雷 彬林開春宋忠旭孫 華李明波董斌科彭先文梅書棋*

1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，武漢 430064；2.湖北綠天地生物科技有限公司，武漢 430064

三元復(fù)合乳酸菌劑在哺乳仔豬中的應(yīng)用效果

雷 彬1林開春2宋忠旭1孫 華1李明波1董斌科1彭先文1梅書棋1*

1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，武漢 430064；2.湖北綠天地生物科技有限公司，武漢 430064

為了探討益生菌在哺乳仔豬中的使用效果及最佳的使用方式，利用5個(gè)試驗(yàn)分組研究了三元復(fù)合乳酸菌劑對(duì)仔豬腹瀉及生長(zhǎng)性能的影響。結(jié)果表明，飼喂三元復(fù)合乳酸菌劑能有效減少腹瀉，仔豬出生時(shí)口服0.05 g/mL的三元復(fù)合菌劑0.5～1.0 mL，以后每天上午和下午給母豬奶頭噴霧10 mL菌液能顯著減少腹瀉（P＜0.05）。

益生菌；仔豬；腹瀉

近年來(lái)，隨著養(yǎng)豬業(yè)的集約化、規(guī)?；l(fā)展，哺乳仔豬腹瀉的發(fā)病率和死亡率越來(lái)越高，給養(yǎng)豬業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。

抗生素一直是預(yù)防和治療仔豬腹瀉的主要途徑，它能夠在一定程度上抑制病原菌的繁殖，但同時(shí)也會(huì)影響腸道內(nèi)正常菌群的生長(zhǎng)，長(zhǎng)期使用易引起消化道疾病[1]。另外，抗生素的濫用造成的嚴(yán)重后果已引起廣泛的關(guān)注，耐藥菌株的數(shù)量不斷增加，抗藥性不斷增強(qiáng)。最后，由于抗生素的不規(guī)范使用，畜禽體內(nèi)的藥物殘留已嚴(yán)重威脅到人類自身的健康。目前，許多國(guó)家已制定相關(guān)法律來(lái)限制抗生素的用量及禁用。

微生態(tài)制劑是一類無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)殘留并能有效抑制病原菌的促生長(zhǎng)制劑，是理想的抗生素替代物[2]。作為微生態(tài)制劑的重要組成，益生菌在維持腸道的菌群平衡、抑制病原菌的生長(zhǎng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)等方面發(fā)揮著重要作用[3-4]。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)復(fù)合菌株或菌種比單一菌株的益生作用更好[5]。

鑒于此，開展了復(fù)合益生菌制劑對(duì)哺乳仔豬的使用效果分析試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌劑

由湖北綠天地生物科技有限公司提供，為200 億/g水溶性三元復(fù)合乳酸菌（屎腸球菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌）粉劑，使用時(shí)用純凈水以1 g∶20 mL的比例稀釋。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)方案

試驗(yàn)于2013年10月至12月在湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所原種豬育種場(chǎng)進(jìn)行。從該場(chǎng)選擇出生日齡相近（3 d內(nèi)）的大白仔豬5窩，每窩仔豬數(shù)量不低于8頭，試驗(yàn)期從出生至15日齡，試驗(yàn)分空白對(duì)照組、試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組、試驗(yàn)III組，每組為1窩仔豬。空白對(duì)照組給母豬奶頭噴水10 mL；試驗(yàn)I組對(duì)母豬奶頭噴霧10 mL菌液；試驗(yàn)II組第1天給每頭仔豬口腔噴霧0.5 mL菌液，以后改為每天對(duì)母豬奶頭噴霧10 mL菌液；試驗(yàn)III組給仔豬每頭口腔噴霧0.5 mL菌液；另選1窩仔豬組內(nèi)隨機(jī)分為2組，試驗(yàn)IV組對(duì)仔豬每頭口腔噴霧0.5 mL菌液，試驗(yàn)V組對(duì)仔豬每頭口腔噴霧0.5 mL水。每天上午和下午各進(jìn)行1次試驗(yàn)處理，一直到第15天，記錄初生重、15日齡體重、21日齡體重、腹瀉情況及精神狀態(tài)，并進(jìn)行1次重復(fù)試驗(yàn)。

表1 第1次試驗(yàn)仔豬總體情況結(jié)果

表2 重復(fù)試驗(yàn)仔豬總體情況觀察

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)錄入Excel表格，采用SAS軟件進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)，增重效果采用模型：Yijk= μ+Ti+aijXij+eijk

其中，Yijk為15日齡或21日齡個(gè)體重，μ為平均值，Ti為處理效應(yīng)，以出生個(gè)體重Xij為協(xié)變量，aij為其回歸系數(shù)，eijk為隨機(jī)誤差。

