王銀娟 陸 崟 汪 玥 唐安福 蘇 華 任海祥

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科袁江蘇南京210002

紫元膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王銀娟 陸 崟 汪 玥 唐安福 蘇 華 任海祥

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科袁江蘇南京210002

目的建立紫元膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法對(duì)處方中枸杞子堯山藥堯茯苓進(jìn)行顯微鑒別曰采用薄層色譜法對(duì)紫河車(chē)和枸杞子進(jìn)行定性鑒別曰采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中甜菜堿的含量。色譜柱為Zorbax-NH2柱(4.6mm伊250mm袁5滋m)袁流動(dòng)相為乙腈-0.1%四氫呋喃(85頤15)袁流速為1.0 mL/min袁檢測(cè)波長(zhǎng)為192 nm袁柱溫為25益。結(jié)果顯微鑒別特征明顯易察見(jiàn)袁重現(xiàn)性佳曰薄層色譜鑒別結(jié)果斑點(diǎn)清晰袁陰性對(duì)照無(wú)干擾曰高效液相色譜法中袁甜菜堿濃度在0.02922耀0.46752mg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系袁r=1.0袁平均回收率為101.44%袁RSD為1.85%(n =9)。結(jié)論建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可靠堯準(zhǔn)確袁可用于紫元膠囊的質(zhì)量控制。

紫元膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；顯微鑒別；薄層色譜法；高效液相色譜法；甜菜堿

紫元膠囊為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院的自制制劑袁由紫河車(chē)堯枸杞子堯山藥堯茯苓4味藥組成袁具有益氣養(yǎng)血堯滋補(bǔ)肝腎的功效。用于體質(zhì)虛弱堯氣血不足堯反復(fù)感冒堯小兒生長(zhǎng)發(fā)育遲緩堯子宮發(fā)育不良堯不孕癥等。臨床應(yīng)用多年療效確切袁深受廣大患者歡迎。為有效控制制劑質(zhì)量袁確保用藥安全有效袁筆者建立了山藥堯枸杞堯茯苓的顯微鑒別方法[1-2]袁紫河車(chē)堯枸杞子的薄層色譜鑒別方法[3]袁對(duì)枸杞子堯甜菜堿采用了高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定袁為制訂制劑完整的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供研究基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

Agilent1260型高效液相色譜儀(四元泵堯DAD檢測(cè)器)曰OLYMPUSCX-31系統(tǒng)顯微鏡(奧林巴斯)曰WHF-203B三用紫外分析儀(上海禾汽)曰KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)曰AE240電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)曰FA1604S電子天平(上海天平儀器廠)曰HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)。

紫河車(chē)對(duì)照藥材(批號(hào)院121576-201001)堯枸杞子對(duì)照藥材(批號(hào)院121072-201109)袁甜菜堿對(duì)照品(批號(hào)院110894-200503)袁以上對(duì)照均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所曰紫元膠囊(規(guī)格院每粒裝0.25 g袁南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科自制袁批號(hào)院130626堯130830堯131029)曰薄層層析硅膠G(青島海洋化工廠)曰硅膠G薄層板(自制)曰甲醇堯乙腈為色譜純?cè)渌噭┚鶠榉治黾儭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

本品為膠囊劑袁取10粒內(nèi)容物袁混勻。取少量樣品袁用蒸餾水裝片袁按粉末特征進(jìn)行鑒別。置顯微鏡40倍目鏡下觀察院淀粉粒單粒三角狀卵形或矩圓形袁直徑8耀35滋m袁臍點(diǎn)點(diǎn)狀堯人字狀堯十字狀或短縫狀袁可見(jiàn)層紋曰復(fù)粒稀少袁由2耀3分粒組成(山藥)[4]。另取少量樣品裝片袁滴加水合氯醛試液加熱透化袁再加少許稀甘油制片袁置顯微鏡下觀察院草酸鈣針晶束存在于黏液細(xì)胞中袁長(zhǎng)約240滋m袁針晶粗2耀5滋m(山藥)[4]。種皮石細(xì)胞不規(guī)則多角形袁壁厚袁波狀彎曲袁層紋清晰(枸杞子)。不規(guī)則顆粒狀團(tuán)塊及分支狀團(tuán)塊無(wú)色袁遇水合氯醛試液逐漸溶化袁菌絲無(wú)色或淡棕色袁細(xì)長(zhǎng)袁稍彎曲袁有分支袁直徑3耀8滋m袁少數(shù)至16滋m(茯苓)[5]。在制劑有效期內(nèi)袁該鑒別均符合規(guī)定。取三批不同批號(hào)的樣品依法檢驗(yàn)袁結(jié)果均滿意。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 紫元膠囊顯微鑒別

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 紫河車(chē)

