臍帶血標(biāo)本用于檢測新生兒溶血三項的臨床價值

沈美萍，陳士華

(平湖市第一人民醫(yī)院，浙江 平湖 314200)

臍帶血標(biāo)本用于檢測新生兒溶血三項的臨床價值

沈美萍，陳士華

(平湖市第一人民醫(yī)院，浙江 平湖 314200)

目的：分析新生兒臍帶血與靜脈血對其溶血病(HDN)檢測結(jié)果有無差異。方法對O型孕婦(丈夫非O型)進(jìn)行產(chǎn)前IgG溶血性抗體效價的測定，對效價≥1∶128的孕婦，在分娩時留取新生兒臍帶血，同時采集出生后1～2天和3～4天、5～7天靜脈血，進(jìn)行新生兒溶血三項(直接抗人球蛋白試驗、游離抗體試驗和放散試驗)檢測并比較。結(jié)果同一患兒臍帶血與出生后1～2天采集靜脈血檢測結(jié)果無差異，與出生后3～4天、5～7天采集的靜脈血檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論臍帶血和靜脈血雖均可作為新生兒溶血病的檢測，但臍帶血陽性率高，而且取材方便，便于早診斷早治療，可作為診斷HDN的首選標(biāo)本。

新生兒溶血??；溶血三項試驗；臍帶血；靜脈血；IgG抗體效價

Abstract： [Objective] To analyze the differences of umbilical cord blood and veinal blood in testing neonatal hemolysis. [Method] Prenatal determination of IgG antibody titer was tested in pregnant women with O-type blood (husband with non-O). For pregnant women with titer ≥1∶128, newborn cord blood specimens were collected in childbirth, meanwhile veinal blood were collected 1-2 days, 3 - 4 days, 5-7 days after born. The direct antiglobin test、indirect antiglobulin test and elution test were carried out to detect neonatal hemolysis with above blood specimens. [Result] There are no difference between cord blood and veinal blood that collected 1-2 days after born.There are significant difference between cord blood and veinal blood that collected 3-4 days or 5-7 days after born. [Conclusion] Although umbilical cord blood and venous blood can be used as the specimens for detection of hemolytic disease of the newborn, cord blood had higher positive rate and drawing convenience, ease of early diagnosis and treatment. It can be used as the preferred diagnostic specimens.

Keywords: hemolytic disease of newborn; hemolytic three test; umbilical cord blood; venous blood; IgG antibody titer

新生兒溶血病(Hemolytic Disease of Newborn，HDN)一般特指母嬰血型不合，母體內(nèi)的IgG溶血性抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒及新生兒血液循環(huán)，引起胎兒及新生兒紅細(xì)胞破壞的被動免疫性溶血性疾病[1]。HDN主要包括ABO血型系統(tǒng)和RH系統(tǒng)不合的溶血，在我國以ABO溶血病為主[2]。近年來在新生兒溶血病防治方面的進(jìn)展已使該病的嚴(yán)重性和預(yù)后有了明顯改善，但它仍是新生兒期黃疸和貧血的重要原因。本文探究新生兒臍帶血與靜脈血對溶血三項(直接抗人球蛋白、游離抗體、放散試驗)結(jié)果的異同，以尋找一種準(zhǔn)確、方便、快速的標(biāo)本來檢測新生兒溶血病。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年6月至2013年3月在我院產(chǎn)前檢查、分娩的O型產(chǎn)婦(丈夫非O型)及其分娩的新生兒114例，已排除母嬰血型相同的標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑

新生兒血型檢測卡、新生兒溶血病胎(嬰)兒不完全抗體檢測卡、酸放散試劑盒、HDN母體IgG抗體效價檢測卡、0.2mol/L 2-巰基應(yīng)用液、免疫微柱孵育器、血型血清學(xué)離心機(jī)均由長春博訊生物技術(shù)有限公司提供。ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞為上海血液生物公司提供。膽紅素試劑由日本和光株式會社提供。