2 結(jié)果與分析

2.1 仔豬總體情況觀察

表1、表2為2次試驗(yàn)各試驗(yàn)組仔豬的增重、腹瀉情況等的觀察結(jié)果。

如表1所示，第1次試驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有出現(xiàn)紅痢和白痢，試驗(yàn)II組和試驗(yàn)III組的情況較好，沒(méi)有出現(xiàn)腹瀉（黃?。易胸i毛色光亮，精神活躍，而空白對(duì)照組的腹瀉情況較多，并有1頭仔豬因腹瀉死亡。另外，組內(nèi)分組的結(jié)果也顯示噴水組的腹瀉情況明顯多于噴菌組。

如表2所示，重復(fù)試驗(yàn)中，由于母豬在產(chǎn)前進(jìn)行了腹瀉疫苗的免疫，豬群整體狀態(tài)很好，仔豬毛色光亮，精神活躍。試驗(yàn)V組有少量腹瀉發(fā)生，進(jìn)一步說(shuō)明三元復(fù)合菌劑對(duì)減少腹瀉有一定的效果。

2.2 仔豬腹瀉情況分析

采用SAS軟件對(duì)試驗(yàn)中仔豬的腹瀉比例進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3，圖1為仔豬腹瀉比例的柱形圖分析。

從表3和圖1可以看出，空白對(duì)照組的腹瀉比例明顯高于其他組，并與試驗(yàn)II組差異顯著（P＜0.05）。由于樣本含量偏少，雖然卡方檢驗(yàn)的結(jié)果只有試驗(yàn)II組與空白組的腹瀉比例達(dá)到了顯著性水平，但還是可以從圖中看出添加三元復(fù)合菌劑的處理組的腹瀉比例較少。重復(fù)試驗(yàn)中，由于豬群整體狀態(tài)較好，不能較好地顯示益生菌的使用效果。

表3 第1次試驗(yàn)仔豬腹瀉比例卡方檢驗(yàn)結(jié)果

圖1 第1次試驗(yàn)仔豬腹瀉比例柱形圖（*P＜0.05）

2.3 仔豬增重情況分析

將初生重作為協(xié)變量，分析試驗(yàn)處理對(duì)仔豬增重的影響，結(jié)果見(jiàn)表4（數(shù)值以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示），顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

表4 第1次試驗(yàn)各處理對(duì)增重的影響 kg

表5 第1次試驗(yàn)的顯著性檢驗(yàn)結(jié)果

由表4、表5可見(jiàn)，益生菌的處理組與空白對(duì)照組對(duì)增重的差異不顯著。另外，重復(fù)試驗(yàn)的分析結(jié)果也顯示增重差異不顯著（數(shù)據(jù)未列出）。

3 討論與結(jié)論

3.1 三元復(fù)合菌劑對(duì)哺乳仔豬腹瀉的影響

在第1次試驗(yàn)中，空白組的腹瀉比例要高于其他各組，且有1頭仔豬因腹瀉死亡。試驗(yàn)II組和試驗(yàn)III組沒(méi)有出現(xiàn)腹瀉，并且試驗(yàn)II組的卡方檢驗(yàn)達(dá)到了顯著性水平（P＜0.05）；其余幾組腹瀉比例低于空白對(duì)照組，但由于樣本含量偏少，卡方檢驗(yàn)差異不顯著。另外，組內(nèi)分組的結(jié)果也揭示噴菌組的腹瀉比例較低，這些結(jié)果都表明復(fù)合菌劑對(duì)減少仔豬腹瀉有一定的效果。在后續(xù)試驗(yàn)中，需加大實(shí)驗(yàn)的樣本含量，進(jìn)一步驗(yàn)證符合菌劑的使用效果。由于豬場(chǎng)進(jìn)行了腹瀉苗的免疫，在重復(fù)試驗(yàn)中的仔豬整體狀態(tài)較好，基本沒(méi)有出現(xiàn)腹瀉，各組腹瀉比例無(wú)顯著性差異。對(duì)比2次試驗(yàn)，在益生菌的功能研究試驗(yàn)中，應(yīng)盡量選擇腹瀉比例較高的豬群進(jìn)行試驗(yàn)，能更好地反映出效果差異。

3.2 三元復(fù)合菌劑對(duì)哺乳仔豬增重的影響

通過(guò)增重模型分析發(fā)現(xiàn)復(fù)合菌劑對(duì)哺乳仔豬增重并無(wú)顯著影響，重復(fù)試驗(yàn)的結(jié)果與第1次試驗(yàn)結(jié)果一致。這可能是由于在每天的試驗(yàn)處理過(guò)程中對(duì)仔豬存在較大的應(yīng)激，干擾了最后的增重試驗(yàn)結(jié)果。

