水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗生理生化的影響

李光++余霜++龔寧

摘要：對金線蘭根狀莖組培苗葉片在不同水分脅迫條件下的葉片相對含水量、膜透性、葉綠素含量、游離脯氨酸含量、可溶性蛋白含量等指標(biāo)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：水分脅迫下金線蘭根狀莖組培苗的葉片葉綠素含量呈持續(xù)下降趨勢；葉片游離脯氨酸含量、膜透性呈先升后降趨勢，葉綠素含量急劇下降有可能是金線蘭抗旱能力弱的主要原因。

關(guān)鍵詞：水分脅迫；金線蘭；組培苗

中圖分類號：S682.310.1；Q945.78文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0224-02

收稿日期：2013-11-09

基金項(xiàng)目：貴州省中藥材現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（編號：GZCYTX-02）；貴州省教育廳科技創(chuàng)新人才支持計(jì)劃（編號：黔教合KY字[2013]148）。

作者簡介：李光（1980—），男，河南商丘人，博士，副教授，主要從事作物遺傳育種和植物學(xué)研究。Tel：（0853）2214341；E-mail：lg20029@126.com。

通信作者：龔寧，碩士，教授，主要從事植物生理生態(tài)研究。E-mail：gongning2007@126.com。自然災(zāi)害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的天敵，干旱是最主要的自然災(zāi)害，我國干旱災(zāi)害發(fā)生的頻率高、范圍廣、持續(xù)時(shí)間長、后續(xù)影響大。金線蘭是蘭科開唇蘭屬植物，多生長在溫涼、濕潤、多霧的亞熱帶闊葉林中，由于其對生境要求較為苛刻，加之種子難繁育，資源瀕于枯竭[1]。目前關(guān)于金線蘭組織培養(yǎng)體系的研究較多[2-3]，但是有關(guān)金線蘭組培苗生理生化的研究較少，金線蘭抗旱性較差，故研究金線蘭組培苗抗旱生理生化機(jī)制具有較好的現(xiàn)實(shí)意義。本研究探討水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗生理生化的影響，旨在為開發(fā)利用金線蘭資源提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

金線蘭組培苗取自貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院組培室。

1.2方法

選取生長一致的組培苗，用無菌水將幼苗根部沖洗干凈，用無菌濾紙把組培苗表面的水分吸干，將組培苗放入MS營養(yǎng)液中適應(yīng)性培養(yǎng)3 d，移入10%、20%、30%、40%等4個(gè)不同濃度的PEG 6000溶液中進(jìn)行根際水分脅迫處理，每處理重復(fù)3次。培養(yǎng)溫度為（23±2） ℃，每天光照 12 h，光照度為3 000 lx。

1.3數(shù)據(jù)測定

1.3.1葉片相對含水量（RWC）測定分別取各處理的健康葉，稱其鮮質(zhì)量（mf），浸入蒸餾水中 12 h取出，吸干表面水分，稱飽和鮮質(zhì)量（mt），置烘箱 105 ℃下殺青5 min，70 ℃下烘至恒重，稱干質(zhì)量（md）[4]。葉片相對含水量計(jì)算公式如下：

RWC=（mf-md）/（mt-md）×100%。（1）

1.3.2相對電導(dǎo)率測定采用電導(dǎo)儀法[5]，將處理后的葉片剪成長約0.5 cm的小段放入試管中，加入10 mL蒸餾水。放入真空干燥器里抽氣0.5 h，靜置10 min后測定溶液電導(dǎo)率S1，然后放入100 ℃沸水浴中15 min，冷卻10 min后測溶液電導(dǎo)率S2，同時(shí)測定蒸餾水電導(dǎo)率S0。相對電導(dǎo)率計(jì)算公式如下：

相對電導(dǎo)率=（S1-S0）/（S2-S0）×100%。（2）

1.3.3葉綠素總含量測定采用混合液法[6]測定葉片的葉綠素含量。將葉片剪成長1 mm左右的小條放入盛有無水乙醇的試管中，置于暗處直到葉片變白，取出浸提液置于比色皿中，以無水乙醇為對照，計(jì)算葉片的葉綠素含量。

