒張，血流量增加，局部穴區(qū)及循經(jīng)穴區(qū)的溫度升高，說明針刺的后效應(yīng)具有一定的時間效應(yīng)。

中醫(yī)經(jīng)絡(luò)理論認為針刺某一穴位可以引起遠離針刺部位的某些效應(yīng)［20］。呂證寶等［21］的臨床研究發(fā)現(xiàn)針刺得氣后在經(jīng)脈循行的路徑上有高溫帶的出現(xiàn)。故針刺的循經(jīng)性溫度變化被認為是得氣的一種表現(xiàn)。本研究中，三陰交組右側(cè)三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)在5－10 min時間段出現(xiàn)顯著的升溫現(xiàn)象，而關(guān)元組各穴位溫度變化無明顯差異。故將相同經(jīng)脈上2個穴位在同時間段的升溫效應(yīng)作為針刺循經(jīng)性的一種表現(xiàn)，不僅為從動物實驗角度說明得氣提供了依據(jù)，同時證實了遠端穴位較近端穴位更易誘發(fā)循經(jīng)性反應(yīng)。針刺后，穴區(qū)體表溫度在60 min內(nèi)的動態(tài)變化，反應(yīng)了針刺對穴區(qū)體表溫度的影響規(guī)律。

經(jīng)穴特異性主要反映在兩個層面:一是經(jīng)絡(luò)與經(jīng)絡(luò)之間存在一定的特異性;二是同一經(jīng)絡(luò)上的每個腧穴具有各自的特性。劉俊嶺等［22］發(fā)現(xiàn)電針“三陰交”和“合谷”穴可興奮子宮平滑肌的電活動，三陰交穴作用更強，而電針“內(nèi)關(guān)”穴則抑制子宮肌的電活動。趙艷玲等［23］發(fā)現(xiàn)四白、地倉穴均對胃肌電有調(diào)整作用，而四白穴作用優(yōu)于地倉穴，提示同一經(jīng)脈上的不同穴位對相關(guān)臟腑的影響存在一定的差異性。本實驗中三陰交組三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)的體表溫度變化較關(guān)元組明顯，進一步說明了不同經(jīng)穴產(chǎn)生的效應(yīng)不同，從而證實了經(jīng)穴的特異性理論。

綜上所述，針刺后穴區(qū)溫度具有循經(jīng)動態(tài)變化的特點，不同經(jīng)穴具有不同的變化規(guī)律，可用于進一步評價針刺特點。

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