吳春燕，蔡 敏，韋后明，易靈紅

（廣西現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院資源工程系，河池 547000）

大葉桉葉中沒食子酸的提取研究

吳春燕，蔡 敏，韋后明，易靈紅

（廣西現(xiàn)代職業(yè)技術(shù)學(xué)院資源工程系，河池 547000）

以大葉桉葉為原料，選擇合適的溶劑提取大葉桉葉中的沒食子酸。以高效液相色譜為檢測(cè)手段，用蒸餾水進(jìn)行提取。通過提取時(shí)間、提取溫度、固液比、提取次數(shù)4個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)，確定正交試驗(yàn)的水平，優(yōu)化提取工藝。通過正交試驗(yàn)確定沒食子酸提取量的影響因素大小是:提取溫度＞提取時(shí)間＞提取次數(shù)＞固液比。最佳工藝條件是:提取時(shí)間150min，提取溫度100℃，固液比為1∶60，提取次數(shù)為3次，在此工藝條件下，沒食子酸提取量為5.27mg·g-1。

大葉桉葉；沒食子酸 ；正交試驗(yàn)

大葉桉植物的葉子及果實(shí)都具有藥理活性。大葉桉水煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、甲型鏈球菌、八疊球菌、傷寒桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌桿菌、奈瑟球菌有較強(qiáng)的抑制作用。大葉桉葉中含有的沒食子酸在試管內(nèi)對(duì)流感病毒有抑制作用[1]。此外，沒食子酸還可作抗氧化劑，具有抗炎、抗氧化、抗自由基、抗突變等多種生物學(xué)活性，可用于制造焦性沒食子酸、有機(jī)合成和制備藥物、試劑等[2-3]。本文通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)，探索了大葉桉葉中沒食子酸的提取工藝，為大葉桉葉的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料與試劑

原料及試劑:大葉桉葉采自廣西河池市內(nèi)，經(jīng)50℃烘干、粉碎并過0.178mm篩后備用；沒食子酸對(duì)照品（≥98%），提取溶劑用甲醇為分析純，液相色譜用甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水，磷酸為分析純。

儀器:LC-310型高效液相色譜儀，HH型數(shù)顯恒溫水浴鍋，F(xiàn)N101-2A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 沒食子酸的提取

取大葉桉葉干粉1g，放入錐形瓶中，加入一定量的提取溶劑，待恒溫水浴鍋升到設(shè)定溫度后，放入錐形瓶，提取一定時(shí)間后，減壓抽濾，將濾渣用等量提取溶劑再次提取后，合并濾液，將濾液轉(zhuǎn)移到250mL容量瓶中，再?gòu)娜萘科恐形?5mL轉(zhuǎn)移到250mL容量瓶中，供高效液相色譜分析用。

1.2.2 沒食子酸的定量分析

1.2.2.1 色譜條件

色譜柱:Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相:甲醇-0.5%磷酸水溶液（5∶95，v/v）；流速:1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng):272nm；柱溫:25℃；進(jìn)樣量:10μL。

沒食子酸對(duì)照品液相色譜圖如圖1所示。

圖1 沒食子酸對(duì)照品液相色譜圖

1.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取沒食子酸對(duì)照品溶于二次蒸餾水中，配制成400mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，超聲波脫氣。再將此溶液稀釋為濃度為2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，超聲波脫氣。按照1.2.2.1的色譜條件采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定。以沒食子酸濃度作為橫坐標(biāo)，吸收峰面積作為縱坐標(biāo)作圖，可得標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如圖2所示。由圖2可知，沒食子酸的濃度在2.0～32.0mg·L-1濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=15502X-100.35，相關(guān)系數(shù)為0.9999。

圖2 沒食子酸含量的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 提取溶劑對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響

由于沒食子酸中含有3個(gè)羥基和1個(gè)羧基，具有極性，故選擇水和甲醇作為提取溶劑。固定提取時(shí)間為120min，固液比為1∶50（g∶mL），考察不同濃度下的甲醇-水溶液對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響，結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，隨著甲醇含量的增大，沒食子酸提取量逐漸降低，故選擇蒸餾水為提取溶劑。

圖3 提取溶劑對(duì)沒食子酸提取量的影響

2.1.2 提取時(shí)間對(duì)沒食子酸提取量的影響

提取溫度為100℃，提取溶劑為蒸餾水，按固液比1∶50（g∶mL）的條件考察提取時(shí)間對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響，結(jié)果如圖4所示。由圖4可知，沒食子酸提取量隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸提高。當(dāng)提取時(shí)間達(dá)120min后再延長(zhǎng)時(shí)間提取率變化不大，沒食子酸已基本溶解在水中，故提取最佳時(shí)間為120min。