1.3.4游離脯氨酸（Pro）含量測定采用磺基水楊酸法[7]測定游離脯氨酸含量。稱取待測樣品 0.20 g置于試管中，加入3%磺基水楊酸溶液5 mL，沸水浴10 min，過濾液即為脯氨酸提取液。吸取2 mL提取液加入干凈試管中，每管加2.5%酸性茚三酮2 mL，沸水浴40 min，再加入4 mL甲苯，萃取 30 min，上層液于520 nm下比色，以脯氨酸為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.5可溶性蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)G-250比色法[8]，準(zhǔn)確稱取0.50 g待測樣品，加入預(yù)冷的5 mL酶提取液（50 mmol/L pH值為7.8的磷酸緩沖液，內(nèi)含0.1 mmol/L EDTA，0.3%TritonX-100，4%PVP），冰浴充分研磨，在冰凍離心機(jī)上以12 000 r/min冷凍離心20 min，上清液即為粗酶液，取各處理的粗酶液0.1 mL，加0.9 mL蒸餾水稀釋（對照為1 mL蒸餾水），分別加入5 mL 100 μg/L考馬斯亮藍(lán)溶液，混勻，靜置2 min后，于595 nm波長下比色，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)為牛血清蛋白。

2結(jié)果與分析

2.1水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片相對含水量的影響

由圖1可知，水分脅迫下，各處理下金線蘭葉片相對含水量隨著脅迫天數(shù)的增加呈先減少后增加趨勢。4個(gè)處理下，葉片相對含水量均在脅迫后5 d達(dá)到最低，隨后逐漸增加。10%PEG與20%PEG處理下金線蘭根狀莖組培苗葉片相對含水量變化曲線幾乎重合。

2.2水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片膜透性的影響

由圖2可知，水分脅迫下金線蘭根狀莖組培苗葉片膜透性變化趨勢較為一致，即隨著脅迫天數(shù)的增加，各處理下葉片

膜透性逐漸加強(qiáng)，5 d時(shí)同時(shí)達(dá)到最大值，峰值由大到小依次為：40%PEG>30%PEG>20%PEG>10%PEG，隨著PEG濃度的增加，葉片膜透性逐漸增加。

2.3水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠素含量的影響

由圖3可知，金線蘭各處理葉片葉綠素含量在脅迫開始的前2 d急劇減少，脅迫后1 d下降最明顯，分別下降到初始葉綠素含量的17%、27%、25%、24%，隨后趨于穩(wěn)定，表明金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠體含量較易受到水分脅迫的影響。

2.4水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片脯氨酸（Pro）含量的影響

由圖4可知，水分脅迫下，金線蘭葉片脯氨酸含量總體呈現(xiàn)先升后降的趨勢，各處理變化趨勢較為一致。各處理均在脅迫后4 d達(dá)到最大值，但各處理的峰值大小有所不同。

2.5水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片可溶性蛋白質(zhì)含量的影響

由圖5可知，不同處理下，金線蘭葉片可溶性蛋白質(zhì)含量總體上呈現(xiàn)“M”形變化趨勢，復(fù)水后可溶性蛋白質(zhì)含量明顯

升高，隨著時(shí)間的延長，金線蘭適應(yīng)水分脅迫的機(jī)制逐漸發(fā)揮作用。

3結(jié)論與討論

本研究表明，水分脅迫下，金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠素含量呈持續(xù)下降趨勢，葉片游離脯氨酸含量、膜透性呈先升后降趨勢。金線蘭組培苗葉片葉綠素在水分脅迫下極易分解，葉綠素是植物光合作用的主要色素，在光合作用中起著重要的作用，葉綠素含量急劇下降有可能是金線蘭抗旱能力弱的主要原因。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國科學(xué)院中國植物志編委會. 中國植物志[M]. 北京：科學(xué)出版社，2000.

[2]李光，龔寧，余霜. 金線蘭根狀莖試管苗叢生芽高效增殖體系[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（10）：52-53.

[3]林海，郝慧敏. 金線蘭愈傷組織誘導(dǎo)的最佳激素配比[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（12）：2568-2570.

[4]李合生，孫群，趙世杰，等. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M]. 北京：高等教育出版社，2000：105-109.

[5]趙曉萌，劉悅萍，曾召海，等. 荒漠植物駱駝蓬的提取物對小麥抗寒性的影響[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（7）：266-267.

[6]趙世杰. 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2002：55-57.

