馬楠，李國(guó)智，馬?。ㄋ拇ㄊ〗褪芯农柸t(yī)院：.檢驗(yàn)科；.重癥醫(yī)學(xué)科；.婦產(chǎn)科 6700）

血流感染為最嚴(yán)重的臨床感染之一，致病的微生物包括病毒、細(xì)菌及寄生蟲(chóng)等，病死率較高［1］。據(jù)報(bào)道，全球每年約發(fā)生2×106例血流感染，病死率為20%～50%［2］。第6代全自動(dòng)血培養(yǎng)BacT／Alert3D240系統(tǒng)的引進(jìn)和推廣使用，為敗血癥及嚴(yán)重感染的診斷和治療提供了十分有利的條件。為了進(jìn)一步了解抗菌藥物治療濃度、送檢時(shí)間、溫度、不同細(xì)菌濃度、采血量及采集套數(shù)對(duì)血培養(yǎng)結(jié)果的影響，現(xiàn)選擇該院2009年1月至2013年3月374例住院患者，回顧分析了BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2009年1月至2013年3月該院門(mén)、急診及住院發(fā)熱或全身性感染患者374例。血培養(yǎng)系統(tǒng)采用BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)（法國(guó)梅里埃公司）。血培養(yǎng)瓶使用BacT／Alert的專(zhuān)用配套血培養(yǎng)瓶，包括成人需氧血培養(yǎng)瓶、成人厭氧血培養(yǎng)瓶、兒童專(zhuān)用瓶、樹(shù)脂瓶（法國(guó)梅里埃公司）。

1.2 方法

1.2.1 采取患者血液標(biāo)本按BacT／Alert操作規(guī)程加入相應(yīng)的血培養(yǎng)瓶。

1.2.2 陽(yáng)性培養(yǎng)瓶的處理陽(yáng)性標(biāo)本采用常規(guī)步驟斜瓶，及時(shí)轉(zhuǎn)種血瓊脂平板、巧克力瓊脂和中國(guó)藍(lán)平皿，置35℃培養(yǎng)18～24h。每一陽(yáng)性培養(yǎng)瓶必須做涂片行革蘭染色并做直接藥敏試驗(yàn)，以確定細(xì)菌類(lèi)型，將初步結(jié)果通知臨床作為血培養(yǎng)的一級(jí)報(bào)告，為臨床醫(yī)師初步診斷提供依據(jù)，同時(shí)將分離出的菌落做藥敏試驗(yàn)和生化鑒定，經(jīng)17～22h培養(yǎng)后，作為最終血液培養(yǎng)報(bào)告。

1.2.3 陰性培養(yǎng)瓶的處理培養(yǎng)監(jiān)測(cè)7d系統(tǒng)報(bào)告的陰性瓶，可發(fā)出無(wú)菌生長(zhǎng)報(bào)告。同時(shí)用無(wú)菌注射器或系統(tǒng)附帶采樣針取材轉(zhuǎn)種血瓊脂和巧克力平皿，35℃培養(yǎng)18～24h后，仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，則確定為陰性。

1.2.4 假陽(yáng)性和假陰性的判斷如果系統(tǒng)報(bào)警提示有菌落生長(zhǎng)，但分離不到細(xì)菌且革蘭染色涂片未檢測(cè)到微生物即為假陽(yáng)性；5d未顯示報(bào)警而轉(zhuǎn)種涂片后發(fā)現(xiàn)細(xì)菌即為假陰性。

1.2.5 細(xì)菌鑒定按Microscan儀操作程序進(jìn)行，個(gè)別細(xì)菌輔以常規(guī)方法。

1.2.6 細(xì)菌濃度對(duì)檢出時(shí)間的影響分別用ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌，分別制成1×102、1×104、1×106cfu／mL 菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1mL菌液，置于血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，立即放入BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.7 不同溫度放置對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響將ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌制成1×102cfu／mL 的菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1 mL菌液置于血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放置4、10、25℃12h后移入BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.8 不同時(shí)間放置后對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響將ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌制成1×102cfu／mL的菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1 mL菌液置于血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放置2、4、8、12、24h后移入BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.9 抗菌藥物對(duì)培養(yǎng)結(jié)果的影響培養(yǎng)瓶接種完菌液后加入抗菌藥物，同時(shí)將菌液加入不含抗菌藥物的培養(yǎng)瓶作為對(duì)照。