供試品溶液的制備院取本品5粒袁倒出內(nèi)容物袁加三氯甲烷10 mL袁超聲30 min袁濾過(guò)袁蒸干袁殘?jiān)尤燃淄? m L使溶解袁作為供試品溶液。另取紫河車(chē)對(duì)照藥材0.5 g袁同供試品溶液制備方法袁制成對(duì)照藥材溶液。取不含紫河車(chē)的陰性樣品袁同法制備陰性對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(葉中國(guó)藥典曳2010年版一部附錄遇B)試驗(yàn)袁吸取上述三種溶液各20滋L袁分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上袁以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(8頤5頤1)為展開(kāi)劑展開(kāi)袁取出袁晾干袁噴以20%高氯酸溶液袁105益烘約5 min至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中袁在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上袁顯相同顏色的斑點(diǎn)袁而陰性對(duì)照于相應(yīng)的位置上不產(chǎn)生斑點(diǎn)。證明用處方中其他藥材對(duì)紫河車(chē)的鑒別無(wú)干擾袁結(jié)果見(jiàn)圖2(封四)。在制劑有效期內(nèi)袁取三批不同批號(hào)的樣品袁依法檢驗(yàn)袁結(jié)果均滿意。

2.2.2 枸杞子

取本品10粒袁倒出內(nèi)容物袁加熱回流80 mL袁煮沸15 min袁濾過(guò)袁濾液用乙酸乙酯振搖提取3次袁每次15 mL袁合并提取液袁蒸干殘?jiān)蛹状? mL使溶解袁作為供試品溶液。另取枸杞子對(duì)照藥材0.5 g袁同供試品溶液制備方法袁制成對(duì)照藥材溶液。按處方比例稱取除枸杞子以外的藥材袁研細(xì)袁按本品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。按照薄層色譜法(葉中國(guó)藥典曳2010年版一部附錄遇B)試驗(yàn)袁吸取上述三種溶液各10滋L袁分別點(diǎn)于同一市售硅膠G薄層板上袁以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(4頤3頤0.8頤0.1)為展開(kāi)劑袁展開(kāi)袁取出袁晾干袁置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中袁在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上袁顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照于相應(yīng)位置上不產(chǎn)生斑點(diǎn)。證明處方中其他藥材對(duì)枸杞子的鑒別無(wú)干擾袁結(jié)果見(jiàn)圖3(封四)。在制劑有效期內(nèi)袁該鑒別均呈正反應(yīng)。取三批不同批號(hào)的樣品袁依法檢驗(yàn)袁結(jié)果均滿意。

2.3 甜菜堿的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件

色譜柱院Zorbax-NH2柱(4.6mm伊250mm袁5滋m)曰流動(dòng)相院乙腈-0.1%四氫呋喃(85頤15)曰檢測(cè)波長(zhǎng)為192 nm曰柱溫院25益曰流速院1.0 mL/min曰進(jìn)樣量為20滋L曰理論塔板數(shù)按甜菜堿峰計(jì)算不低于2000[6-7]。甜菜堿的保留時(shí)間約為30.0 min。

2.3.2 溶液的配制

2.3.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取甜菜堿對(duì)照品29.22 mg袁置于50 m L量瓶中袁加甲醇稀釋至刻度袁搖勻袁作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3.2.2 對(duì)照品溶液的制備精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液2 m L袁置于10 mL量瓶中袁加甲醇稀釋至刻度袁搖勻袁作為對(duì)照品溶液。

2.3.2.3 供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品適量袁研細(xì)袁精密稱取1 g袁置于錐形瓶中袁加甲醇20m L袁稱定重量袁超聲1.0 h袁放冷袁甲醇補(bǔ)足減重袁搖勻袁微孔濾膜濾過(guò)袁取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.3 專屬性試驗(yàn)

按處方比例和供試品制備工藝不加枸杞子制成陰性對(duì)照袁按野2.3.2.3冶項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液袁供試品溶液與陰性對(duì)照各20滋L袁按上述方法進(jìn)行測(cè)定袁結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 甜菜堿對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照品的高效液相色譜圖

2.3.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取甜菜堿儲(chǔ)備液0.5堯1.0堯2.0堯4.0堯8.0 mL至10 mL容量瓶中袁用甲醇稀釋至刻度袁按野2.3.1冶項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定袁以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)袁峰面積為縱坐標(biāo)(Y)袁進(jìn)行線性回歸袁得到回歸方程為Y=5356.6X原22.102袁r=1.0(n=5)。結(jié)果表明袁甜菜堿濃度在0.02922耀0.46752 mg/mL與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn)

取野2.3.2.2冶項(xiàng)下的甜菜堿對(duì)照品溶液袁按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次袁甜菜堿峰面積的RSD為1.68%。結(jié)果表明該方法的精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)下的樣品袁按野2.3.2.3冶項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備袁在常溫下分別于0堯1堯2堯4堯6 h進(jìn)樣袁記錄甜菜堿峰面積袁RSD為2.05%。表明樣品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)下的樣品5份袁按野2.3.2.3冶項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備袁進(jìn)樣袁平均含量為2.66mg/g袁RSD為1.64%。說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)院131029)0.5 g袁共9份袁分別置于圓底燒瓶中袁按低堯中堯高三個(gè)濃度分別精密加入甜菜堿儲(chǔ)備液1堯2堯3袁按野2.3.2.3冶項(xiàng)下樣品制備方法即得。精密吸取上述供試液各20滋L注入色譜儀袁測(cè)定含量袁計(jì)算回收率。平均回收率為101.44%袁RSD為1.85%(n=9)。