[7]張殿忠，汪沛洪，趙會賢. 測定小麥葉片游離脯氨酸含量的方法[J]. 植物生理學(xué)通訊，1990（4）：62-65.

[8]許曉崗，王俊，童麗麗，等. 垂絲海棠插穗生根與可溶性蛋白和激素變化的關(guān)系[J]. 北方園藝，2008（1）：107-111.

摘要：對金線蘭根狀莖組培苗葉片在不同水分脅迫條件下的葉片相對含水量、膜透性、葉綠素含量、游離脯氨酸含量、可溶性蛋白含量等指標(biāo)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：水分脅迫下金線蘭根狀莖組培苗的葉片葉綠素含量呈持續(xù)下降趨勢；葉片游離脯氨酸含量、膜透性呈先升后降趨勢，葉綠素含量急劇下降有可能是金線蘭抗旱能力弱的主要原因。

關(guān)鍵詞：水分脅迫；金線蘭；組培苗

中圖分類號：S682.310.1；Q945.78文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0224-02

收稿日期：2013-11-09

基金項(xiàng)目：貴州省中藥材現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（編號：GZCYTX-02）；貴州省教育廳科技創(chuàng)新人才支持計(jì)劃（編號：黔教合KY字[2013]148）。

作者簡介：李光（1980—），男，河南商丘人，博士，副教授，主要從事作物遺傳育種和植物學(xué)研究。Tel：（0853）2214341；E-mail：lg20029@126.com。

通信作者：龔寧，碩士，教授，主要從事植物生理生態(tài)研究。E-mail：gongning2007@126.com。自然災(zāi)害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的天敵，干旱是最主要的自然災(zāi)害，我國干旱災(zāi)害發(fā)生的頻率高、范圍廣、持續(xù)時(shí)間長、后續(xù)影響大。金線蘭是蘭科開唇蘭屬植物，多生長在溫涼、濕潤、多霧的亞熱帶闊葉林中，由于其對生境要求較為苛刻，加之種子難繁育，資源瀕于枯竭[1]。目前關(guān)于金線蘭組織培養(yǎng)體系的研究較多[2-3]，但是有關(guān)金線蘭組培苗生理生化的研究較少，金線蘭抗旱性較差，故研究金線蘭組培苗抗旱生理生化機(jī)制具有較好的現(xiàn)實(shí)意義。本研究探討水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗生理生化的影響，旨在為開發(fā)利用金線蘭資源提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

金線蘭組培苗取自貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院組培室。

1.2方法

選取生長一致的組培苗，用無菌水將幼苗根部沖洗干凈，用無菌濾紙把組培苗表面的水分吸干，將組培苗放入MS營養(yǎng)液中適應(yīng)性培養(yǎng)3 d，移入10%、20%、30%、40%等4個(gè)不同濃度的PEG 6000溶液中進(jìn)行根際水分脅迫處理，每處理重復(fù)3次。培養(yǎng)溫度為（23±2） ℃，每天光照 12 h，光照度為3 000 lx。

1.3數(shù)據(jù)測定

1.3.1葉片相對含水量（RWC）測定分別取各處理的健康葉，稱其鮮質(zhì)量（mf），浸入蒸餾水中 12 h取出，吸干表面水分，稱飽和鮮質(zhì)量（mt），置烘箱 105 ℃下殺青5 min，70 ℃下烘至恒重，稱干質(zhì)量（md）[4]。葉片相對含水量計(jì)算公式如下：

RWC=（mf-md）/（mt-md）×100%。（1）

1.3.2相對電導(dǎo)率測定采用電導(dǎo)儀法[5]，將處理后的葉片剪成長約0.5 cm的小段放入試管中，加入10 mL蒸餾水。放入真空干燥器里抽氣0.5 h，靜置10 min后測定溶液電導(dǎo)率S1，然后放入100 ℃沸水浴中15 min，冷卻10 min后測溶液電導(dǎo)率S2，同時(shí)測定蒸餾水電導(dǎo)率S0。相對電導(dǎo)率計(jì)算公式如下：

相對電導(dǎo)率=（S1-S0）/（S2-S0）×100%。（2）

1.3.3葉綠素總含量測定采用混合液法[6]測定葉片的葉綠素含量。將葉片剪成長1 mm左右的小條放入盛有無水乙醇的試管中，置于暗處直到葉片變白，取出浸提液置于比色皿中，以無水乙醇為對照，計(jì)算葉片的葉綠素含量。

