關(guān)志宇，羅曉健，黃 瀟，楊 輝，楊華生，朱繼孝，程虹毓

(江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌 330004)

現(xiàn)代社會人們生活節(jié)奏快，飲食不規(guī)律，膽、胃疾病患者數(shù)量不斷增多。膽胃通方源自臨床經(jīng)驗(yàn)方，以醋柴胡、麩炒枳實(shí)為主要成分，配以陳皮、香附子等，可用于治療胃炎、膽囊炎疾病，臨床療效較好。為更好的使用和推廣本復(fù)方，進(jìn)行新藥開發(fā)，滿足臨床需要，本實(shí)驗(yàn)探討了其制備工藝，為其進(jìn)一步研究與生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 醋柴胡、麩炒枳實(shí)、陳皮、香附子 (江西樟樹藥材公司，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院諸小蘭教授鑒定為正品藥材)，柚皮苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號110722-200309)，葡萄糖 (中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號110833-200904)，重蒸水 (自制)，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 UV-2100型紫外分光光度計(jì) (日本日立公司)，真空干燥箱-DZF6020(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，RESZD旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (上海青浦滬西儀器廠)，PGL-5B噴霧制粒機(jī) (常州市震華干燥設(shè)備有限公司)，KQ 5200-DA型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝研究

2.1.1 提取方法 每次按照處方量稱取藥材共46.5 g，按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表進(jìn)行試驗(yàn)，加入水回流提取，濾過，合并提取液，定容至300 mL。

2.1.2 總黃酮的測定［1］

2.1.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷對照品5.0 mg，置50 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，即得。

2.1.2.2 最大波長的選擇 精密量取復(fù)方提取液適量，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液在200～600 nm條件下進(jìn)行掃描，結(jié)果提取液與柚皮苷對照品試液在283 nm處均有最大吸收峰，故選擇為測定波長。

2.1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，以甲醇為空白，分別在283 nm處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:Y=0.0304 X－0.022，r2=0.9998。表明柚皮苷在5.0～30.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.2.4 供試品溶液的測定 精密量取提取液適量，置于25 mL量瓶中，加甲醇適量，混勻，定容至刻度，過濾，取續(xù)濾液在規(guī)定波長處測定。

2.1.2.5 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液連續(xù)測定6次，測得吸光度的RSD為0.09%(n=6)。

2.1.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一提取液，按“2.1.2.4”項(xiàng)方法處理6份，測定吸收度，RSD為1.5%(n=6)。

2.1.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一供試品溶液分別于0、1、2、3、6 h測定吸光度，結(jié)果表明供試品在6 h內(nèi)吸光度穩(wěn)定，RSD為1.4%(n=5)。

2.1.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取提取液6份，精密加柚皮苷對照品溶液0.15 mL，依法制備供試品溶液，測定吸光度。結(jié)果加樣回收率RSD為2.1%(n=6)。

2.1.3 總多糖的測定［2］

2.1.3.1 溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對照品10 mg，置于50 mL量瓶中，加重蒸水稀釋至刻度，搖勻，制得0.2 m g/mL葡萄糖貯備液。精密稱取蒽酮100 mg，加80%的硫酸溶液100 mL溶解，即得硫酸蒽酮溶液。

2.1.3.2 最大波長的選擇 將提取液與葡萄糖對照品試液與硫酸蒽酮進(jìn)行顯色反應(yīng)后，在400～700 nm條件下進(jìn)行掃描，結(jié)果提取液與葡萄糖對照品試液在622 nm處均有最大吸收峰。故選擇622 nm為測定波長。

2.1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別吸取葡萄糖貯備液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL置于10 mL量瓶中，加蒸餾水補(bǔ)足至3.0 mL，搖勻，分別加硫酸-蒽酮試劑5.0 mL，混勻后于沸水域中加熱15 min，冰域冷卻，同時(shí)以相應(yīng)空白試液，在622 nm處測吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線為 Y=1.7011 X－0.1372，r2=0.9995，表明葡萄糖在2.5～15 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3.4 供試品的制備 精密量取提取液10 mL，置于燒杯中，加入乙醇適量，使乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，靜置2 h，過濾，藥渣加適量水提取，并濃縮至10 mL，再重復(fù)前述操作1次，靜置過夜，過濾取其沉淀并于40℃減壓干燥后，用適量蒸餾水溶解，精密量取2 mL加入硫酸-蒽酮試劑，按“2.1.3.3”項(xiàng)下操作，測定總多糖。