1.3 方法

參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[3]及試劑盒說明書。采集孕周20周以上的孕婦靜脈血進(jìn)行IgG抗體效價測定，選擇效價≥1∶128的孕婦，在分娩時留取新生兒臍帶血和靜脈血，均用EDTA抗凝進(jìn)行溶血三項的檢測，并對溶血三項陽性的新生兒追蹤高膽紅素血癥的發(fā)生率。

1.4 診斷標(biāo)準(zhǔn)

(1)HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：母嬰血型不合；抗體放散試驗和直接抗人球蛋白試驗其中一項陽性者；發(fā)生高膽紅素血癥為臨床型，否則為亞臨床型；(2)足月新生兒高膽紅素血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：24h內(nèi)>103μmol/L；48h內(nèi)>154μmol/L；3天以上>220.6μmol/L；主要為間接膽紅素。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，采用χ2檢驗和Fisher確切檢驗法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臍帶血與不同采集時間靜脈血的溶血三項陽性結(jié)果比較

60例新生兒的臍帶血與其出生1～2天時的靜脈血比較溶血三項陽性率，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2分別為0.817、0.034、0.358，P>0.05)。同理，33例新生兒的臍帶血與其出生3～4天時的靜脈血比較這三項的陽性率，直抗試驗和游離抗體在這組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.108、0.783)。放散試驗結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.024)。21例新生兒的臍帶血與其出生5～7天時的靜脈血比較，游離抗體在這組間差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.159)。直抗試驗和放散試驗有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.021、0.004)。結(jié)果見表1。

表1臍帶血與不同采集時間靜脈血的溶血三項陽性結(jié)果[N(%)]

檢測項目臍血靜脈血(1～2天)N=60臍血靜脈血(3～4天)N=33臍血靜脈血(5～7天)N=21直抗試驗 (+)12(20．0)11(18．3)9(27．3)3(9．1)6(28．5)0(0．0)游離抗體試驗(+)25(41．7)25(41．7)10(30．3)8(24．2)8(38．1)3(14．3)放散試驗 (+)36(60．0)31(51．7)22(66．7)13(39．4)13(61．9)3(14．3)

2.2 臍帶血與不同采集時間靜脈血檢測診斷HDN結(jié)果的比較

分別用114例新生兒臍帶血與靜脈血檢測溶血三項，根據(jù)診斷HDN的血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，相同結(jié)果92例，HDN陽性52例，不同結(jié)果22例。經(jīng)四格表配對比較χ2檢驗，后2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 114例患兒分別采取臍帶血和靜脈血檢測診斷HDN的結(jié)果比較

臍帶血靜脈血(1～2天)+-靜脈血(3～4天)+-靜脈血(5～7天)+-合計+35414831074-0210110840合計35251419318114

注: χ2分別為2.25(P>0.05)，6.125(P<0.05)、8.1(P<0.05)。 “+”表示確診HDN陽性，“-”表示確診HDN陰性。

3 討論

當(dāng)胎兒紅細(xì)胞所具有的血型抗原為母體所缺少時， 胎兒紅細(xì)胞通過胎盤進(jìn)入母體循環(huán)，可使母體產(chǎn)生對胎兒紅細(xì)胞抗原相應(yīng)的抗體，此抗體又經(jīng)胎盤循環(huán)作用于胎兒紅細(xì)胞導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞產(chǎn)生溶血，可致早期流產(chǎn)或新生兒黃疸、貧血、肝脾腫大，嚴(yán)重者可有核黃疸，甚至死亡[6]。核黃疸一旦發(fā)生，其治療效果甚微，僅能以預(yù)防為主，因此，對ABO-HDN的早期診斷和早期治療具有重要意義。

傳統(tǒng)的ABO-HDN診斷方法是在患兒出現(xiàn)黃疸后查母嬰血型，血型不合再查溶血三項，若確診再進(jìn)行治療，往往已在出生后2～3天，其治療效果明顯低于48h內(nèi)進(jìn)行干預(yù)者[7]。再者HDN的臨床表現(xiàn)輕重不一，輕癥僅出現(xiàn)輕度黃疸，臨床上對沒有明顯溶血征象的新生兒并不采取特殊干預(yù)，易被視為生理黃疸而漏診，可能造成新生兒神經(jīng)系統(tǒng)不可逆損傷。所以為避免HDN的漏診和誤診，我們在孕婦圍產(chǎn)期體檢時就檢查夫妻血型，當(dāng)孕婦為O型，其丈夫非O型時，用微柱凝膠法進(jìn)行IgG抗A(B)的抗體效價測定。因微柱凝膠法比經(jīng)典的抗人蛋白法敏感，以1∶128效價作為臨界值有臨床意義[8]。故選擇抗體效價≥1∶128的孕婦分別在分娩時留取臍帶血，在新生兒出生1～7天中采集靜脈血進(jìn)行溶血三項測定，對比這2種標(biāo)本在溶血三項結(jié)果上的差異。