1.3.4游離脯氨酸（Pro）含量測定采用磺基水楊酸法[7]測定游離脯氨酸含量。稱取待測樣品 0.20 g置于試管中，加入3%磺基水楊酸溶液5 mL，沸水浴10 min，過濾液即為脯氨酸提取液。吸取2 mL提取液加入干凈試管中，每管加2.5%酸性茚三酮2 mL，沸水浴40 min，再加入4 mL甲苯，萃取 30 min，上層液于520 nm下比色，以脯氨酸為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.5可溶性蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)G-250比色法[8]，準(zhǔn)確稱取0.50 g待測樣品，加入預(yù)冷的5 mL酶提取液（50 mmol/L pH值為7.8的磷酸緩沖液，內(nèi)含0.1 mmol/L EDTA，0.3%TritonX-100，4%PVP），冰浴充分研磨，在冰凍離心機(jī)上以12 000 r/min冷凍離心20 min，上清液即為粗酶液，取各處理的粗酶液0.1 mL，加0.9 mL蒸餾水稀釋（對照為1 mL蒸餾水），分別加入5 mL 100 μg/L考馬斯亮藍(lán)溶液，混勻，靜置2 min后，于595 nm波長下比色，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)為牛血清蛋白。

2結(jié)果與分析

2.1水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片相對含水量的影響

由圖1可知，水分脅迫下，各處理下金線蘭葉片相對含水量隨著脅迫天數(shù)的增加呈先減少后增加趨勢。4個(gè)處理下，葉片相對含水量均在脅迫后5 d達(dá)到最低，隨后逐漸增加。10%PEG與20%PEG處理下金線蘭根狀莖組培苗葉片相對含水量變化曲線幾乎重合。

2.2水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片膜透性的影響

由圖2可知，水分脅迫下金線蘭根狀莖組培苗葉片膜透性變化趨勢較為一致，即隨著脅迫天數(shù)的增加，各處理下葉片

膜透性逐漸加強(qiáng)，5 d時(shí)同時(shí)達(dá)到最大值，峰值由大到小依次為：40%PEG>30%PEG>20%PEG>10%PEG，隨著PEG濃度的增加，葉片膜透性逐漸增加。

2.3水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠素含量的影響

由圖3可知，金線蘭各處理葉片葉綠素含量在脅迫開始的前2 d急劇減少，脅迫后1 d下降最明顯，分別下降到初始葉綠素含量的17%、27%、25%、24%，隨后趨于穩(wěn)定，表明金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠體含量較易受到水分脅迫的影響。

2.4水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片脯氨酸（Pro）含量的影響

由圖4可知，水分脅迫下，金線蘭葉片脯氨酸含量總體呈現(xiàn)先升后降的趨勢，各處理變化趨勢較為一致。各處理均在脅迫后4 d達(dá)到最大值，但各處理的峰值大小有所不同。

2.5水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片可溶性蛋白質(zhì)含量的影響

由圖5可知，不同處理下，金線蘭葉片可溶性蛋白質(zhì)含量總體上呈現(xiàn)“M”形變化趨勢，復(fù)水后可溶性蛋白質(zhì)含量明顯

升高，隨著時(shí)間的延長，金線蘭適應(yīng)水分脅迫的機(jī)制逐漸發(fā)揮作用。

3結(jié)論與討論

本研究表明，水分脅迫下，金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠素含量呈持續(xù)下降趨勢，葉片游離脯氨酸含量、膜透性呈先升后降趨勢。金線蘭組培苗葉片葉綠素在水分脅迫下極易分解，葉綠素是植物光合作用的主要色素，在光合作用中起著重要的作用，葉綠素含量急劇下降有可能是金線蘭抗旱能力弱的主要原因。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國科學(xué)院中國植物志編委會. 中國植物志[M]. 北京：科學(xué)出版社，2000.

[2]李光，龔寧，余霜. 金線蘭根狀莖試管苗叢生芽高效增殖體系[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（10）：52-53.

[3]林海，郝慧敏. 金線蘭愈傷組織誘導(dǎo)的最佳激素配比[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（12）：2568-2570.

[4]李合生，孫群，趙世杰，等. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)[M]. 北京：高等教育出版社，2000：105-109.

