王 慧，邱美珍，楊 俊，杜麗飛，周望平，傅勝才

（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410131）

湖南省四家養(yǎng)豬場(chǎng)豬瘟抗體水平檢測(cè)及免疫程序的調(diào)整

王 慧，邱美珍，楊 俊，杜麗飛，周望平，傅勝才

（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410131）

為了提高試驗(yàn)豬場(chǎng)免疫水平，降低豬瘟發(fā)病率，本試驗(yàn)通過(guò)ELISA檢測(cè)技術(shù)對(duì)湖南省4家規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟抗體水平跟蹤監(jiān)測(cè)，評(píng)估其免疫效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4家豬場(chǎng)豬瘟抗體水平均不合格，A、B、C、D 4場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬陽(yáng)性率分別為70.2%、89.9%、75.4%和68.6%；哺乳仔豬陽(yáng)性率分別為30.0%、70.0%、37.2%和30.3%；保育豬陽(yáng)性率分別為47.4%、37.1%、58.0%和8.5%。然后進(jìn)行補(bǔ)充免疫或?qū)⒉缓侠淼拿庖叱绦蜻M(jìn)行調(diào)整。30 d后再次檢測(cè)其抗體水平，結(jié)果顯示4家豬場(chǎng)豬瘟抗體水平除B場(chǎng)哺乳仔豬外均明顯升高，A、B、C、D 4場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬陽(yáng)性率分別為86.7%、95.9%、88.5%和100.0%，哺乳仔豬陽(yáng)性率分別為38.4%、59.5%、73.1%和60.0%，保育豬陽(yáng)性率分別為47.4%、60.8%、68.8%和56.2%。以此驗(yàn)證免疫程序調(diào)整措施基本合理。

豬瘟；免疫效果評(píng)估；免疫程序調(diào)整

豬瘟（Swine Fever;Hog Cholera，CSF）是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、熱性、敗血性、接觸性的傳染病，也是導(dǎo)致“豬高熱病綜合癥”的主要疾病之一。臨床上分為典型豬瘟、非典型豬瘟和繁殖障礙型豬瘟。豬瘟自1883年于美國(guó)俄亥俄州大面積爆發(fā)以來(lái)，已有170多年的歷史[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的疫病[2]，也是我國(guó)的一類動(dòng)物疫病。目前，我國(guó)防控豬瘟疫情的主要手段仍然以100%高密度強(qiáng)制免疫為主，但很多規(guī)模豬場(chǎng)免疫接種普遍存在一定的盲目性和被動(dòng)性[3]，常常導(dǎo)致免疫失敗。因此，免疫后的抗體水平檢測(cè)及分析成了豬瘟防控不可缺少的工作環(huán)節(jié)，根據(jù)抗體檢測(cè)，免疫效果評(píng)估，制定更加合理有效的免疫程序。將實(shí)際生產(chǎn)中存在的“被動(dòng)免疫”轉(zhuǎn)為“主動(dòng)免疫”和“適時(shí)免疫”。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)湖南省4家養(yǎng)豬場(chǎng)豬瘟抗體水平檢測(cè)，分析其免疫程序合理之處及免疫失敗原因，及時(shí)調(diào)整不合理的免疫程序，為養(yǎng)豬場(chǎng)制定符合本場(chǎng)實(shí)際情況的免疫方案提供了參考。

1 材料與方法

1.1 豬場(chǎng)情況 湖南省內(nèi)4家母豬存欄數(shù)500頭左右的規(guī)模豬場(chǎng)，編號(hào)為A場(chǎng)、B場(chǎng)、C場(chǎng)和D場(chǎng)。4家豬場(chǎng)環(huán)境條件都較差，生產(chǎn)狀況不穩(wěn)定，其中有2家豬場(chǎng)有高致病性藍(lán)耳病的發(fā)生。

