趙 瑞

安徽省六安市中醫(yī)院藥劑科袁安徽六安237000

高效液相色譜-熒光聯(lián)合測定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量

趙 瑞

安徽省六安市中醫(yī)院藥劑科袁安徽六安237000

目的探討高效液相色譜-熒光聯(lián)合測定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量方法的可行性。方法采用高效液相色譜-熒光聯(lián)合測定舒肝快胃丸中紫丁香苷的含量袁Agilent1200高效液相色譜儀Bond Elut C18柱(5滋m袁4.6mm伊150 mm)袁流動相院甲醇-水-冰醋酸(82頤18頤0.1)曰流速院1.0 mL/min曰熒光檢測波長院294 nm。結(jié)果線性關(guān)系考察中袁以進樣量為橫坐標(biāo)(X袁g)袁峰面積為縱坐標(biāo)(Y)袁進行線性回歸袁得回歸方程院Y=3800X原0.7300(r=0.9998)。紫丁香苷在0.026耀0.750 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。對3批藥材樣品中紫丁香苷的含量進行測定袁結(jié)果紫丁香苷的平均含量為1.113 mg/g袁RSD為0.53%。結(jié)論本研究建立的高效液相色譜-熒光聯(lián)合檢測法靈敏度高袁能快速堯準(zhǔn)確地測定舒肝快胃丸中紫丁香苷濃度袁方法可行。

高效液相色譜-熒光；舒肝快胃丸；紫丁香苷；含量測定

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為袁人是一個整體袁臟腑之間互為影響。肝若過熱袁會影響胃液的分泌袁即肝氣犯胃。以五行學(xué)說解釋袁肝屬木袁脾屬土袁而木克土袁因此肝火過盛會令胃部同樣過熱不適。肝氣犯胃憂思惱怒堯飲食不節(jié)暴飲暴食堯脾胃虛弱病后脾胃受損等均可導(dǎo)致胃痛的發(fā)生。上述病因袁既可單獨致病袁又往往相互影響袁而出現(xiàn)寒熱互見堯虛實錯雜堯陰陽并損之證候袁臨證時必須靈活掌握?？梢娢竿吹年P(guān)鍵是野氣冶袁所謂不通則痛。因此治療胃痛的關(guān)鍵是理順胃氣。舒肝快胃丸由厚樸(姜制)堯陳皮堯青皮堯丁香堯香附(醋制)堯枳實堯川芎堯延胡索堯姜黃堯牡丹皮堯白芍堯砂仁堯當(dāng)歸堯吳茱萸等20味中藥制成的丸劑袁氣香袁味辛堯微苦[1-5]。具有舒肝理氣堯化滯消脹的效果袁主要治療肝胃不和所致的兩肋脹痛袁胃脘刺痛袁惡心嘈雜嘔吐酸水[6-10]。目前葉中國藥典曳2010年版一部已給出了部分君藥及臣藥如厚樸中有效成分的要求袁但關(guān)于丁香中主要成分紫丁香苷的測定報道較少。為進一步控制藥品質(zhì)量袁保證患者的用藥安全及效果袁筆者參照國內(nèi)較多文獻(xiàn)擬建立一種靈敏堯準(zhǔn)確堯操作便捷的檢測方法袁作為紫丁香苷質(zhì)量控制的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200高效液相色譜儀(自動進樣系統(tǒng))堯美國Supelco公司固相萃取儀(USA SUPELCO SPE)袁紫外檢測器袁安捷倫Bond ElutC18固相萃取小柱(100mg袁1 mL)袁YOKO-XR薄層加熱器袁CAMAG雙波長紫外觀察箱袁Camag Nanomat4點樣儀袁HX-02B薄層顯色用的加熱板袁真空干燥箱袁旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀袁KQ5200DA超聲儀袁水浴鍋袁Sartorius BT125D電子天平。

