王永梅,張玉璞,張昌壯,劉麗竹,高文全,劉亞平,張曉
(吉林省煙草產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站)
測(cè)量不確定度評(píng)定[1-2]是計(jì)量認(rèn)證和國(guó)家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可評(píng)審的重點(diǎn)內(nèi)容.煙草質(zhì)檢機(jī)構(gòu)已經(jīng)開(kāi)展多個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的不確定度評(píng)定[3-7].近年來(lái),卷煙主流煙氣中有害成分引起行業(yè)內(nèi)外的關(guān)注,相應(yīng)的不確定度工作逐步開(kāi)展[8-13].苯并[a]芘是從卷煙主流煙氣中鑒定出的第一種致癌成分,國(guó)家已制訂標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其測(cè)定.對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的測(cè)定過(guò)程進(jìn)行不確定度評(píng)定.
卷煙主流煙氣總粒相物中苯并[a]芘的含量.
GB/T19609-2004《卷煙用常規(guī)分析用吸煙機(jī)測(cè)定總粒相物和焦油》;
GB/T 21130-2007《卷煙煙氣總粒相物中苯并[a]芘的測(cè)定》.
環(huán)己烷(色譜純);甲醇(色譜純).
苯并[a]芘(P為98.0% ±0.3%,k=2);12-苯并[a]芘(P為98.0% ±0.3%,k=2).
氣相 -質(zhì)譜聯(lián)用儀,美國(guó) Agilent公司7890A/5975C;吸煙機(jī)Cerulean SM450;可調(diào)移液器,德國(guó)Brand;天平,德國(guó)賽多利斯公司BS124S(準(zhǔn)確度0.0001g).
按GB/T 19609要求,收集20支卷煙總粒相物.
配制100μg/mL苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及6.5μg/mLD12-苯并[a]芘內(nèi)標(biāo)添加液.用環(huán)己烷稀釋成三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)母液(見(jiàn)5.1.2),再配制各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(見(jiàn)表1),準(zhǔn)確移取50μL內(nèi)標(biāo)添加液至每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液.
將收集總粒相物的濾片放入錐形瓶,加入50 μL內(nèi)標(biāo)添加液,40 mL環(huán)己烷,超聲萃取40 min,靜置.取5~10mL環(huán)己烷活化萃取柱.移取10mL萃取液至萃取柱,分2次加入30 mL環(huán)己烷洗脫,收集洗脫液,55℃下濃縮至約0.5 mL,待GC/MS分析.
表1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制表
進(jìn)樣口溫度:280℃;電離方式:EI;離子源溫度:230℃;傳輸線溫度:280 ℃;進(jìn)樣量:2 μL;無(wú)分流進(jìn)樣;載氣:氦氣,恒流流速1.2 mL/min;DB-5MS色譜柱:初始溫度150℃,升溫速率6℃/min至260℃,再以升溫速率 2℃/min至280℃,保持20 min.溶劑延遲:15 min;掃描方式:SIM,苯并[a]芘監(jiān)測(cè)離子為252,D12-苯并[a]芘的監(jiān)測(cè)離子為262,對(duì)每個(gè)離子的監(jiān)測(cè)時(shí)間為50 ms.
苯并[a]芘釋放量計(jì)算公式:m=(A/As-b)*ms/an
式中:m-每支卷煙苯并[a]芘量,ng/cig;a,b-由線性回歸方程求出;
ms-樣品溶液中內(nèi)標(biāo)量,ng;A-苯并[a]芘峰面積;As-內(nèi)標(biāo)峰面積;
n-煙支數(shù)量,cig.
不確定度來(lái)源分析如圖1所示.
圖1 氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定主流煙氣總粒相物中苯并[a]芘的不確定度來(lái)源分析圖
來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液制備和將其稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的過(guò)程.
5.1.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液
準(zhǔn)確稱取純度為98.0% ±0.3%,k=2的苯并[a]芘10 mg,置于100 mL容量瓶,用甲苯定容得到濃度為0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液.數(shù)學(xué)模型:
式中:c1-苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度,mg/mL;m1-苯并[a]芘純品質(zhì)量,mg;P -苯并[a]芘純度,%;V1-標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液定容體積,mL.
5.1.1.1 m1引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度
天平計(jì)量證書(shū)標(biāo)明其最大允差為0.2 mg,重復(fù)性為0.1 mg.假定為矩形分布,換算成標(biāo)準(zhǔn)不確定度:凈重由兩次稱量所得,一次為皮重,一次為毛重,每次稱重均為獨(dú)立結(jié)果,故計(jì)算兩次.稱取10 mg樣品引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度:
5.1.1.2 P引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度
5.1.1.3 V1引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度
計(jì)量證書(shū)標(biāo)明,100 mL容量瓶擴(kuò)展不確定度U(k=2)=0.067 mL,則標(biāo)準(zhǔn)不確定度:
0.00034.故標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液引入相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度:
5.1.2 稀釋過(guò)程引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度
用移液管移取V21=5.00 mL苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,置于V22=50 mL容量瓶,配制濃度10 μg/mL一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液;再移取 V23=5.00 mL一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于V24=50 mL容量瓶,配制濃度1.0μg/mL二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液;最后移取 V25=5.00 mL二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于 V26=50 mL容量瓶,配制濃度為0.1 μg/mL三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液.