1.2 試驗(yàn)材料 待檢樣品血清、豬瘟兔化弱毒疫苗（ST傳代細(xì)胞苗）、豬瘟（CSFV）抗體檢測(cè)ELISA試劑盒（購(gòu)自IDEXX公司）、蒸餾水、75%酒精、棉花、真空采血管、一次性采血針、采樣箱、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、槍頭、微量移液器、恒溫箱、冰箱、1.5 mL EP管、量筒等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 免疫程序的記錄 包括免疫程序、免疫時(shí)間、所用疫苗的種類等有關(guān)生產(chǎn)和防疫的內(nèi)容。

1.3.2 血清樣品采集和處理 根據(jù)動(dòng)物防疫樣品采集技術(shù)規(guī)定（DB43/426-2009），從4家豬場(chǎng)共采集血液樣品1 704份，于4℃下過(guò)夜，次日以4 000 r/min離心15 min，收集上清于 1.5 mL EP管中，-20℃保存?zhèn)溆?。采血管?jīng)滅菌處理后丟掉。

1.3.3 檢測(cè)方法和判斷標(biāo)準(zhǔn) 運(yùn)用阻斷ELISA抗體檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)豬瘟抗體，具體操作方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。其具體步驟為：樣品稀釋（18～26℃孵育2 h）→洗滌→加酶標(biāo)抗體（18～26℃孵育30 min）→洗滌→加底物（18～26℃孵育10 min）→加終止液，然后在450 nm處測(cè)定吸光度值。

阻斷率計(jì)算公式：blocking%=（陰性對(duì)照平均OD值-樣本OD值）/陰性對(duì)照平均OD值×100%。

豬瘟抗體水平判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性值為阻斷率＞40%；可疑值為30%≤阻斷率≤40%；陰性值為阻斷率＜30%。

本試驗(yàn)保護(hù)率為阻斷率＞60%（IDEXX標(biāo)準(zhǔn)為＞50%）。

離散度即基于樣本估算的標(biāo)準(zhǔn)偏差，反映數(shù)值相對(duì)于平均值的離散程度。計(jì)算方法為：總體標(biāo)準(zhǔn)偏差σ=Sqr t[(∑(xi-μ)^2)/N]，公式中∑代表總和，μ代表總體x的均值，^2代表二次方，Sqr t代表平方根。

1.4 免疫程序的調(diào)整 根據(jù)第一次抗體檢測(cè)結(jié)果綜合分析4家規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫效果，并調(diào)整不合理的免疫程序及補(bǔ)充免疫。

1.5 再次采集試驗(yàn)豬場(chǎng)血清樣品 免疫程序調(diào)整及補(bǔ)充免疫30 d左右再次采集試驗(yàn)豬場(chǎng)血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)，以驗(yàn)證免疫程序調(diào)整的合理性及加強(qiáng)免疫后的效果。

表1 4家豬場(chǎng)免疫程序Table1 Immunization program of four pig farms

表2 4家豬場(chǎng)豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果Tab le2 The CSFV antibody test resu lts o f four pig farm s

2 結(jié)果與分析

2.1 各豬場(chǎng)免疫程序 所選4家試驗(yàn)豬場(chǎng)免疫程序見(jiàn)表1。

2.2 4家豬場(chǎng)免疫效果評(píng)估及分析 對(duì)4家豬場(chǎng)進(jìn)行分類普檢豬瘟抗體水平并進(jìn)行免疫效果綜合評(píng)估，抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