1.2 材料

紫丁香苷對照品(中國藥品生物制品檢定所袁批號院11574-201501袁供含量測定用)曰甲醇(色譜純)曰水為超純水曰其余試劑均為分析純曰舒肝快胃丸(陜西辰濟藥業(yè)有限公司袁國藥準(zhǔn)字Z20155396袁規(guī)格院200丸/瓶袁批號院2015010101堯2015010102堯2015010103)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱院Bond Elut C18柱(5滋m袁4.6 mm伊150 mm袁Sigmar公司)曰流動相院甲醇-水-冰醋酸(82頤18頤0.1)曰流速院1.0 mL/min曰熒光檢測波長院294 nm。理論塔板數(shù)以紫丁香苷計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品儲備液的配制

精密稱取紫丁香苷對照品5.00 mg袁用流動相定容于50 mL量瓶中袁使成100滋g/mL的對照品儲備液袁置于原4益冰箱保存。

2.3 供試品儲備液的配制

取本品適量袁研細(xì)袁精密稱取1.014 g袁置20 m L量瓶中袁加入甲醇超聲處理10 min(功率100W袁頻率50 kHz)袁放冷袁加甲醇至刻度袁搖勻袁用微孔濾膜(0.5滋m)濾過袁取續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方制備缺丁香的樣品袁研細(xì)袁精密稱取1.014 g袁置20mL量瓶中袁加入甲醇超聲處理10min(功率100W袁頻率50 kHz)袁放冷袁加甲醇至刻度袁搖勻袁用微孔濾膜(0.5滋m)濾過袁取續(xù)濾液制備成陰性樣品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

取對照品堯供試品和陰性樣品溶液袁按野2.1冶項下色譜條件測定袁結(jié)果陰性樣品在紫丁香苷對照品出峰處未出現(xiàn)色譜峰袁表明陰性樣品對紫丁香苷的測定無干擾。具體色譜圖見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取對照品溶液0.2堯0.4堯0.8堯1.0堯1.2堯2.0mL袁分別置于10mL量瓶中袁加10mL/L鹽酸甲醇稀釋至刻度袁搖勻袁即得系列對照品溶液。在上述色譜條件下分別吸取10滋L進樣測定袁以進樣量為橫坐標(biāo)(X袁g)袁峰面積為縱坐標(biāo)(Y)袁進行線性回歸袁得回歸方程院Y= 3800X原0.7300(r=0.9998)。結(jié)果提示袁紫丁香苷在0.026耀0.750 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.7精密度試驗

取對照品溶液(濃度為0.090 mg/10 m L)袁連續(xù)進樣5次袁10滋L/次袁測定紫丁香苷的峰面積袁結(jié)果見表1袁提示該方法有較高的精密度。

圖1 供試品、對照品及陰性樣品溶液色譜圖

表1 精密度試驗結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗

取樣品5份(批號院2015010101)袁研細(xì)袁精密稱取1.014 g袁置20mL量瓶中袁加入甲醇超聲(功率100W袁頻率50 kHz)處理10 min袁放冷袁加甲醇至刻度袁搖勻袁用微孔濾膜(0.5滋m)濾過袁測定其含量袁結(jié)果見表2袁提示該方法重復(fù)性較強。

2.9 穩(wěn)定性試驗

取樣品6份(批號院2015010101)0.2堯0.4堯0.8堯1.0堯1.2堯2.0 mL袁分別置于20 mL量瓶中袁加入甲醇超聲(功率100W袁頻率50 kHz)處理10 min袁加甲醇至刻度袁搖勻袁用微孔濾膜(0.5滋m)濾過袁每個濃度共做2份袁1份室溫放置袁1份于原20益下保存?zhèn)溆?。取室溫濃度質(zhì)控樣品分別于制備后0堯2堯4堯6堯8 h后進行樣品分析袁計算血藥濃度及RSD值袁結(jié)果顯示袁紫丁香苷RSD分別為2.03%堯2.11%堯1.24%袁提示樣品溶液室溫放置8 h穩(wěn)定性良好曰取原20益下保存液樣品袁解凍后再冷卻袁進行數(shù)據(jù)分析袁測定5 d內(nèi)血液樣品的濃度及RSD值袁結(jié)果顯示袁紫丁香苷RSD分別為2.23%堯2.20%堯2.67%袁提示樣品溶液在原20益下放置5 d內(nèi)基本穩(wěn)定。