試驗(yàn)所用益生菌為三元復(fù)合菌劑，包括屎腸球菌、糞腸球菌和嗜酸乳桿菌。在正常情況下，屎腸球菌和糞腸球菌主要分布在豬的空腸和回腸中，而嗜酸乳桿菌在小豬的胃、小腸等處都有分布[6]。屎腸球菌能夠提高仔豬早期腸道微生物的定植，降低病原菌的數(shù)量[7-8]。乳酸菌可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制病原菌對(duì)腸黏膜的粘附，從而降低病原菌對(duì)宿主的侵害[9-10]。添加乳酸菌能大幅度地減少糞便中大腸桿菌的比例，提高動(dòng)物的抵抗力[11]。此外，嗜酸乳桿菌能分泌抗生素類物質(zhì)，對(duì)腸道致病菌產(chǎn)生拮抗作用，抗菌肽能有效地抑制大腸桿菌DNA的合成[12]，過(guò)氧化氫能抑制葡萄球菌的生長(zhǎng)繁殖[13]，此外還有嗜酸乳菌素、嗜酸桿菌素、乳酸菌素等。最后，乳酸菌還能夠激活巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞，增加IL-1、IL-2、IL-6、IL-5，TNF-α等細(xì)胞因子的產(chǎn)生量[14]。

仔豬出生時(shí)腸道內(nèi)是無(wú)菌的，之后由于受到母體產(chǎn)道、糞便及環(huán)境微生物的影響，在出生后的3～4 h，腸道內(nèi)開始檢出大腸桿菌和鏈球菌。試驗(yàn)II組和試驗(yàn)III組沒(méi)有出現(xiàn)仔豬腹瀉，試驗(yàn)效果較好，這可能是由于在仔豬出生后立即口服復(fù)合菌劑，可以加快消化道有益微生物的定植，減少病原微生物的數(shù)量，對(duì)仔豬起到較好的保護(hù)作用。同時(shí)，復(fù)合菌劑也在后期發(fā)揮了抑制細(xì)菌和增強(qiáng)免疫的作用，抑制了病原菌的入侵。

豬腸道內(nèi)的正常微生物與宿主是共生關(guān)系，宿主為微生物提供適宜的生存環(huán)境，同時(shí)微生物會(huì)為宿主提供一些消化酶、氨基酸、維生素、多糖等。研究表明，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌具有較強(qiáng)的淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性，同時(shí)還具有降解非淀粉多糖的酶類，如纖維素酶、葡聚糖酶、果膠酶等[15]。同時(shí)，益生菌在宿主腸道內(nèi)能產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括B族維生素、維生素K、氨基酸、促生長(zhǎng)因子等[16]。有研究報(bào)道在仔豬日糧中添加乳酸菌，平均日增重提高了20.5%（P＜0.05），料肉比下降了20.5%（P＜0.05）[17]。另外，屎腸球菌能提高仔豬的生長(zhǎng)、免疫和抗氧化性能，添加屎腸球菌的仔豬免疫和抗氧化性能顯著提高，同時(shí)日增重提高11.46%（P＜0.05），料肉比降低6.20%（P＜0.05）[18]。本次試驗(yàn)中各試驗(yàn)組與空白對(duì)照組的增重差異不顯著，同時(shí)組內(nèi)分組之間的差異也不顯著，排除了母豬效應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的影響。因而，可能是由于每天對(duì)仔豬進(jìn)行2次試驗(yàn)處理，在飼喂復(fù)合菌劑的過(guò)程中對(duì)仔豬的應(yīng)激較大，影響了仔豬的增重。在后續(xù)的試驗(yàn)中需要剔除試驗(yàn)操作應(yīng)激對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響。

綜上分析得出，三元復(fù)合菌劑對(duì)減少哺乳仔豬腹瀉具有一定的效果，在使用方法上，建議采用初生時(shí)口服0.05 g/mL的三元復(fù)合菌劑0.5～1.0 mL，以后每天用量不變，利用飲水添加，減少應(yīng)激，最大限度地發(fā)揮益生菌的抗菌促生長(zhǎng)作用。

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2015-10-29

湖北省公益性科技研究項(xiàng)目（2014BBB014）；國(guó)家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-36）；湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2011-620-001-003）；國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2014BAD20B00）

*通訊作者

雷 彬，男，1987年生，研究實(shí)習(xí)員，碩士，研究方向：豬遺傳育種。