郭鈺+++衛(wèi)建平

[摘要] 目的 探討ALDH1在乳腺普通導(dǎo)管增生、非典型導(dǎo)管上皮增生以及浸潤性導(dǎo)管癌中表達及其臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法對30例正常乳腺及90例乳腺導(dǎo)管疾病患者的ALDH1的表達進行測定。結(jié)果 ALDH1在正常、乳腺普通導(dǎo)管增生、不典型導(dǎo)管上皮增生以及浸潤性導(dǎo)管癌中的陽性表達率為：0%、23.3%、23.3%、60%。結(jié)論 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的ALDH1的陽性率明顯高于正常乳腺及其它乳腺導(dǎo)管疾病，提示ALDH1的陽性表達與乳腺增生至乳腺癌變的演進，且與疾病的預(yù)后有一定的關(guān)系。

[關(guān)鍵詞] 乳腺腫瘤；ALDH1；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號] R4 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）04（c）-0011-03

乳腺導(dǎo)管疾病是全世界女性最常見的腫瘤之一，我國女性關(guān)于乳腺導(dǎo)管疾病的發(fā)病率近年來也一直呈現(xiàn)上升趨勢[1-2]。乳腺癌作為乳腺常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響了婦女的身心健康甚至危及生命，其中浸潤性導(dǎo)管癌是最常見的類型。乙醛脫氫酶1（Aldehyde Dehydrogenase class 1，ALDH1）最早是通過對人類肝臟對酒精的解毒作用發(fā)現(xiàn)的，至2007年研究者[3]才首次通過對乳腺癌實體組織的研究，發(fā)現(xiàn)高表達ALDH1具有腫瘤干細胞特性，即具有較高的成瘤率，且預(yù)后較差，總體生存率也較低，但因其對于乳腺導(dǎo)管病變的作用機制目前尚未完全闡明，所以探討ALDH1在乳腺導(dǎo)管病變進展中的意義就具有重要的理論和現(xiàn)實意義。為探討ALDH1在乳腺普通導(dǎo)管增生、非典型導(dǎo)管上皮增生以及浸潤性導(dǎo)管癌中表達及其臨床意義，該研究選取 2007年1月—2008 年12月各類乳腺疾病石蠟切片共120例為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)山西醫(yī)科大學(xué)附屬長治市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)且患者本人知情同意，選取在山西醫(yī)科大學(xué)附屬長治市人民醫(yī)院病理科就診的各類乳腺疾病石蠟切片共120例，所有患者均為女性，年齡18～83歲，平均年齡（53±3.2）歲，術(shù)前均未接受化療、放療及其他輔助治療。標(biāo)本均由 10%中性甲醛固定，石蠟包埋，HE染色。每例乳腺病變的病理診斷均經(jīng)過2名高年資病理醫(yī)生的復(fù)查，診斷準(zhǔn)確無誤，按照WHO2012年乳腺病理分類，其中普通型導(dǎo)管增生（Usual ductal hyperplasia，UDH）、非典型導(dǎo)管上皮增生（Atypical ductal epithelial hyperplasia，ADH）以及浸潤性導(dǎo)管癌（Infiltrative ductal carcinoma，IDC）石蠟切片均30例。

1.2 試劑及方法

兔抗人ALDH1單克隆抗體（EP1933Y，美國abcam公司，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司代購），實驗濃度 1：200；SP超敏檢測試劑盒；DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；檸檬酸組織抗原修復(fù)液（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；PBS緩沖液（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；3%H2O2。

將120例烤好的石蠟組織切片常規(guī)脫蠟至水；高壓鍋檸檬酸抗原修復(fù)液熱修復(fù)后，待水溫自然降至室溫，PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；3%過氧化氫（阻斷劑）室溫濕盒孵育10 min，PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；10%正常山羊血清室溫濕盒封閉10 min；加入一抗ALDH1 4℃過夜，PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；加入二抗室溫濕盒10 min；PBS沖洗3次×5 min，除去PBS；DAB顯色適當(dāng)時間（鏡下掌握）。 PBS返藍；蘇木素復(fù)染2 min；乙醇由低向高梯度脫水、二甲苯透明；中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判斷