從表2可以看出，4家豬場(chǎng)豬瘟抗體水平均不合格，從高到低依次為B場(chǎng)、C場(chǎng)、A場(chǎng)、D場(chǎng)。主要表現(xiàn)在陽(yáng)性率低，離散度大，阻斷率平均值不達(dá)標(biāo)。A場(chǎng)、C場(chǎng)和D場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬沒(méi)有達(dá)到理想效果，結(jié)合豬場(chǎng)生產(chǎn)狀況來(lái)看，可能是其他疾病的存在，豬只生長(zhǎng)狀況欠佳，導(dǎo)致母豬群豬瘟免疫應(yīng)答能力下降，同時(shí)藍(lán)耳病的免疫抑制作用，也會(huì)抑制免疫抗體的產(chǎn)生[4]。C、D場(chǎng)可能是由于跟胎免疫工作不到位，漏免或者母豬空懷或流產(chǎn)時(shí)不列在免疫之內(nèi)，從而導(dǎo)致抗體水平不一致。另外由于仔豬母源抗體水平與母豬抗體水平呈正相關(guān)[5]，仔豬豬瘟母源抗體水平低，感染風(fēng)險(xiǎn)大。另外保育豬的抗體水平低是因?yàn)锳場(chǎng)的生產(chǎn)狀況原本不穩(wěn)定，C、D場(chǎng)只有斷奶時(shí)的一次免疫。B場(chǎng)豬瘟抗體水平較好，但仍未達(dá)到豬場(chǎng)內(nèi)部所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 免疫程序調(diào)整及分析 通過(guò)以上數(shù)據(jù)分析及結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，A、B場(chǎng)的商品豬免疫程序優(yōu)化為超前免疫，28日齡第二次免疫，65日齡三次免疫。種豬群檢測(cè)后普免豬瘟疫苗，20 d后再加強(qiáng)免疫；C、D場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬豬瘟免疫方式調(diào)整為每年3、9月上旬普免。鑒于目前豬瘟抗體水平低下，為逐步過(guò)渡到普免免疫模式，立即將所有經(jīng)產(chǎn)母豬普免一次豬瘟疫苗，2個(gè)月后再加強(qiáng)免疫一次。商品豬在65日齡增加1次豬瘟免疫。如果多次免疫抗體仍為陰性者，及時(shí)淘汰。同時(shí)做好生物安全工作，嚴(yán)禁并群等應(yīng)激因素，適當(dāng)進(jìn)行藥物保健。詳細(xì)調(diào)整情況見(jiàn)表3。

2.4 免疫程序調(diào)整后的豬瘟抗體水平及分析 免疫程序調(diào)整后30 d左右，再次進(jìn)行豬瘟抗體水平檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

通過(guò)檢測(cè)結(jié)果顯示，4家豬場(chǎng)經(jīng)過(guò)第一次抗體檢測(cè)后的免疫程序優(yōu)化及加強(qiáng)免疫等措施，豬場(chǎng)的豬瘟抗體水平除了B場(chǎng)哺乳仔豬以外，在上一次抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上都得到了有效改善（見(jiàn)表4），但豬瘟抗體水平仍不夠理想，經(jīng)產(chǎn)母豬抗體水平雖然達(dá)到了85%以上，且離散程度較低；但A場(chǎng)和C場(chǎng)離理想標(biāo)準(zhǔn)還有一段距離；A場(chǎng)哺乳仔豬和保育豬的陽(yáng)性率依舊很低，B、C和D場(chǎng)的哺乳仔豬和保育豬抗體水平比較理想。

3 討論

表3 免疫程序調(diào)整Table3 Imm unization schedule adjustment

表4 免疫程序調(diào)整后的豬瘟抗體水平Table4 Leve ls of CSFV antibody after Imm une adjustm ent

加強(qiáng)普免后，經(jīng)產(chǎn)母豬群某些豬只抗體水平仍未達(dá)到理想狀態(tài)，對(duì)于多次免疫后抗體水平仍處于低下的母豬群應(yīng)考慮予以淘汰。B場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬瘟抗體水平能夠穩(wěn)定維持在理想狀態(tài)。C場(chǎng)和D場(chǎng)豬瘟抗體水平也基本符合場(chǎng)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，可按照原有免疫程序執(zhí)行。同時(shí)豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)普免的管理和督促以及仔豬關(guān)鍵點(diǎn)的保健工作，落到實(shí)處。因?yàn)?，免疫抗體評(píng)估和免疫程序調(diào)整是一個(gè)持續(xù)而長(zhǎng)期的工作，要不斷摸索，找到適合自己的免疫方案，避免盲目被動(dòng)免疫的情況。