表2 重復(fù)性試驗結(jié)果

2.10 加樣回收試驗

精密稱取樣品0.5 g袁共9份袁置25mL容量瓶中袁分別精密吸取1 mL濃度為0.5mg/mL的紫丁香苷對照品溶液袁轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中袁測定紫丁香苷袁計算加樣回收率。分別精密加入新鮮配制的0.5005 mg/mL紫丁香苷對照品溶液1.5堯1.5堯1.5堯2.0堯2.0堯2.0堯2.5堯2.5堯2.5 mL袁加入甲醇適量袁超聲(功率400 W袁頻率50 kHz)處理30 min袁放冷袁加甲醇稀釋至刻度袁搖勻袁按野2.1冶項下的色譜條件進行含量測定并計算回收率袁結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗結(jié)果

2.11 樣品含量測定

對3批藥材樣品(批號院2015010101堯2015010102堯2015010103)進行紫丁香苷含量測定袁結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定

3 討論

凡由于脾胃受損堯氣血不調(diào)所引起胃痛難耐胃脘部疼痛的病證袁均可稱之為胃脘痛。葉素問窯六元正紀(jì)大論曳曰院野民病胃脘當(dāng)心而痛。冶葉醫(yī)學(xué)正傳曳說院野古方九種心痛噎噎詳其所由袁皆在胃脘袁而實不在于心冶。導(dǎo)致胃痛原因常見的有寒邪客胃堯肝氣犯胃堯飲食傷胃堯脾胃虛弱等。若寒邪客于胃中袁寒凝不散袁阻滯氣機袁可致胃氣不和而疼痛曰肝對脾胃有疏泄作用袁惱怒抑郁袁氣郁傷肝袁肝失條達(dá)袁橫逆犯胃袁均可引發(fā)胃痛的發(fā)生袁若勞倦內(nèi)傷袁久病脾胃虛弱袁或稟賦不足袁中陽虧虛袁胃失溫養(yǎng)袁內(nèi)寒滋生袁中焦虛寒而痛曰當(dāng)過食肥甘袁食滯不化袁氣機受阻或饑飽無度袁飲食不節(jié)袁胃失和降可導(dǎo)致胃痛曰另氣郁日久袁氣滯血瘀袁瘀血內(nèi)結(jié)袁中焦氣機受阻袁而致胃痛發(fā)作?？梢娫竿窗l(fā)生的病機有虛實兩端之意袁實證為氣機阻滯袁不通則痛曰虛證為胃腑失于溫煦或濡養(yǎng)袁失養(yǎng)則痛。

臨床上舒肝快胃丸藥理作用主要有促進胃排空袁抑制胃酸分泌袁加快腸道運動袁緩解疼痛等袁其是由香附(醋制)堯丁香堯白芍堯佛手堯木香堯郁金堯白術(shù)(炒)堯陳皮堯柴胡堯廣藿香堯炙甘草堯萊菔子堯檳榔(炒焦)堯烏藥等研制而成的中藥制劑袁輔料為蜂蜜。舒肝快胃丸可發(fā)揮各種中藥之功效袁功能主治舒肝解郁堯和胃止痛。常用于兩脅脹滿袁食欲不振袁呃逆嘔吐袁胃脘疼痛袁大便失調(diào)。其主要成分之一丁香中的紫丁香苷是一種強效抗肝毒藥物袁其恢復(fù)微粒體酶系統(tǒng)的酶活性及抑制脂質(zhì)過氧化作用可以促進肝毒物代謝并改善肝功能使之正?；⒓嬗兄寡π?。目前關(guān)于丁香中主要成分紫丁香苷的測定報道較少。為建立一種快速堯靈敏的紫丁香苷的測定方法袁本研究考察了諸多文獻(xiàn)報道[11-18]袁選取C18柱固相萃取方法袁比較甲醇堯乙腈等多種溶劑對樣品雜質(zhì)的洗脫情況袁最終發(fā)現(xiàn)經(jīng)一定比例的甲醇和緩沖液洗脫袁既能有效除去雜質(zhì)[19-24]袁又能保證紫丁香苷的高回收率袁所得色譜圖分離完全袁無測定干擾袁不僅操作簡便袁而且重現(xiàn)性較好。

