胡士現(xiàn)，楊 寧，蔣成猛，晏 芳

(昆明源瑞制藥有限公司研發(fā)中心，云南昆明651701)

奧美沙坦酯由日本Sankyo和美國(guó)Forest Laboratories開發(fā)，2002年5月以商品名Benicar在美國(guó)上市，同年8月在德國(guó)獲批準(zhǔn)并在10月初以O(shè)lmetec上市之后得到英國(guó)、奧地利、荷蘭、希臘、西班牙、丹麥、挪威、芬蘭、法國(guó)、比利時(shí)、葡萄牙等多個(gè)歐盟國(guó)家的認(rèn)可，用于治療高血壓。本品上市劑型為片劑，規(guī)格為5 mg、20 mg、40 mg 3種。于2006年8月在我國(guó)上市，商品名“傲坦”。該藥是一種新的血管緊張素Ⅱ受體抑制劑，該藥對(duì)不同程度的高血壓病人均有很好的療效。奧美沙坦酯難溶于水，藥物的溶出直接影響藥物在體內(nèi)的吸收和利用，因此要對(duì)其進(jìn)行溶出度檢測(cè)，溶出度試驗(yàn)技術(shù)不僅已作為評(píng)價(jià)固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段［1］，也是一種評(píng)價(jià)藥物在體內(nèi)釋放和吸收的有效手段［2］。溶出度試驗(yàn)的深入全面研究以及溶出曲線的精確客觀繪制，既可初步為體內(nèi)生物利用度研究提供參考，也可以揭示各制劑工藝的差別和內(nèi)在品質(zhì)的優(yōu)劣。本文以國(guó)外上市的制劑為參比制劑，考察自制奧美沙坦酯片在不同溶出介質(zhì)中的溶出行為，并采用相似因子法評(píng)價(jià)藥品的內(nèi)在質(zhì)量。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

奧美沙坦酯片參比制劑:批號(hào)110 010，第一三共制藥(上海)有限公司;奧美沙坦酯片:批號(hào)20 120 201、20 120 202、20 120 203，昆明源瑞制藥有限公司自制;奧美沙坦酯對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100 864－200 601，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%;乙腈:Merck KgaA，HPLC級(jí);磷酸二氫鉀，AR，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司;氫氧化鈉:AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;水為純化水。

Sartorius CPA225D十萬(wàn)分之一電子天平:德國(guó)賽多利斯;ZRS－8G智能溶出試驗(yàn)儀:天津天大天發(fā)科技有限公司;1 700型紫外分光光度儀:日本島津公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 溶出度測(cè)定方法

參照奧美沙坦酯片(YBH06992006)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)溶出度項(xiàng)下的方法，取奧美沙坦酯片，按照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄XC第二法)［3］，以磷酸鹽緩沖液(pH6.8)1 000 mL 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，經(jīng)30 min，取溶液10 mL，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液適量，加溶出介質(zhì)稀釋成每1 mL中約含奧美沙坦酯10 μg的溶液，按照紫外－可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅣA)，在258 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度;另取奧美沙坦酯對(duì)照品約20 mg，精密定量，置100 mL容量瓶中，加乙腈－水(60∶40，體積比)適量，超聲使溶解，放冷，加乙腈－水(60∶40，體積比)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置100 mL容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH6.8)稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定吸光度。

2.2 溶出度檢測(cè)方法驗(yàn)證

2.3 專屬性

取奧美沙坦酯對(duì)照品、奧美沙坦酯片及奧美沙坦酯空白片按奧美沙坦酯片溶出度檢查項(xiàng)下方法制備奧美沙坦酯對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白輔料溶液。

取上述空白輔料溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液，在258 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度;并分別于240～300 nm進(jìn)行紫外掃描，空白輔料溶液在258 nm處無(wú)吸收，對(duì)照品溶液和供試品溶液在258 nm處均有最大吸收，空白輔料對(duì)奧美沙坦酯片溶出度檢測(cè)無(wú)干擾，表明奧美沙坦酯片溶出度檢測(cè)方法專屬性良好。

2.4 濾膜吸附試驗(yàn)

按奧美沙坦酯片溶出度項(xiàng)下方法，制備奧美沙坦酯片供試品溶液，分別過(guò)0.8 μm濾膜，分別棄濾液2、3、4 mL，取續(xù)濾液檢測(cè)，與供試液離心分離，取上清液檢測(cè)進(jìn)行對(duì)比，判斷濾膜的吸附性。檢測(cè)結(jié)果證明，奧美沙坦酯片供試品溶液用0.8 μm濾膜過(guò)濾，對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯影響。