ALDH1陽性顆粒主要分布于細胞漿，按照許良中等[4]的方法，采用陽性染色強度及陽性細胞所占百分比共同進行判斷。每張切片在400倍視野下隨機選擇10個視野，將切片中平均陽性細胞比例及染色深淺分別計0～3分，染色強度以多數(shù)細胞為準(zhǔn)：無著色，0分；淡黃色，1分；黃或深黃色，2分；褐或棕褐色，3分。切片中無陽性細胞，0分；陽性細胞<25%，1分；26%～50%，2分；51%～75% ，3分；>75%，4分。兩項指標(biāo)的總積分將結(jié)果分為4級，0～3分為（-）；4～5分為（+）；6～7分為（++）；8分以上為（+++）；其中0～3分視為陰性表達，（+）（+++）視為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計數(shù)數(shù)據(jù)采用χ2檢驗或者Fish′s精確檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ALDH1在乳腺UDH、ADH、IDC的表達情況

120例患者ALDH1在正常乳腺、UDH、ADH、IDC的陽性率分別為：0%、23.3%、23.3%、60%。以正常乳腺中ALDH1的表達為最低，IDC為最高。見表1。

2.2 ALDH1與預(yù)后的關(guān)系

對收入調(diào)查的30例IDC患者進行五年生存率統(tǒng)計分析，無病生存率分別為83.3%和38.9%（Log Rank檢驗=4.010，P=0.045）見表2。如圖1，可以看出陰性組和陽性組生存曲線位置不同，陰性組生存率明顯高于陽性組，陽性組的患者，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的概率及死亡率均有所增高，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 ALDH1與預(yù)后的關(guān)系[n（%）]

圖1 乳腺癌患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

人們通過對實體腫瘤的研究，發(fā)現(xiàn)有少數(shù)腫瘤細胞具有強大的自我更新能力、體內(nèi)成瘤能力及多向分化的能力，由于這種特性，便將其稱為“腫瘤干細胞（Cancer Stem Cells， CSCs）”[5]。疾病的產(chǎn)生、演進及耐藥性的產(chǎn)生是由于具有干細胞特點的細胞所致，這些細胞的出現(xiàn)與患者較差的結(jié)局具有相關(guān)性[6]。通過對乳腺癌干細胞的研究，ALDH1現(xiàn)已被證實是乳腺癌干細胞的標(biāo)志物[7-9]。ALDH1是細胞內(nèi)乙醛氧化脫氫酶，是體內(nèi)涉及維甲酸合成、乙醛代謝、氧化應(yīng)激反應(yīng)等重要生物代謝作用的關(guān)鍵酶。它在干細胞分化早期氧化視黃醇形成視黃酸[10]。正常乳腺上皮細胞群能夠在高水平ALDH1能形成乳腺球。ALDH1陽表達患者的預(yù)后差，其總體生存率較低，發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性是陰性表達者的1.76倍[10]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)在多種人類惡性腫瘤的惡變過程中ALDH1表達異常。在該次實驗中檢測了90例乳腺導(dǎo)管病變及30例正常乳腺組織中ALDH1的表達情況，在IDC組中，ALDH1陽性表達率最高，為60%，明顯高于其它分組，ALDH1陽性患者的五年無病生存率較陰性患者過低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，可以暫時認為在乳腺導(dǎo)管病變的惡變過程及預(yù)后中ALDH1均具有重要作用。

許多化療藥是通過誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡起作用的，腫瘤干細胞標(biāo)志物ALDH1，使針對腫瘤干細胞的靶向治療也成為可能，為根治乳腺癌帶來了希望，相信在不久的將來，以ALDH1為治療靶點的靶向治療，能夠減少腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移，提高患者生存率。

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（收稿日期：2014-01-20）