3.1 流動相的選擇

本研究考察了不同濃度的甲醇-水-冰醋酸溶液袁發(fā)現(xiàn)有機相的種類堯濃度對舒肝快胃丸中紫丁香苷出峰時間的影響較大袁且冰醋酸可消除色譜峰拖尾現(xiàn)象[25-29]。最后選定甲醇-水-冰醋酸(82頤18頤0.1)為流動相袁紫丁香苷的峰形較好袁保留時間適宜袁與其他雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離袁效果較為理想。

3.2 提取方法的選擇

采用超聲提取法袁分別以不同提取時間(10堯20堯30 min)提取后袁進行測定袁結(jié)果顯示袁超聲處理10堯20堯30 min的提取結(jié)果差異不顯著袁為保證提取效率袁故采用超聲(功率100W袁頻率50 kHz)處理10 min為提取方法袁分別以甲醇堯水堯10 m L/L鹽酸甲醇作為提取溶媒袁超聲提取10 min后進行比較。結(jié)果顯示袁以水為溶媒的提取結(jié)果略高于其他溶媒袁但是用水作溶媒時袁由于極性增大袁雜峰較多袁紫丁香苷的峰形較差[30-32]曰而以甲醇作溶媒時基線較為平穩(wěn)袁色譜峰對稱[11-12,29,31-33]袁故選擇甲醇超聲提取10min。

綜上所述袁本文建立的高效液相色譜-熒光聯(lián)合檢測法靈敏度高袁能快速堯準(zhǔn)確地測定舒肝快胃丸中紫丁香苷濃度袁并通過陰性輔料干擾試驗和一系列破壞性試驗證明袁該方法的專屬性強袁耐用性好袁且可控制舒肝快胃丸的質(zhì)量。

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Content determ ination of lilacs glycosides in Shugan Kuaiwei Pills by high performance liquid chromatography com bined w ith fluorescence

ZHAO Rui
Department of Pharmacy,Traditional Chinese Hospital of Liu'an City,Anhui Province,Liu'an 237000,China

Objective To study the feasible of high performance liquid chromatography combined with fluorescence in the determination of lilacs glycosides in Shugan Kuaiwei Pills.M ethods Content of lilacs glycosides in Shugan Kuaiwei Pillswas determined by high performance liquid chromatography combined with fluorescence.Agilent 1200 high perfor鄄mance liquid chromatography Bond Elut C18column 5滋m,4.6 mm伊150 mm was usedmobile phasewasmethanol-wa鄄ter-acetic acid glacial(82頤18頤0.1);flow rate was 1.0 mL/min;fluorescence detection wavelength was 294 nm.Resu lts The study of linear relationship showed that based on sample quantity abscissa(X,g),the peak area of the vertical(Y), linear regression equation was Y=3800X原0.7300(r=0.9998),it prompted that lilacs glycosides within 0.026-0.750 g had good linear relationship with the peak area.Content of lilacs glycosides in 3 batches ofmedicinalmaterial samples were determined,average content of lilacs glycosideswas 1.113 mg/g,RSD was 0.53%.Conclusion This study estab鄄lished detectionmethod of high performance liquid chromatography combined with fluorescence has high sensitivity,it can quickly and accurately determined lilacs glycosides concentration in Shugan Kuaiwei Pills,themethod is feasible.

High performance liquid chromatography-fluorescence;Shugan Kuaiwei Pills;Lilacs glycosides;Content determination

R965

A[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]1673-7210（2015）06（c）-0110-04

院2015-03-25本文編輯院李亞聰)