2.5 線性范圍

精密稱取奧美沙坦酯對(duì)照品20.55 mg，置100 mL容量瓶中，加溶劑適量，超聲溶解，放置冷卻，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為奧美沙坦酯線性儲(chǔ)備液。分別精密量取該儲(chǔ)備液1、3、4、5、6、7 mL 置于10 mL 容量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，依次配制成 2.034，6.102，8.136，10.170，12.204，14.238 μg/mL 的溶液，取上述溶液在 258 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 奧美沙坦酯溶出度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Figure 1 The dissolution curve of olmesartan medoxomil

由圖1可知，奧美沙坦酯在2.034～14.238 μg/mL范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.6 重復(fù)性

按奧美沙坦酯片溶出度檢查項(xiàng)下方法由同一分析人員同法制備6份供試品溶液進(jìn)行檢測(cè)，6次檢測(cè)結(jié)果的RSD=0.62%，表明溶出度檢測(cè)方法重復(fù)性良好。

2.7 中間精密度

按奧美沙坦酯片溶出度檢查項(xiàng)下方法由不同分析人員于不同日期同法各制備6份供試品溶液檢測(cè)，12次檢測(cè)結(jié)果的RSD=0.73%，表明溶出度檢測(cè)方法中間精密度良好。

2.8 溶液穩(wěn)定性

按奧美沙坦酯片溶出度檢查項(xiàng)下方法，制備奧美沙坦酯片供試品溶液，室溫放置 0、1、2、4、6、8 h進(jìn)行檢測(cè)，6個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果的 RSD=0.32%，證明本品溶出度檢測(cè)供試品溶液在室溫下放置8h穩(wěn)定。

2.9 準(zhǔn)確度

采用加樣回收法，按奧美沙坦酯片溶出度檢查項(xiàng)下對(duì)照品溶液制備方法，取奧美沙坦酯空白片及奧美沙坦酯對(duì)照品適量制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%、75%、100%的供試品溶液，分別計(jì)算其回收率，驗(yàn)證溶出度檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 奧美沙坦酯片溶出度回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Olmesartan tablets dissolution recovery test results

表1結(jié)果表明溶出度檢測(cè)方法準(zhǔn)確度良好。綜上所述研究結(jié)果表明該方法適用于奧美沙坦酯片溶出度檢測(cè)。

3 溶出曲線測(cè)定

取奧美沙坦酯片樣品6片，照2.1方法進(jìn)行測(cè)定，以4種不同pH的溶出介質(zhì)1 000 mL，分別在5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、240、300、360 min取溶出液10 mL(每次取液補(bǔ)同溫度的溶出介質(zhì)10 mL)，過(guò)濾，精密量取濾液5 mL，置10 mL容量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，在258 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算各取樣點(diǎn)的累計(jì)溶出度，當(dāng)連續(xù)兩點(diǎn)的溶出率達(dá)90%以上，且差值在5%以內(nèi)時(shí)試驗(yàn)可以提前結(jié)束。

3.1 溶出曲線檢測(cè)方法的重現(xiàn)性驗(yàn)證

取奧美沙坦酯片參比制劑(110 010)按溶出曲線測(cè)定法重復(fù)檢測(cè)2次，繪制溶出曲線，考察2次檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 奧美沙坦酯片(參比制劑)的溶出曲線重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Repeat results of the dissolution curve of olmesartan medoxomil tablets(reference formulation)

表2結(jié)果表明，奧美沙坦酯片溶出曲線兩次檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)溶出度基本相等，說(shuō)明溶出曲線檢測(cè)方法可操作性及重現(xiàn)性較好，可用于奧美沙坦酯片自制樣品與參比制劑溶出曲線的對(duì)比檢測(cè)。

3.2 溶出均一性

取奧美沙坦酯片(批號(hào)為:20110201及參比制劑(批號(hào)為:110010)分別測(cè)定在pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液中溶出曲線，考察批內(nèi)溶出均一性，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

表3 奧美沙坦酯片(20110201批)溶出均一性試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Olmesartan medoxomil tablets(20110201 batch)dissolution homogeneity test results

表4 奧美沙坦酯片(參比制劑，110010批)溶出曲線結(jié)果Table 4 Olmesartan medoxomil tablets(reference formulation，110010 batch)dissolution profile results