[5]趙曉萌，劉悅萍，曾召海，等. 荒漠植物駱駝蓬的提取物對小麥抗寒性的影響[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（7）：266-267.

[6]趙世杰. 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2002：55-57.

[7]張殿忠，汪沛洪，趙會賢. 測定小麥葉片游離脯氨酸含量的方法[J]. 植物生理學(xué)通訊，1990（4）：62-65.

[8]許曉崗，王俊，童麗麗，等. 垂絲海棠插穗生根與可溶性蛋白和激素變化的關(guān)系[J]. 北方園藝，2008（1）：107-111.

摘要：對金線蘭根狀莖組培苗葉片在不同水分脅迫條件下的葉片相對含水量、膜透性、葉綠素含量、游離脯氨酸含量、可溶性蛋白含量等指標(biāo)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：水分脅迫下金線蘭根狀莖組培苗的葉片葉綠素含量呈持續(xù)下降趨勢；葉片游離脯氨酸含量、膜透性呈先升后降趨勢，葉綠素含量急劇下降有可能是金線蘭抗旱能力弱的主要原因。

關(guān)鍵詞：水分脅迫；金線蘭；組培苗

中圖分類號：S682.310.1；Q945.78文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0224-02

收稿日期：2013-11-09

基金項(xiàng)目：貴州省中藥材現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（編號：GZCYTX-02）；貴州省教育廳科技創(chuàng)新人才支持計(jì)劃（編號：黔教合KY字[2013]148）。

作者簡介：李光（1980—），男，河南商丘人，博士，副教授，主要從事作物遺傳育種和植物學(xué)研究。Tel：（0853）2214341；E-mail：lg20029@126.com。

通信作者：龔寧，碩士，教授，主要從事植物生理生態(tài)研究。E-mail：gongning2007@126.com。自然災(zāi)害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的天敵，干旱是最主要的自然災(zāi)害，我國干旱災(zāi)害發(fā)生的頻率高、范圍廣、持續(xù)時(shí)間長、后續(xù)影響大。金線蘭是蘭科開唇蘭屬植物，多生長在溫涼、濕潤、多霧的亞熱帶闊葉林中，由于其對生境要求較為苛刻，加之種子難繁育，資源瀕于枯竭[1]。目前關(guān)于金線蘭組織培養(yǎng)體系的研究較多[2-3]，但是有關(guān)金線蘭組培苗生理生化的研究較少，金線蘭抗旱性較差，故研究金線蘭組培苗抗旱生理生化機(jī)制具有較好的現(xiàn)實(shí)意義。本研究探討水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗生理生化的影響，旨在為開發(fā)利用金線蘭資源提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

金線蘭組培苗取自貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院組培室。

1.2方法

選取生長一致的組培苗，用無菌水將幼苗根部沖洗干凈，用無菌濾紙把組培苗表面的水分吸干，將組培苗放入MS營養(yǎng)液中適應(yīng)性培養(yǎng)3 d，移入10%、20%、30%、40%等4個(gè)不同濃度的PEG 6000溶液中進(jìn)行根際水分脅迫處理，每處理重復(fù)3次。培養(yǎng)溫度為（23±2） ℃，每天光照 12 h，光照度為3 000 lx。

1.3數(shù)據(jù)測定

1.3.1葉片相對含水量（RWC）測定分別取各處理的健康葉，稱其鮮質(zhì)量（mf），浸入蒸餾水中 12 h取出，吸干表面水分，稱飽和鮮質(zhì)量（mt），置烘箱 105 ℃下殺青5 min，70 ℃下烘至恒重，稱干質(zhì)量（md）[4]。葉片相對含水量計(jì)算公式如下：

RWC=（mf-md）/（mt-md）×100%。（1）

1.3.2相對電導(dǎo)率測定采用電導(dǎo)儀法[5]，將處理后的葉片剪成長約0.5 cm的小段放入試管中，加入10 mL蒸餾水。放入真空干燥器里抽氣0.5 h，靜置10 min后測定溶液電導(dǎo)率S1，然后放入100 ℃沸水浴中15 min，冷卻10 min后測溶液電導(dǎo)率S2，同時(shí)測定蒸餾水電導(dǎo)率S0。相對電導(dǎo)率計(jì)算公式如下：