1.2.10 采樣量及采樣套數(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響對(duì)成人采集2～5mL、5～10mL血液，對(duì)兒童采集1～2mL、2～5mL，分別采用1、2、3套，比較其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 菌株的種類(lèi)與檢出時(shí)間的關(guān)系374份血標(biāo)本中共檢出63株病原菌，陽(yáng)性率為16.8%，其中65.1%的細(xì)菌在24h內(nèi)檢出，28.5%的細(xì)菌在24～48h內(nèi)檢出，6.3%的細(xì)菌在48h后檢出。見(jiàn)表1。

2.2 假陽(yáng)性與假陰性的檢出率在374份標(biāo)本中假陽(yáng)性4株，假陽(yáng)性率為1.1%；假陰性為1株，假陰性率為0.2%。

2.3 不同細(xì)菌濃度的檢出時(shí)間不同細(xì)菌濃度與檢測(cè)時(shí)間的關(guān)系，見(jiàn)表2。

2.4 不同溫度對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響血培養(yǎng)瓶放置4、10、25℃3種溫度與檢測(cè)時(shí)間的關(guān)系，見(jiàn)表3。

2.5 送檢時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時(shí)間之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），放置2h的血培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果與放置12、24h比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

2.6 抗菌藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響選擇常用的幾種抗菌藥物分別加入接種菌液的培養(yǎng)瓶中，同時(shí)將菌液加入不含抗菌藥物的培養(yǎng)瓶作為對(duì)照。見(jiàn)表5。

2.7 采樣量及采樣套數(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響成人采血量為2～5mL時(shí)檢出率為55.13%，5～10mL 檢出率為90.21%；兒童采血量為1～2mL時(shí)檢出率為46.75%，2～5mL 時(shí)檢出率為87.68%；采集數(shù)為3套時(shí)檢出率最高（96.87%）。見(jiàn)表6。

表1 菌株的種類(lèi)與檢出時(shí)間的關(guān)系（n）

表2 3種不同細(xì)菌濃度與檢出時(shí)間的關(guān)系（%）

表3 放置3種不同溫度細(xì)菌與檢出時(shí)間的關(guān)系（%）

表4 送檢時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響（%）

表5 抗菌藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響（%）

續(xù)表5 抗菌藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響（%）

表6 采樣量及采樣套數(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響（%）

3 討論

BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)儀是第6代全新的血培養(yǎng)系統(tǒng)，通過(guò)自動(dòng)連續(xù)不斷地監(jiān)測(cè)細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中消耗氧，產(chǎn)生氫氣、二氧化碳和氮?dú)?，通過(guò)pH 及顏色變化及培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壓力改變，可報(bào)警提示培養(yǎng)液中細(xì)菌數(shù)量。有研究顯示，BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)儀具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、特異性強(qiáng)、誤診率及污染率低的特點(diǎn)［3－4］。本組374份標(biāo)本中假陽(yáng)性4株，假陽(yáng)性率為1.1%，假陰性1株，假陰性率為0.2%。據(jù)有關(guān)報(bào)道，血標(biāo)本體積超過(guò)12 mL，有可能導(dǎo)致假陽(yáng)性，同時(shí)，細(xì)菌自溶、溫度不穩(wěn)定或其他原因也可能導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)［5－6］。1例假陰性標(biāo)本，盲轉(zhuǎn)培養(yǎng)為表皮葡萄球菌，患者此前血培養(yǎng)結(jié)果也為表皮葡萄球菌，推測(cè)該次假陰性結(jié)果可能與患者接受抗菌藥物治療，外周血細(xì)菌濃度太低導(dǎo)致血培養(yǎng)儀無(wú)法檢出有關(guān)。假陰性比假陽(yáng)性對(duì)患者的危害更大，因?yàn)槠鋾?huì)忽略病情，錯(cuò)過(guò)關(guān)鍵治療時(shí)間，造成嚴(yán)重后果，因此，血液培養(yǎng)檢測(cè)質(zhì)量顯得至關(guān)重要［7］。

3.1 檢出時(shí)間與細(xì)菌種類(lèi)和濃度的關(guān)系本研究檢出的細(xì)菌種類(lèi)多，分布范圍廣。其中大腸埃希菌最多，占分離病原菌總數(shù)的14.3%，其次依次為金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌及醋酸鈣不動(dòng)桿菌，前6位分離出的菌株數(shù)占總數(shù)的61.9%，與張冀霞等［8］報(bào)道的相符合。本研究表明，細(xì)菌濃度與檢出時(shí)間有相關(guān)性，即細(xì)菌濃度越高，檢出時(shí)間越短。

