郭毅新，張元杰，丁 濤，來國防

(1.云南省食品藥品檢驗所，云南昆明650011;2.永城職業(yè)學(xué)院，河南永城476600)

雙氫青蒿素哌喹片是雙氫青蒿素與磷酸哌喹組成的復(fù)方劑型，本品種臨床定位適用于各種類型瘧疾，為目前國際上最有效的抗瘧藥之一。為保障用藥安全，全面評價該藥品質(zhì)量，2012年度被列入國家評價性抽樣品種?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)采用紫外－分光光度法測定其含量，由于紫外－分光光度法測定易受外界干擾，造成測定結(jié)果不準(zhǔn)確。本文參考相關(guān)文獻［1～5］，采用高效液相色譜方法，考察了不同填料色譜柱，不同流動相對磷酸哌喹的分離行為，并對優(yōu)選出的高效液相色譜測定磷酸哌喹方法進行了方法學(xué)考察及樣品的測定，結(jié)果該方法操作方便，色譜峰對稱性好，測定結(jié)果重現(xiàn)性好，能有效控制本產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀(美國沃特世公司);AL204型電子天平(Mettler Toledo)。磷酸哌喹對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:10751－200501，純度 91.2%)，乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，三氯乙酸、磷酸為分析純。雙氫青蒿素哌喹片(規(guī)格:每片含雙氫青蒿素40 mg，磷酸哌喹0.32 g，重慶市某制藥公司提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Watres Symmetry RP18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1% 三氯乙酸 － 磷酸(19∶81∶0.035)，檢測波長:349 nm;柱溫:30 ℃;流速:1.0 mL·min－1;進樣量:20 μL。

圖1 對照品圖譜

圖2 樣品圖譜中磷酸哌喹

2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細，混勻，取8 mg，精密稱定，置10 mL容量中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液3 mL置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 對照品溶液制備 精密稱取磷酸哌喹對照品適量，加流動相制成每1 mL含磷酸哌喹15 μg的溶液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取磷酸哌喹對照品5.57 mg，至10 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL至100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，精密量取5、10、20、40、60 μL 注入液相色譜儀，進行測定，以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以最小二乘法計算得回歸方程:磷酸哌喹:Y=5.049 817×107X－1.839 466×104，在0.003 81～0.038 1 mg·mL－1(r=0.999 9)呈良好線性關(guān)系。

2.5 重復(fù)性試驗 取雙氫青蒿素哌喹片(批號:011011)供試品6份，照“2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL，供試品中磷酸哌喹的含量分別為:0.337、0.336、0.338、0.336、0.337、0.336 g/片。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液于室溫(20～25℃)下放置，分別于0、2、4、6、8 h 精密吸取 20 μL 進樣，測定磷酸哌喹的峰面積，6針峰面積RSD為0.9%，結(jié)果顯示供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 取雙氫青蒿素哌喹片細粉4 mg(批號:011011)9份，精密稱定，分別按其質(zhì)量分數(shù)的80%、100%、120%精密加入磷酸哌喹對照品適量，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，進行測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.8 樣品測定 取本品3批，照“2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法(峰面積)計算樣品中磷酸哌喹的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=2)

3 討論

3.1 色譜柱的考察 考慮到磷酸哌喹為生物堿鹽，極性較大，在一般色譜條件下，保留時間較短。參考相關(guān)文獻選擇氰基柱，以0.04 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液(稀鹽酸調(diào)pH 2.5)－乙腈(90∶10)為流動相進行分離，結(jié)果色譜峰仍有一定的拖尾，隨著磷酸哌喹濃度的增加，拖尾現(xiàn)象加重。

3.2 流動相考察 曾采用乙腈－磷酸二氫鉀，甲醇－磷酸緩沖鹽，甲醇－十二烷基磺酸鈉，乙腈－水(11∶89，每 100 mL 水含三氟乙酸 50 μL，磷酸 40 μL，三乙胺 50 μL)，0.04 mol·L－1磷酸二氫鉀 － 乙腈 －三乙胺(90∶10∶0.2，用磷酸調(diào)節(jié) pH 至2.5)等溶液體系為流動相，但均因磷酸哌喹峰拖尾嚴重，無法準(zhǔn)確定量。

3.3 經(jīng)過反復(fù)試驗，選擇一般C18色譜柱，以乙腈－0.1%三氯乙酸 － 磷酸(19∶81∶0.035)為流動相，色譜峰保留時間合適，峰對稱性好，可以準(zhǔn)確定量。

［1］朱凱，范琦，張小松，等.HPLC測定雙氫青蒿素哌喹片中磷酸哌喹的含量［J］.中國藥學(xué)雜志，2008，43(9):713－714.

［2］李美琴，范琦，張曉松.HPLC同時測定復(fù)方雙氫青蒿素片中磷酸哌喹與甲氧芐啶的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2004，19(3):221 －223.

［3］張小松，江生，毛慶.磷酸哌喹有關(guān)物質(zhì)的檢測研究［J］.中國藥事，2009，23(7):690 －691.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［5］木書林，丁濤，來國防，等.項空氣相色譜法測定雙氫青蒿素哌喹片中乙醇殘留含量［J］.藥學(xué)研究，2013，32(9):504－506.