圖4 提取時(shí)間對(duì)沒食子酸提取量的影響

2.1.3 提取溫度對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響

提取時(shí)間為120min，提取溶劑為蒸餾水，按固液比1∶50（g∶mL）的條件考察提取溫度對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響，結(jié)果如圖5所示。由圖5可知，沒食子酸提取量隨溫度的升高呈逐漸上升的趨勢(shì)。其原因是高溫下沒食子酸的溶解、擴(kuò)散速度加快，從而加快了大葉桉葉中沒食子酸的溶出。由于蒸餾水的沸點(diǎn)為100℃，無法再提高提取溫度，故提取溫度選擇為100℃。

圖5 提取溫度對(duì)沒食子酸提取量的影響

圖6 固液比對(duì)沒食子酸提取量的影響

2.1.4 固液比對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響

提取時(shí)間為120min，提取溫度為100℃，提取溶劑為蒸餾水，考察固液比對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響，結(jié)果如圖6所示。從圖6看出，沒食子酸的提取量隨溶劑量的增大而逐漸提高，但過大的溶劑量一方面會(huì)造成溶劑浪費(fèi)，另一方面也會(huì)將大葉桉葉中的其他雜質(zhì)溶解出來。故選擇提取固液比為1∶50（g∶mL）。

2.1.5 提取次數(shù)對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響

提取時(shí)間為120min，提取溫度為100℃，提取溶劑為蒸餾水，固液比為1∶50（g∶mL），考察提取次數(shù)對(duì)大葉桉葉中沒食子酸提取量的影響，結(jié)果如圖7所示。由圖7可知，大葉桉葉提取2次時(shí)沒食子酸基本提取完成，再增加提取次數(shù)沒食子酸提取量的增加很小。故選擇提取次數(shù)為2次。

圖7 提取次數(shù)對(duì)沒食子酸提取量的影響

2.2 正交試驗(yàn)

2.2.1 實(shí)驗(yàn)因素與水平表

在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取提取時(shí)間（min）、提取溫度（℃）、固液比（g∶mL）、提取次數(shù)4因素，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，試驗(yàn)因素與水平表見表1。

表1 正交試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)因素與水平表

2.2.2 結(jié)果與討論

正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2正交試驗(yàn)結(jié)果可知，影響大葉桉葉中沒食子酸提取因素順序?yàn)? B＞A＞D＞C，即提取溫度＞提取時(shí)間＞提取次數(shù)＞固液比，以A3B3C3D3為最優(yōu)組合，即提取時(shí)間120min，提取溫度100℃，固液比為1∶60，提取次數(shù)為3次。

2.2.2 最佳工藝條件的驗(yàn)證

按A3B3C3D3組合，即提取時(shí)間120min，提取溫度100℃，固液比為1∶60，提取次數(shù)為3次，進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，并取平均值，得大葉桉葉中沒食子酸提取率的提取量為5.27mg·g-1。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交試驗(yàn)可知，以蒸餾水為提取溶劑較為合適，影響大葉桉葉中沒食子酸提取順序?yàn)?提取溫度＞提取時(shí)間＞提取次數(shù)＞固液比。最佳工藝條件是:提取時(shí)間120min，提取溫度100℃，固液比為1∶60，提取次數(shù)為3次，在此工藝條件下，沒食子酸提取量為5.27mg·g-1。

[1] 王國(guó)強(qiáng).全國(guó)中草藥匯編（卷二）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2014:69.

[2] 李沐涵，殷美琦，馮靖涵，等.沒食子酸抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥信息，2011，28(1):109-111．

[3] 常連舉，張宗和，黃嘉玲，等.沒食子酸的制備與應(yīng)用綜述[J].生物質(zhì)化學(xué)工程，2010，44(4):48-50.

Extraction of Gallic Acid from Eucalyptus Robusta Leaf

WU Chun-yan, CAI Min, WEI Hou-ming, YI Ling-hong
(Department of Resources Engineering，Guangxi Modem Vocational Technology College，Hechi 547000, China)

Gallic Acid was extracted from eucalyptus robusta leaf with suitable solvents．Applied HPLC as detection method, dstilled water was selected as the extractant．Based on the four single-factor tests of extraction time, extraction temperature, the ratio of solid to liquid and extraction times, optimize extraction process of orthogonal experiments were determined and optimal conditions were obtained: extraction time was 150min, extraction temperature was 100℃, the ratio of solid to liquid was 1∶60 and extraction times was 2 times. The extraction amount was 5.27 mg/g．

eucalyptus robusta leaf; gallic acid; orthogonal experiments

TQ 941

A

1670-9905(2015)05-0036-03

2015年廣西高?？蒲许?xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):KY2015LX736)

吳春燕（1982-），女，廣西欽州人，碩士，講師，主要從事化工教學(xué)和研究工作

2015-03-11