北京市藥品認證管理中心（100053） 石慧

北京軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗所（100071）申睿 雷虹 楊瑩 郭琪△

附圖 HLPC色譜圖 A.樟腦薄和荷腦混合對照品；B.筋骨舒噴霧劑供試品；C.缺樟腦和薄荷腦陰性對照溶液；a.樟腦 b.薄荷腦

筋骨舒噴霧劑是陜西仁康藥業(yè)有限公司西寧分公司研制的產品，處方中含有薄荷腦、樟腦、白芷、雞矢藤、雞血藤、金錢草、桂枝、伸筋草等10味藥，為治療風寒濕邪侵襲人體的肌肉、經絡、筋骨關節(jié)所致的經絡阻滯、四肢拘攣、關節(jié)屈伸不利以及氣血流行不暢引起的筋骨疼痛等癥的中藥制劑。主要用于風濕痛、類風濕性關節(jié)炎、肩周炎以及跌打損傷所致的淤血腫痛等癥。本品不曾建立質量標準。為了有效的進行質量控制，我們對筋骨舒噴霧劑中的薄荷腦和樟腦含量測定進行了研究，建立了氣相色譜儀同時測定薄荷腦和樟腦的方法[1][2]為提高筋骨舒噴霧劑的質量提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent6890氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；電子分析天平(METLILER TOLEDOO-AX205DR)；GN-RO-30型純水機（北京市雙峰純水設備廠）；KQ-300VDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ZF型紫外反射透射分析儀（上?？等A生化儀器制造廠）；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司)。

1.2 試藥 樟腦對照品（供含量測定用，由中國食品藥品檢定研究院提供，批號為110747-200507）、薄荷腦對照品（供含量測定用，由中國食品藥品檢定研究院提供，批號為110728-200508）；筋骨舒噴霧劑由陜西仁康藥業(yè)有限公司生產制備；所用乙醇等化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應性 DB-624毛細管色譜柱(30m×0.53mm,3μm)，氫離子火焰檢測器。程序升溫，初始溫度130℃，保持10分鐘，以5℃/min升至180℃，保持20分鐘。進樣口溫度200℃，F(xiàn)ID檢測器溫度250℃，分流比為18:1，進樣量1μl，采用外標法計算；分別取樣品溶液與陰性對照溶液，進樣1μl，對比樣品溶液與陰性對照溶液的色譜圖，見附圖。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品儲備液的制備 精密稱取薄荷腦、樟腦對照品各25mg置于25ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 供試品儲備液的制備 精密量取本品10ml置于100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方組成，取除薄荷腦、樟腦外的其余藥味，按照筋骨舒噴霧劑制備工藝流程制成不含薄荷腦、樟腦的筋骨舒噴霧劑藥品。

2.3 精密度實驗 精密量取混合對照品儲備液3ml置10ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻得混合對照品溶液。按2.2.1項所述色譜條件，重復進樣6次，測定薄荷腦、樟腦對照品的峰面積，得樟腦、薄荷腦對照品峰面積的RSD值分別為1.2%、1.5%，表明儀器精密度良好。

附表1 加樣回收率實驗結果

附表2 樣品含量測定結果

2.4 線性關系考察 分別精密吸取薄荷腦、樟腦混合對照品儲備液0.5、1、2、3、4、5ml置于10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。分別精密吸取上述對照品溶液1μl注入氣相色譜儀。記錄對照品峰面積，以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，進行線性回歸，得樟腦對照品線性回歸方程y=983.80x+2.6836，r=0.9995（n=6），薄荷腦對照品線性回歸方程為y=979.66x+2.0510,r=0.9995（n=6）,顯示樟腦濃度在0.0515～0.5154mg/ml，薄荷腦濃度在0.0565～0.5654mg/ml范圍內，具有良好的線性關系。

2.5 穩(wěn)定性實驗 取溶液2.2.2項下制備的混合對照品溶液，在2.2.1項下色譜條件，分別在0、1、2、4、6、8、10、12h進樣，測定峰面積，結果得樟腦、薄荷腦對照品面積的RSD均為0.7%，表明對照品溶液在12h內穩(wěn)定。

2.6 重復性實驗 精密量取2.2.2項下供試品儲備液10ml，分別置于50ml容量瓶，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液，平行做6份供試品溶液，按2.2.1項所述色譜條件，測定峰面積，得樟腦平均含量為0.3213mg/ml，RSD=0.6%(n=6)；薄荷腦平均含量為0.2853mg/ml，RSD=0.7%(n=6)，顯示重復性良好。

2.7 加樣回收率實驗 精密量取已知含量的供試品儲備液6份，精密加入1ml對照品溶液于10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，按2.1.1項所述色譜條件，測定樟腦、薄荷腦的峰面積并計算回收率，得樟腦平均回收率為102.6%，RSD=1.4%（n=6)；薄荷腦平均回收率為101.6%，RSD=1.5%(n=6），結果見附表1。

2.8 樣品含量測定 精密量取4批樣品各10ml,置100ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品儲備液，再取10ml供試品儲備液置50ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。吸取上述溶液各1μl注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算，結果見附表2。

3 討論

本實驗曾選用環(huán)己酮[3]作為內標物，按內標法計算樣品含量，結果與外標法計算得到的樣品含量無差別，而外標法操作簡便，快速，通過減少內標物質的使用，減小誤差，且結果準確。所以本實驗采用外標法進行計算。

柱溫是色譜峰分離的一個重要參數(shù)，直接影響分離效果和分析速度。測定樟腦和薄荷腦的含量常采用程序升溫的方法。據(jù)原有色譜條件：程序升溫，初始溫度130℃，保持10分鐘，以5℃/min升至150℃，保持12分鐘。進樣口溫度170℃，F(xiàn)ID檢測器溫度200℃，由此所得樟腦與薄荷腦色譜峰分離度＜1.5，不符合要求。之后修改色譜條件為：程序升溫，初始溫度130℃，保持10分鐘，以5℃/min升至180℃，保持20分鐘[4]。進樣口溫度200℃，F(xiàn)ID檢測器溫度250℃，由此所得色譜圖可以達到各色譜峰基線分離，且分離度 ＞1.5，峰形對稱，重復性好。

薄荷腦和樟腦均易溶解于乙醇、三氯甲烷、乙醚,而本品為含55%乙醇的液體制劑[5][6]，所以采用乙醇做稀釋溶劑。