2.1.3.5 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液連續(xù)測定6次，測得吸光度的RSD為0.11%(n=6)。

2.1.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一提取液，按“2.1.3.4”項(xiàng)方法分別顯色6份，測定吸收度，RSD為1.8%(n=6)。

2.1.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取顯色后同一供試品溶液分別于0、1、2、3、6 h測定吸光度，結(jié)果表明供試品在6 h內(nèi)吸光度穩(wěn)定，RSD為1.2%(n=5)。

2.1.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取提取液10 mL 6份，精密加入葡萄糖貯備液0.2 mL，依法制備供試品溶液，測定吸光度。結(jié)果加樣回收率RSD為2.4%(n=6)。

2.1.4 浸膏得率測定 取“2.1.1”項(xiàng)下提取液30 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，稱定質(zhì)量，計(jì)算浸膏得率。

2.1.5 正交設(shè)計(jì) 按照L9(34)正交設(shè)計(jì)表設(shè)定加水量(A)、提取時(shí)間 (B)、提取次數(shù) (C)三因素及其各水平劃分，詳見表1，正交設(shè)計(jì)安排與結(jié)果見表2。

表1 膽胃通方水提因素水平

表2 正交設(shè)計(jì)安排與結(jié)果

2.1.6 信息熵權(quán)重系數(shù)計(jì)算 采用信息熵權(quán)重分析法［3-5］，按照公式:

計(jì)算確定總黃酮量 (X)、總多糖量 (Y)和浸膏得率(Z)的權(quán)重系數(shù)分別為0.444、0.359、0.197。根據(jù)各指標(biāo)的權(quán)重，計(jì)算多指標(biāo)綜合評分，對正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

綜合評分 =0.444X/5.06+0.359Y/62.90+0.197Z/26.43

2.1.7 正交設(shè)計(jì)結(jié)果分析 對綜合評分進(jìn)行直觀分析、極差分析和方差分析，各因素影響大小為A＞B＞C，因素A各水平間具有顯著性差異，因素B、C各水平間沒有顯著性差異，方差分析見表3，確定最佳提取工藝為A3B3C2，即加10倍的水，提取2次，每次提取1.5 h。

表3 綜合評分方差分析

2.1.8 驗(yàn)證試驗(yàn) 按照最佳提取工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果3次試驗(yàn)綜合評分結(jié)果見表4，表明該提取工藝穩(wěn)定可靠。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.2 噴霧制粒工藝［6-8］

2.2.1 噴霧制粒方法 經(jīng)過處方優(yōu)選，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定采用蔗糖-糊精 (3∶1)為稀釋劑，并作為噴霧制粒底料，設(shè)定物料溫度為 (60±5)℃，將本復(fù)方提取液濃縮到一定密度后噴入，流化制粒一定時(shí)間，以合格顆粒得率 (1號篩和5號篩之間的顆粒質(zhì)量)、外觀和制粒時(shí)間為指標(biāo)比較浸膏 (80℃)在不同工藝參數(shù)條件下的噴霧制粒效果。

2.2.2 浸膏相對密度選擇 根據(jù)設(shè)備性能預(yù)設(shè)初始進(jìn)風(fēng)溫度115℃、蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速60 r/min，考察浸膏相對密度對制粒效果的影響，浸膏相對密度設(shè)置和實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5，確定最佳浸膏相對密度為1.15(80℃)。

表5 浸膏相對密度優(yōu)選實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果

2.2.3 進(jìn)風(fēng)溫度的選擇［9］設(shè)定浸膏相對密度1.15(80℃)、蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速60 r/min，考察進(jìn)風(fēng)溫度對制粒效果的影響，進(jìn)風(fēng)溫度設(shè)置和實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6，確定最佳進(jìn)風(fēng)溫度為120℃。