對(duì)于超前免疫存在很多爭(zhēng)議，由于超前免疫措施的難操作性，在生產(chǎn)實(shí)際中不提倡采取超前免疫，但在母豬瘟抗體水平較低的情況下仔豬選擇超前免疫卻是比較合理有效的措施，因此當(dāng)抗體水平控制到理想狀態(tài)后應(yīng)免去超前免疫。跟胎免疫是否可行也要根據(jù)豬場(chǎng)實(shí)際情況而定。目前，豬瘟免疫程序研究基本已成熟，規(guī)模豬場(chǎng)均可根據(jù)自身的生產(chǎn)情況制定合理有效的免疫程序，甚至很多豬場(chǎng)已經(jīng)采取豬瘟凈化措施。

在血清學(xué)抗體檢測(cè)應(yīng)用的過(guò)程中，必須合理選擇抗體檢測(cè)時(shí)間并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際來(lái)分析抗體檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)時(shí)間和對(duì)象不同，體現(xiàn)的意義和作用也不一樣，例如，可以根據(jù)仔豬母源抗體水平檢測(cè)來(lái)確定首次免疫時(shí)間。另外，免疫后各種疫苗的特性不同導(dǎo)致其在豬體內(nèi)產(chǎn)生抗體的時(shí)間也存在某些差異，不宜過(guò)早或過(guò)遲進(jìn)行抗體檢測(cè)，一般在免疫后28～35 d進(jìn)行疫苗抗體檢測(cè)[6]。同時(shí)應(yīng)該根據(jù)陽(yáng)性率、離散度、豬瘟阻斷率平均值等各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)合豬場(chǎng)生產(chǎn)實(shí)際情況來(lái)進(jìn)行分析，不能單憑某一項(xiàng)指標(biāo)來(lái)判定豬群的抗體水平。豬瘟抗體水平檢測(cè)作用主要體現(xiàn)在了解豬群免疫狀態(tài)、實(shí)時(shí)訂制合理的免疫程序。但在豬瘟防控方面，應(yīng)結(jié)合豬瘟病原檢測(cè)，及時(shí)識(shí)別和淘汰帶毒種豬，達(dá)到逐步凈化豬瘟的目的，是未來(lái)豬瘟凈化的一個(gè)趨勢(shì)。

[1]HansonRP.Origin of hog cholera[J].J Am Vet Med Assoc,1957,131(5)∶211-218.

[2]OIE.Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Ter rest rial Animals[M].2011.

[3]劉志勇，韓慶安，劉乃強(qiáng)，等.規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)主要疫病免疫效果評(píng)估模型的建立[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2011,47（7）：88-90.

[4]李華，楊漢春，黃芳芳，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染抑制豬瘟疫苗的免疫應(yīng)答[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2001, 21（3）：219-221.

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The classicalsw ine fever immune effectevaluation and ad justment immunization schedules for four scale pig farm s in hunan province

Wang Hui,Qiu Meizhen,Yang Jun,Du Li fei,Zhou Wangping,Fu Shengcai
(Hunan Institute of Animal Sciences&Veterinary Medicine,Hunan Changsha 410131)

In order to improve the immune ef fect and reduce the incidence of classical swine fever(CSF),this research select four scale pig farms to test the antibody level of CSF by ELISA detection technology,and then evaluate the immune ef fect.The resul ts showed that the detecting antibody levels were unquali f ied,In the four pig farms,the mul tiparity sows positive rate was 70.2%,89.9%,75.4%,68.6%respectively;The Lactation piglet positive rate was 30.0%,70.0%, 37.2%,30.3%;The nursery pig positive rate was 47.4%,37.1%,58.0%,8.5%.Then conduct supplementary immunization or adjust unreasonable immunization schedules and test the antibody level af ter 30 days.The resul ts showed that the detecting antibody levels were increased Signi f icant ly except the Lactation piglet of B,in the four pig farms,the mul tiparity sows positive rate was 86.7%,95.9%,88.5%,100.0%respectively;The Lactation piglet positive rate was 38.4%,59.5%, 73.1%,60.0%;The nursery pig positive rate was 47.4%,60.8%,68.8%,56.2%.Immune adjustment is reasonable.

Classical swine fever;Evaluation of immune ef fect;Adjustment of the immunization schedule

S858.28

1672-9692(2015)08-0052-06

2015-07-05

王慧(1988-)，女，初級(jí)職稱，碩士研究生，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。