2.3.9 樣品含量測(cè)定

取三批(批號(hào)院130626堯130830堯131029)紫元膠囊袁按野2.3.2.3冶項(xiàng)下方法制備供試品溶液袁依法測(cè)定。結(jié)果甜菜堿含量分別為1.07堯1.90堯0.66mg/粒。

3 討論

方中山藥的淀粉粒堯針晶束袁枸杞子的種皮石細(xì)胞袁茯苓的團(tuán)塊和菌絲在顯微鏡下明顯易察見(jiàn)袁故選入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文。其他顯微特征如枸杞子中的外果皮表皮石細(xì)胞和中果皮薄壁細(xì)胞堯山藥中的導(dǎo)管袁重現(xiàn)性差袁不易察見(jiàn)。為保證質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的合理性袁未選用這些顯微特征作為鑒別依據(jù)。

紫河車(chē)在2010年版葉中國(guó)藥典曳中并無(wú)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[8]袁但為方中君藥袁筆者對(duì)其進(jìn)行了薄層色譜鑒別袁在試驗(yàn)過(guò)程中袁曾選用正己烷-乙酸乙酯(8頤5)堯正己烷-乙酸乙酯-甲酸(8頤5頤1)為展開(kāi)劑袁對(duì)比發(fā)現(xiàn)正己烷-乙酸乙酯(8頤5)拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重袁且主斑點(diǎn)的Rf值較低袁加入一定比例的甲酸能夠很好地去除拖尾現(xiàn)象袁增加Rf值袁展開(kāi)效果理想。

加入少量酸堯堿于展開(kāi)劑中可改善斑點(diǎn)的拖尾現(xiàn)象[3]袁同時(shí)酸堯堿在展開(kāi)劑中的比例多少亦會(huì)影響Rf值的大小袁操作過(guò)程中要根據(jù)實(shí)際情況增減。

枸杞子為方中臣藥袁果實(shí)含甜菜堿堯胡蘿卜素堯酸漿紅素等多種維生素袁黃酮類及游離氨基酸袁牛磺酸等[9]。參照藥典和原標(biāo)準(zhǔn)中枸杞子的鑒別方法袁選擇黃酮類成分為其觀察指標(biāo)袁用乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸(3頤2頤1)為展開(kāi)劑展開(kāi)袁結(jié)果Rf值為0.89袁Rf值過(guò)高袁超出有效范圍(0.2耀0.8)。改用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(4頤3頤0.8頤0.1)為展開(kāi)劑袁在市售硅膠G板上展開(kāi)袁結(jié)果Rf值為0.58袁效果理想。

本文在選擇流動(dòng)相時(shí)袁參考相關(guān)文獻(xiàn)中甜菜堿的含量測(cè)定方法袁對(duì)三種流動(dòng)相進(jìn)行了試用袁結(jié)果正相色譜異丙醇不出峰曰反相色譜甲醇-水(50頤50)出峰太快袁達(dá)不到分離效果曰乙腈-0.1%四氫呋喃(85頤15)出峰時(shí)間堯分離度等均較好袁故選擇其為最佳流動(dòng)相。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京院中國(guó)醫(yī)藥科技出版社袁2010院27袁232袁224.

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[3]周?chē)?guó)華袁傅小英.醫(yī)療機(jī)構(gòu)之際檢驗(yàn)基本操作指南[M].北京院人民軍醫(yī)出版社袁2012院73.

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Study on quality standard of Ziyuan Capsules

WANG Yinjuan LU Yin WANG Yue TANG Anfu SU Hua REN Haixiang
Dapartment of Preparations,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Region,Jiangsu Province,Nanjing 210002, China

Ob jective To establish the quality standard of Ziyuan Capsules.M ethods Fructus lycii,Chinese yam,Poria cocos in the prescription were identified undermicroscope;Dried human placenta and Fructus lyciiwere identified by thin layer chromatography(TLC);the content of betaine was determined by high performance liquid chromatography (HPLC).HPLC system waswith Zorbax-NH2(4.6mm伊250mm,5滋m)column,themobile phase was acetonitrile-0.1% tetrahydrofuran(85頤15),the flowing rate was 1.0 mL/min,UV detecting wavelength was at 192 nm and the column tem鄄peraturewas 25益.Results Themicroscopic characteristicswere obvious and easy to be observed,the repeatability was good.TLC spotswere clear and well separated without negative interference.Good linear relationship(r=1.0)for be鄄taine at 0.02922-0.46752 mg/mL was obtained.The average recovery of betaine was 101.44%袁RSD was 1.85%(n=9). Conclusion The quality standard is reliable and accurate,can be used for the quality control of Ziyuan Capsules.

Ziyuan Capsules;Quality standard;Microscopic identification;TLC;HPLC;Betaine

R965

A[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]1673-7210（2015）06（c）-0089-04

院2015-03-04本文編輯院李亞聰)

全軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題面上項(xiàng)目(13ZJZ15-2)。

任海祥(1966-)袁男袁碩士袁副主任藥師曰研究方向院醫(yī)院制劑。