李洪燕+羅曼妮+黃少漫+馮婉瑩+鄭學(xué)殷

摘要：采用生藥學(xué)方法，用FAA固定法、石蠟切片法及番紅-固綠雙重染色法對血葉蘭進行顯微結(jié)構(gòu)分析及性狀描述。結(jié)果表明，血葉蘭根莖有18個纖維管束，排成間斷的環(huán)形，每個環(huán)間距不等；葉、花、根莖、粉末均有草酸鈣砂晶體；葉片橫切面表皮細胞較大，且下表皮細胞大于上表皮細胞，有環(huán)式氣孔，有副衛(wèi)細胞2～3環(huán)，每環(huán)有3個細胞。

關(guān)鍵詞：血葉蘭；顯微結(jié)構(gòu)；生物學(xué)指標(biāo)；根莖橫斷面；鑒定依據(jù)

中圖分類號：S567.201文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）11-0275-03

血葉蘭別稱石蠶、真金草、石上蓮，為蘭科血葉蘭屬植物，血葉蘭以全草入藥，全年可采，洗凈鮮用或曬干，性味甘，是民間傳統(tǒng)的中草藥，有滋陰潤肺、清熱涼血之功效，可用于治療肺結(jié)核咯血、神經(jīng)衰弱、食欲不振等癥[1-4]。血葉蘭生于水邊陰濕處的石面上，分布在廣東省、江西省、湖南省、四川省、貴州省、浙江省等地[5-6]。目前有關(guān)血葉蘭顯微結(jié)構(gòu)及性狀分析研究尚未見報道。本研究采用生藥學(xué)方法，對血葉蘭進行顯微結(jié)構(gòu)鑒別及性狀分析，旨在為開發(fā)血葉蘭相關(guān)產(chǎn)品提供理論依據(jù)[7-8]。

1材料與方法

1.1材料與試劑

血葉蘭由廣州健民醫(yī)藥連鎖有限公司提供，經(jīng)廣東省中藥研究所鑒定為血葉蘭屬。福爾馬林、乙醇、醋酸、二甲苯、石蠟（均為分析純）均來自廣州化學(xué)試劑廠。

1.2儀器與設(shè)備

恒溫箱（廣州儀器分析廠），RM-2155型石蠟切片機（江西儀器玻璃廠），XYH-4A光學(xué)顯微鏡（上海光學(xué)儀器廠）。

1.3方法

1.3.1樣品處理工藝流程[9]

取材→固定→脫水處理→透明處理→透蠟→包埋→染色。取材：選用新鮮藥材，切成長約50mm的小段。固定：將藥材放入到FAA固定液中浸泡固定24h以上。脫水處理：將固定的藥材依次放入體積分數(shù)為70%、85%、95%、100%的乙醇溶液中浸泡1、2、2、3h。透明處理：將上述藥材放入等量的純乙醇與二甲苯混合液中浸泡2h，再轉(zhuǎn)入二甲苯溶液中浸泡2h。透蠟處理：將已透明處理的材料與二甲苯溶液一起倒入用于包埋的小燒杯中，將熔解的石蠟輕輕倒入燒杯。當(dāng)石蠟在小燒杯上層凝固4～5cm時，將小燒杯放入35～37℃恒溫箱中熔蠟，讓石蠟緩慢熔解并滲透到二甲苯當(dāng)中。包埋處理：將燒杯移到50～60℃恒溫箱內(nèi)（高于石蠟熔點），石蠟熔化后，倒去含有二甲苯的石蠟，加入純石蠟。每隔1h換1次純石蠟，共換3次，倒入紙盒定型，冷卻。采用番紅-固綠染色法[10-11]染色。注意事項：選取新鮮并具有代表性的藥材，切成小段，迅速放入固定液中。盡量從低濃度乙醇開始脫水處理，否則極易發(fā)生細胞脫水。透蠟與包埋處理時，隨時用針將材料展開。