從表1可知，新生兒的臍帶血與其靜脈血在進(jìn)行游離抗體檢測時，3組的陽性率均無差異，直抗試驗在最后一組有統(tǒng)計學(xué)意義，而放散試驗在后2組的陽性率比較均有統(tǒng)計學(xué)意義。由于游離抗體試驗只能確定血清中存在與其紅細(xì)胞不配合的血型抗體，還不能證實其紅細(xì)胞被致敏，放散試驗是三項試驗中敏感度最高的一項試驗，是判斷新生兒溶血最有力的證據(jù)[9]，同時也是直抗試驗的放大試驗。因此這2項的陽性與否關(guān)系到HDN的診斷，及早采集標(biāo)本進(jìn)行檢測顯得尤為重要。

從表2可知，2類標(biāo)本在比較血清學(xué)診斷HDN的結(jié)果中有92例相同，22例結(jié)果不同，其中同時診斷HDN陽性52例。這52例患兒中，發(fā)生高膽紅素血癥29例，其余23例患兒未出現(xiàn)黃疸或黃疸癥狀較輕未達(dá)到高膽紅素血癥的標(biāo)準(zhǔn)。由于HDN臨床癥狀的輕重取決于抗原性的強(qiáng)弱、個體的免疫反應(yīng)、胎兒的代償能力和產(chǎn)前的干預(yù)措施等，所以可以出現(xiàn)血清學(xué)診斷陽性而無臨床表現(xiàn)的現(xiàn)象，這符合ABO-HDN的臨床特點。22例不同檢測結(jié)果主要表現(xiàn)為臍帶血檢測時陽性，而靜脈血為陰性。其中有2例在第6天出現(xiàn)高膽紅素血癥。分析其原因可能是在采集新生兒靜脈血時，由于采集難度較高，血量未采足，抗體量太少而導(dǎo)致結(jié)果假陰性；還有隨著出生時間的延長，IgG抗體與患兒紅細(xì)胞的結(jié)合及消耗，HDN的檢出率也會隨之下降。

綜上所述，我們在進(jìn)行溶血三項測定時，一定要重視標(biāo)本的采集因素，確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。對于有臨床表現(xiàn)而溶血三項試驗陰性者，就要考慮是否因為疾病的發(fā)展而導(dǎo)致溶血性抗體消耗以致檢測結(jié)果假陰性還是其他疾病導(dǎo)致的溶血病。筆者認(rèn)為，不能以患兒出現(xiàn)病理性黃疸后再考慮篩查ABO-HDN，而應(yīng)該在產(chǎn)前母體IgG抗體效價升高及母嬰血型不合時，盡早采集標(biāo)本，盡快篩查HDN。臍帶血采血容易，檢測結(jié)果準(zhǔn)確，陽性率高，能給HDN的早期診斷提供可靠依據(jù)，可作為診斷HDN的首選標(biāo)本。一旦血清學(xué)檢測陽性，密切監(jiān)護(hù)病情，及早采取干預(yù)措施，以達(dá)到不發(fā)病或減輕癥狀的目的，真正實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。

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Clinicalvalueofumbilicalcordbloodfortestingthreeindexofneonatalhemolysis

SHENMeipingCHENShihua

(The First People's Hospital of Pinghu， Zhejiang 314200，China)

R722.18

B

1672-0024(2014)02-0048-03

沈美萍(1971-)，女，浙江平湖人，本科，副主任技師。研究方向：臨床檢驗與輸血檢驗

平湖市科技計劃項目(編號：2013-067)