表6 進(jìn)風(fēng)溫度優(yōu)選試驗(yàn)安排與結(jié)果

2.2.4 蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速的選擇［10］設(shè)定浸膏相對密度1.15(80℃)、進(jìn)風(fēng)溫度120℃，考察蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速對制粒效果的影響，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速設(shè)置和實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7，確定最佳蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速為60 r/min。

表7 蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速優(yōu)選試驗(yàn)安排與結(jié)果

2.2.5 制粒工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 按照浸膏相對密度1.15(80℃)、進(jìn)風(fēng)溫度120℃，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速為60 r/min條件制備顆粒，進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，產(chǎn)品顆粒外觀良好，制粒時(shí)間3 h，成品顆粒得率分別為 97%、96%、96%，RSD為0.58%。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用信息熵綜合評分方法計(jì)算各因素權(quán)重系數(shù)，避免人為因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，相比于平衡評分、比例評分［11］等方法更具客觀性［5］，可較好地解決各因素所占總分比例設(shè)置改變，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果變化的問題。

目前，噴霧制粒方法主要應(yīng)用于中藥顆粒的制備，其產(chǎn)品外觀、圓整度較好，粒徑分布均勻。但影響噴霧制粒效果的因素較多［12］，且各因素間可能存在交互作用，所用設(shè)備在由實(shí)驗(yàn)機(jī)型向中試型、生產(chǎn)型設(shè)備轉(zhuǎn)換時(shí)，參數(shù)設(shè)置變化較大，可能需進(jìn)行多次驗(yàn)證試驗(yàn)或參數(shù)優(yōu)化試驗(yàn)，投料量大，實(shí)驗(yàn)成本高。本實(shí)驗(yàn)采用中試型生產(chǎn)設(shè)備探討制粒工藝，并以節(jié)約成本、降低能耗、提高生產(chǎn)效率為目的設(shè)置考察指標(biāo)，從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)優(yōu)化各主要影響因素的工藝參數(shù)，以滿足實(shí)際生產(chǎn)過程對工藝參數(shù)設(shè)置的實(shí)際需要。

［1］韋黃杰，舒 斌，陳玉俊，等.分光光度法測定化橘紅總黃酮含量［J］.中成藥，2005，27(3):354-355.

［2］戚雁飛.靈芝中靈芝多糖的含量測定研究［J］.中國中藥雜志，2006，31(10):852-853.

［3］楊華生，張 坤，尹小英，等.多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)選羅布麻定時(shí)脈沖片提取工藝［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(12):14-16.

［4］黃定軒.基于客觀信息熵的多因素權(quán)重分配方法［J］.系統(tǒng)工程理論與實(shí)踐，2003，12(4):321-324.

［5］吳 璐，楊華生.基于信息熵理論的中藥提取工藝優(yōu)選［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(9):29-31.

［6］趙文昌，宋麗軍.流化床造粒法制備口炎清顆粒的工藝參數(shù)優(yōu)化［J］.中成藥，2011，33(6):1060-1062.

［7］呂 翼，劉亞妮，陳華庭，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選骨炎寧顆粒的噴霧制粒工藝［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(17):1460-1462.

［8］曲彩紅，楊 莉，黃際薇，等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選保腎顆粒劑噴霧制粒工藝［J］.中國中藥雜志，2005，30(20):1587-1588.

［9］李忠思，劉振華.復(fù)方石韋片的噴霧制粒工藝研究［J］.中草藥，2004，35(10):1128-1129.

［10］鄭建榮，施得波.多參量對流化床噴霧制粒影響的試驗(yàn)研究［J］.醫(yī)藥工程設(shè)計(jì)雜志，2002，23(4):6-9.

［11］關(guān)志宇，王 森，管詠梅，等.黃連軟膏處方優(yōu)化與流變學(xué)考察［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(9):10-13.

［12］鄭建榮.流化床噴霧制粒機(jī)若干機(jī)理的研究［J］.華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，29(1):104-108.