1.3.2性狀研究前處理取適量新鮮血葉蘭，放入恒溫箱中干燥，對血葉蘭的葉片、花、根等進行研究[12]。

2結(jié)果與分析

2.1顯微結(jié)構(gòu)

2.1.1血葉蘭葉片結(jié)構(gòu)

血葉蘭花瓣涂片厚度約為0.9mm，由圖1、圖2可知，血葉蘭葉子上下表面細胞呈多邊形，四周壁平直，細胞排列致密。葉片上表皮無氣孔，氣孔主要分布在下表皮，以環(huán)形結(jié)構(gòu)為主。副衛(wèi)細胞有2個環(huán)，每個環(huán)有3～4個細胞，副衛(wèi)細胞由內(nèi)到外逐漸增多增大。血葉蘭葉面兩側(cè)都有淡褐色絨毛，下表皮分布最多，由多細胞構(gòu)成，外形類似泡沫[13]。

血葉蘭花瓣涂片厚度約1.2mm，由圖3、圖4可知，上下表皮細胞外圍都有角質(zhì)層，細胞以類方型為主，長軸直徑較大；下表皮細胞數(shù)量遠遠多于上表皮，上下表皮細胞的內(nèi)側(cè)均有橢圓形的小細胞，內(nèi)含草酸鈣砂晶體；下表皮細胞有多個氣孔，且下表皮內(nèi)側(cè)有厚角組織，1～3層左右。柵欄細胞外形類似短柱，排列無規(guī)則，通過主脈。相近的海綿細胞個體較大，多為短圓形，個體散在，排列疏松。兩類細胞內(nèi)含有淀粉小顆粒，均未見臍點層紋。主脈維管束分上下兩排。上下維管束均有草酸鈣砂晶體散在，晶體較細碎，當(dāng)中有少量淀粉顆粒分布。橫切面上下表皮均有淡褐色絨毛，由多細胞構(gòu)成，外形類似泡沫[14]（表1）。

2.1.2血葉蘭花瓣切面結(jié)構(gòu)由圖5、圖6可知，血葉蘭花瓣切面表皮最外層有淡褐色非腺毛，由多細胞構(gòu)成，外形類似泡沫。在表皮位置有些部位發(fā)生了木栓化，木栓化細胞瘤狀，2～3列，淡黑色。表皮細胞有1列，個體較小，多為圓形，排列緊湊，細胞外層披有薄薄一層角質(zhì)層；表皮細胞內(nèi)側(cè)有厚角組織，由5～7列細胞組成，外形為不規(guī)則圓形。皮層細胞比較大，以多角型為主，細胞壁較為平直，排列致密，細胞之間間隔很小。細胞內(nèi)含有大量的草酸鈣結(jié)晶體，晶體形態(tài)小，單個存在；同時存在淀粉顆粒，數(shù)量不多，隱約見到臍點紋。維管束約15個，大小不統(tǒng)一，外韌形，間斷環(huán)形排列，另有2個排列在細胞內(nèi)側(cè)。石細胞較小，壁厚，可見有紋孔，孔溝與斷層紋不易見，形狀多為圓形，單個分布在維管束鞘外圍或之上。韌皮部分約占整個維管束鞘的1/3，多由不規(guī)則形狀細胞組成。木質(zhì)部導(dǎo)管有5～7個細胞，細胞壁薄，多數(shù)散個存在，只有少數(shù)出現(xiàn)2個相連[15]（表2）。