5.1.2.1 移液管引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度
由計(jì)量證書(shū)可知其擴(kuò)展不確定度U/mL
5.1.2.2 容量瓶引入標(biāo)準(zhǔn)不確定度
將總粒相物引入的不確定度作為抽吸過(guò)程引入的不確定度.取同一樣品做11次平行實(shí)驗(yàn),得到總粒相物的數(shù)據(jù)分別為(mg):11、10.9、10.42、10.42、10.55、10.55、10.65、10.68、10.75、10.8、10.88;根 據(jù) 公 式 um2=;其中n=11,ˉx=10.69 mg,得到 um2=0.0182 mg.m2=10.69 mg,故 urel(m2)
內(nèi)標(biāo)添加液濃度在一定范圍內(nèi)的變動(dòng)對(duì)測(cè)量結(jié)果沒(méi)有影響,而移取到萃取液中的內(nèi)標(biāo)添加液的體積會(huì)引入不確定度.
5.3.1 校準(zhǔn)的影響
移液器計(jì)量證書(shū)標(biāo)明,100 μL可調(diào)移液器取50 μL樣品時(shí)容量允差ΔV3為 ±0.65%,取矩形分布,則
5.3.2 溫度的影響
移液器計(jì)量證書(shū)標(biāo)明實(shí)驗(yàn)溫度為19.6℃,檢定介質(zhì)為水(膨脹系數(shù)為:0.00177℃-1),因此產(chǎn)生體積變化(V3×0.4×0.00177)=0.00071 V3,假定為矩形分布,則 u2(V3)=
空白樣品溶液中苯并[a]芘濃度可反映樣品在前處理過(guò)程中受到粘污的情況.本實(shí)驗(yàn)中11個(gè)空白樣品均無(wú)目標(biāo)物檢出.因此,樣品空白變動(dòng)性的影響忽略不計(jì).
工作標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與內(nèi)標(biāo)物含量比值及測(cè)得的色譜峰面積比值見(jiàn)表2.
表2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與內(nèi)標(biāo)物含量的比值及測(cè)得的色譜峰面積比值
將表中各點(diǎn)線性擬合,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:Y=1.6504X - 1.92 × 10-2;R2=0.9995.樣品溶液測(cè)量重復(fù)2次,通過(guò)方程求得樣品溶液中苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)物含量比值c2=0.2445(相當(dāng)于苯并[a]芘含量為4.89 ng/cig).c2的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(c2)可用標(biāo)準(zhǔn)曲線縱坐標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)差sc2表示,采用公式(1)計(jì)算:
式中:sA—校準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)差,由公式(2)計(jì)算;
P—樣品溶液測(cè)定次數(shù),P=2;
n—標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定總次數(shù),n=6;
b—標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率,值為1.6504;
a—校準(zhǔn)曲線截矩,值為 -0.0192;
c0—由校準(zhǔn)曲線方程求得的樣品溶液中苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)含量比值;
ˉc—不同標(biāo)準(zhǔn)溶液中苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)含量比值平均值;
ci—不同濃度水平標(biāo)準(zhǔn)溶液中苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)含量比值;
cj—不同苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出的苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)含量比值;
Ai—單次苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值.
將數(shù)據(jù)代入公式,求得sA=0.0269;u(c2)
為避免重復(fù)引入和計(jì)算方便,將定量加液器、移液槍的重復(fù)性分量合并為總測(cè)量過(guò)程的分量,由測(cè)量結(jié)果的重復(fù)性表示.取同一批空白玻璃濾片11份,向空白樣品中加入已知量的苯并[a]芘與內(nèi)標(biāo)混合液,按照相同程序進(jìn)行處理及測(cè)量,結(jié)果分別為(ng/cig):4.506、4.2、4.463、4.513、4.656、4.719、4.506、4.481、4.656、4.556、4.863.平均值(ng/cig):4.556;單次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)差s(ng/cig):0.1699.測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度由s表示:
該測(cè)量方法的方法回收率主要來(lái)源于樣品萃取、純化、濃縮過(guò)程的損失或污染及轉(zhuǎn)移過(guò)程的損失等.本實(shí)驗(yàn)回收率為96.08% ~107.20%,樣品回收率的不確定度按照 JJF1059-1999《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》計(jì)算[1]:
將測(cè)量結(jié)果的各不確定度分量及大小列于表3.
表3 不確定度分量表
將各不確定度分量合成:
置信度為95%,選擇包含因子k=2,測(cè)量結(jié)果擴(kuò)展不確定度:U = k×uc(w)=0.676 ng/cig.
氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定主流煙氣總粒相物中苯并[a]芘含量為:w=4.89 ng/cig±0.676ng/cig,k=2.由評(píng)定結(jié)果看出,測(cè)量不確定度主要來(lái)源為標(biāo)準(zhǔn)溶液配制,標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合,測(cè)量重復(fù)性及方法回收率.
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