3.2 放置溫度和時(shí)間對(duì)培養(yǎng)結(jié)果的影響將含有細(xì)菌的培養(yǎng)瓶放置不同溫度對(duì)檢出時(shí)間影響不大；送檢時(shí)間的延遲不影響病原菌檢測(cè)，但檢出的時(shí)間有所減少。放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時(shí)間之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時(shí)間與放置12、24h比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3.3 抗菌藥物對(duì)檢出結(jié)果的影響部分患者在接受抗菌藥物治療后采集血培養(yǎng)標(biāo)本，病原菌的生長(zhǎng)會(huì)受到血液中藥物濃度的抑制，對(duì)陽(yáng)性檢出率無(wú)影響，僅檢出時(shí)間稍為延長(zhǎng)。雖然添加了一些吸附抗菌藥物的物質(zhì)，如活性炭或樹(shù)脂在商品培養(yǎng)基中，但這類(lèi)物質(zhì)不是對(duì)所有抗菌藥物都能起到作用。在當(dāng)前抗菌藥物濫用的情況下，各廠家應(yīng)該考慮進(jìn)一步改進(jìn)培養(yǎng)瓶在成分和離子強(qiáng)度上具有對(duì)抗菌藥物濃度一定的稀釋作用，但抗菌藥物的長(zhǎng)期使用可能會(huì)影響檢測(cè)速度甚至造成假陰性［9－10］。

3.4 采血量及采集套數(shù)對(duì)檢出結(jié)果的影響血液采樣量不足時(shí)會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)敏感度下降，成人采血量為5～10mL 時(shí)檢出率為90.21%，兒童采血量為2～5mL時(shí)檢出率為87.68%；采集數(shù)為3套時(shí)檢出率最高（96.87%）。成人推薦的采血量為5～10mL，兒童為2～5mL；每次應(yīng)采集2～3套標(biāo)本。

綜上所述，細(xì)菌濃度及種類(lèi)、抗菌藥物、溫度及送檢時(shí)間、采血量及采集套數(shù)均會(huì)使BacT／Alert3D240全自動(dòng)血液培養(yǎng)儀對(duì)病原菌的檢出時(shí)間產(chǎn)生影響，不能有效地反映患者準(zhǔn)確的檢測(cè)指標(biāo)。

［1］徐小仁，朱紅軍，林祥偉，等.血液培養(yǎng)的病原菌分布及耐藥性分析［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（16）：1269－1270.

［2］黃春紅，王云英.BacT／Alert3D型全自動(dòng)血培養(yǎng)儀性能評(píng)價(jià)［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（19）：2421－2422.

［3］陳昕，趙雷，楊亞麗，等.BacT／Alert檢測(cè)系統(tǒng)在快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌中的應(yīng)用［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，17（6）：1062－1063.

［4］王穎，史利寧，范明，等.Bactec FX 和Bact／Alert 3D 兩種血培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)菌血癥的檢出性能分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30（1）：13－15.

［5］李治國(guó)，張浩，麗榮.468例患者血培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間與臨床指標(biāo)的相關(guān)性［J］.微生物學(xué)雜志，2012，32（3）：101－104.

［6］劉海波，朱光發(fā)，王愛(ài)萍，等.醫(yī)院獲得性血流感染的臨床與病原學(xué)分析［J］.中國(guó)感染與化療雜志，2013，13（3）：176－180.

［7］鄒自英，朱冰，袁成良，等.血液培養(yǎng)陽(yáng)性儀器報(bào)警時(shí)間及三級(jí)報(bào)告一致性分析［J］.西南國(guó)防醫(yī)藥，2013，3（23）：305－306.

［8］張冀霞，陳宏斌，王輝，等.2007年和2009年醫(yī)院內(nèi)獲得性血流感染病原菌分布及其耐藥性分析［J］.中華臨床醫(yī)師雜志，2012，6（19）：5935－5940.

［9］鮑群麗，鄒義春，羅卓越，等.全自動(dòng)血培養(yǎng)儀分離菌株的分布及其耐藥性［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，5（11）：829－830.

［10］湯瑾，王建鏹，陳瑜，等.BD BACTEC 9240全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)在檢測(cè)血流感染病原菌的影響因素評(píng)價(jià)［J］.石河子醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，7（28）：606－608.