表3、表4結(jié)果顯示溶出5 min后自制品和參比制劑6片間溶出度RSD均小于5%，表明二者6片間的溶出均一性均良好。

3.3 自制奧美沙坦酯片溶出重現(xiàn)性及與參比制劑的溶出相似性

按溶出曲線測(cè)定法檢測(cè)自制奧美沙坦酯片3批樣品(20120201、20120202、20120203)在 pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液中的溶出曲線，將第一批(20120201)自制樣品與另外兩批(20120202和20120203)自制樣品在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線進(jìn)行對(duì)比，以考察自制3批樣品的批間重現(xiàn)性;將自制品第一批和參比制劑在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中溶出曲線進(jìn)行對(duì)比，以考察自制樣品與參比制劑在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中溶出行為的一致性，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 自制樣品與參比制劑溶出曲線對(duì)比Figure 2 Dissolution curve comparison of self－prepared and reference samples

將3批自制樣品在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線和參比制劑的溶出曲線進(jìn)行對(duì)比，采用5、10、15、30 min的平均累計(jì)溶出度分別計(jì)算f2因子，并以pH6.8的磷酸鹽緩沖液中3批自制樣品的第一批為參照，計(jì)算另外兩批樣品在同種介質(zhì)中溶出曲線的f2［4］因子，結(jié)果見(jiàn)表 5。

表5 自制樣品與參比制劑溶出曲線f2因子的計(jì)算結(jié)果Table 5 Caculation results of factor f2of dissolution curve of self－prepared and reference samples

表5結(jié)果顯示，自制3批樣品與參比制劑在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中的溶出行為相似;自制3批樣品在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線重現(xiàn)性較好。

3.4 不同介質(zhì)中的溶出曲線比較

采用多條溶出曲線剖析自制品與參比制劑溶出特性，方法:取奧美沙坦酯片(自制20120201)以參比制劑(110010)按溶出度測(cè)定法，分別以純化水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽緩沖溶液為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出曲線檢測(cè)。

自制樣品和參比制劑在上述3種溶出介質(zhì)中溶出曲線圖見(jiàn)圖3、圖4、圖5。

圖3 自制樣品與參比制劑在水中的溶出曲線對(duì)比Figure 3 Dissolution curve comparison of self－prepared and reference samples in water

3.5 不同介質(zhì)中的溶出曲線相似性評(píng)價(jià)

奧美沙坦酯片自制品與參比制劑在4種溶出介質(zhì)中溶出曲線相似性評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表6。

由表6結(jié)果可知，奧美沙坦酯片自制品與參比制劑在4種溶出介質(zhì)中溶出曲線均相似，表明自制品與參比制劑體外溶出行為一致。

圖4 自制樣品與參比制劑在pH=1.0鹽酸溶液中溶出曲線對(duì)比Figure 4 Dissolution curve comparison of self－prepared and reference samples in pH=1.0 HCl solution

圖5 自制樣品與參比制劑在pH=4.5醋酸鹽緩沖溶液中溶出曲線對(duì)比Figure 5 Dissolution curve comparison of self－prepared and reference samples in pH=4.5 HAc buffer solution

表6 溶出曲線相似性評(píng)價(jià)結(jié)果Table 6 Evaluation results of the dissolution profile similarity

4 結(jié)論

奧美沙坦酯難溶于水，實(shí)驗(yàn)中自制品與參比制劑在水和pH4.5醋酸鹽緩沖溶液中360 min均未溶出90%以上，未達(dá)到溶出平臺(tái)，在后續(xù)研究中應(yīng)在這兩種介質(zhì)中加入一定量的表面活性劑使樣品中奧美沙坦酯溶出完全，以提高自制品與參比制劑在這兩種介質(zhì)中溶出行為的區(qū)分度。雖然奧美沙坦酯片自制品與參比制劑在4種溶出介質(zhì)中溶出曲線均相似，體外溶出行為一致，但是自制品與參比制劑體內(nèi)生物利用度是否等效還有待進(jìn)一步考察。

［1］謝沐風(fēng).改善溶出度評(píng)價(jià)方法，提高固體藥物制劑水平［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2005，36(7):447－451.

［2］張啟明，謝沐風(fēng)，寧保明，等.采用多條溶出曲線評(píng)價(jià)口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(12):946—955.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄85.

［4］陳賢春，吳清，王玉蓉，等.關(guān)于溶出曲線比較和評(píng)價(jià)方法［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(5):662－664.