相對電導(dǎo)率=（S1-S0）/（S2-S0）×100%。（2）

1.3.3葉綠素總含量測定采用混合液法[6]測定葉片的葉綠素含量。將葉片剪成長1 mm左右的小條放入盛有無水乙醇的試管中，置于暗處直到葉片變白，取出浸提液置于比色皿中，以無水乙醇為對照，計(jì)算葉片的葉綠素含量。

1.3.4游離脯氨酸（Pro）含量測定采用磺基水楊酸法[7]測定游離脯氨酸含量。稱取待測樣品 0.20 g置于試管中，加入3%磺基水楊酸溶液5 mL，沸水浴10 min，過濾液即為脯氨酸提取液。吸取2 mL提取液加入干凈試管中，每管加2.5%酸性茚三酮2 mL，沸水浴40 min，再加入4 mL甲苯，萃取 30 min，上層液于520 nm下比色，以脯氨酸為標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.5可溶性蛋白質(zhì)含量測定采用考馬斯亮藍(lán)G-250比色法[8]，準(zhǔn)確稱取0.50 g待測樣品，加入預(yù)冷的5 mL酶提取液（50 mmol/L pH值為7.8的磷酸緩沖液，內(nèi)含0.1 mmol/L EDTA，0.3%TritonX-100，4%PVP），冰浴充分研磨，在冰凍離心機(jī)上以12 000 r/min冷凍離心20 min，上清液即為粗酶液，取各處理的粗酶液0.1 mL，加0.9 mL蒸餾水稀釋（對照為1 mL蒸餾水），分別加入5 mL 100 μg/L考馬斯亮藍(lán)溶液，混勻，靜置2 min后，于595 nm波長下比色，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)為牛血清蛋白。

2結(jié)果與分析

2.1水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片相對含水量的影響

由圖1可知，水分脅迫下，各處理下金線蘭葉片相對含水量隨著脅迫天數(shù)的增加呈先減少后增加趨勢。4個(gè)處理下，葉片相對含水量均在脅迫后5 d達(dá)到最低，隨后逐漸增加。10%PEG與20%PEG處理下金線蘭根狀莖組培苗葉片相對含水量變化曲線幾乎重合。

2.2水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片膜透性的影響

由圖2可知，水分脅迫下金線蘭根狀莖組培苗葉片膜透性變化趨勢較為一致，即隨著脅迫天數(shù)的增加，各處理下葉片

膜透性逐漸加強(qiáng)，5 d時(shí)同時(shí)達(dá)到最大值，峰值由大到小依次為：40%PEG>30%PEG>20%PEG>10%PEG，隨著PEG濃度的增加，葉片膜透性逐漸增加。

2.3水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠素含量的影響

由圖3可知，金線蘭各處理葉片葉綠素含量在脅迫開始的前2 d急劇減少，脅迫后1 d下降最明顯，分別下降到初始葉綠素含量的17%、27%、25%、24%，隨后趨于穩(wěn)定，表明金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠體含量較易受到水分脅迫的影響。

2.4水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片脯氨酸（Pro）含量的影響

由圖4可知，水分脅迫下，金線蘭葉片脯氨酸含量總體呈現(xiàn)先升后降的趨勢，各處理變化趨勢較為一致。各處理均在脅迫后4 d達(dá)到最大值，但各處理的峰值大小有所不同。

2.5水分脅迫對金線蘭根狀莖組培苗葉片可溶性蛋白質(zhì)含量的影響

由圖5可知，不同處理下，金線蘭葉片可溶性蛋白質(zhì)含量總體上呈現(xiàn)“M”形變化趨勢，復(fù)水后可溶性蛋白質(zhì)含量明顯

升高，隨著時(shí)間的延長，金線蘭適應(yīng)水分脅迫的機(jī)制逐漸發(fā)揮作用。

3結(jié)論與討論

本研究表明，水分脅迫下，金線蘭根狀莖組培苗葉片葉綠素含量呈持續(xù)下降趨勢，葉片游離脯氨酸含量、膜透性呈先升后降趨勢。金線蘭組培苗葉片葉綠素在水分脅迫下極易分解，葉綠素是植物光合作用的主要色素，在光合作用中起著重要的作用，葉綠素含量急劇下降有可能是金線蘭抗旱能力弱的主要原因。

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