2.1.3血葉蘭根莖切面結(jié)構(gòu)血葉蘭根莖橫切面呈橢圓形，長徑為10.0mm，厚度為2.1mm。由圖7、圖8可知，根莖表皮呈淡褐色，有1列細胞，橢圓形，排列致密；細胞外壁有角質(zhì)層，部分表皮的外側(cè)有5～9層木栓化細胞，呈紅褐色，橢圓形，個別部位有圓形突起。皮層較寬，由20～30列細胞組成，淡褐色，約占整個切面半徑的1/3，多數(shù)為橢圓形，排列致密，細胞壁平直，細胞間隙小。其中草酸鈣簇晶體較少，草酸鈣砂晶體多。淀粉顆粒較多，單?；?～5粒結(jié)合，多圓形。維管束外韌型，形狀大小不一，約15個，單個存在或2～5個相連，排成環(huán)狀。有1列薄層壁細胞所組成的維管鞘，呈方形。石細胞1列，存在于維管束與皮層之間，類圓形，壁較厚，細胞腔大，可見孔溝，各個層紋不易見，單個或2～5個相連。韌皮部分較小，多由不規(guī)則的多邊形或者類橢圓形細胞組成。束中有明顯的形成層，2～5層，呈長方形，排列密致。木質(zhì)部較寬，導(dǎo)管大，多角形，細胞壁較薄，單個或2～5個相連。木質(zhì)纖維較多，細胞多數(shù)無規(guī)則，壁較厚，木化。木薄壁細胞有多個，多數(shù)相連。髓部較寬，約占根莖橫切面的1/3，細胞較大，多是不規(guī)則形狀，細胞壁平直，排列整齊。髓部細胞內(nèi)有草酸鈣砂晶體，晶體細碎。淀粉單?；?～7粒相連，多數(shù)形狀無規(guī)則，未見臍點層。髓部射線細胞，細胞較大，類方形，有1～15列，每列有10～15個細胞。易見石細胞，形狀類方形，壁較薄，胞腔大，可見孔溝、紋孔、斷層紋（表3）。endprint

2.2粉末形狀

血葉蘭干燥全草粉末為淡黑色，有淡淡的蘭香味，淀粉顆粒較多，形狀無規(guī)則。纖維多為梭形，細胞腔較大，內(nèi)徑21～23μm，兩端尖銳，細胞腔內(nèi)有可見紋孔，直徑26～40μm。細胞導(dǎo)管多螺紋狀，直徑18～40μm。石細胞較多，形狀無規(guī)則，壁厚6～7μm。

2.3血葉蘭形狀描述

2.3.1葉片血葉蘭葉片表面光滑平整。葉片形狀多為長橢圓形或長橢圓狀披針形，長6～11cm，寬2～3cm。葉片對生，全草下部葉片常枯萎，中段葉片有短柄，葉片比較大，經(jīng)常出現(xiàn)三全裂或三深裂。全草上部葉片較小。葉片先端漸小，邊緣有細齒或不規(guī)則粗齒，兩邊沿脈疏有少量柔毛，無腺點。葉片有淡淡草香，葉片捏碎后有明顯的蘭花香味[16-19]。

2.3.2花花葡匐狀，形似蠶，莖節(jié)生根，葉呈紫黑色，有金紅色或銀白色脈紋?；ò史奂t色，花呈白色，秋季開花，觀賞價值較高。

2.3.3根莖

血葉蘭根狀莖呈圓形，表面為棕褐色，有點粗糙，有木纖維瘤，呈散點分布。節(jié)較大，呈結(jié)節(jié)狀，每節(jié)約7～9cm。根須長短不一，約2～5cm。每個結(jié)節(jié)兩側(cè)有殘留的葉痕，葉柄殘基中間稍凹。血葉蘭根莖質(zhì)地柔軟，韌勁大，不容易折斷。

3結(jié)論

本研究表明，血葉蘭根莖有18個纖維管束，排成間斷的環(huán)形，每個環(huán)間距不等；葉、花、根莖、粉末均有草酸鈣砂晶體；葉片的橫切面表皮細胞較大，且下表皮細胞大于上表皮細胞，有環(huán)式氣孔，有副衛(wèi)細胞2～3環(huán)，每個環(huán)有3個細胞，可作為血葉蘭的鑒定依據(jù)。

參考文獻：

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[17]葉淑靜.血葉蘭與澤蘭的考辨[J].海峽藥學(xué)，2008，20（11）：67-69.

[18]饒秋容，張芬，何偉強.血葉蘭的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2003，39（1）：36-36.

[19]張青云，楊濤.佩蘭及其混淆品短舌紫菀的鑒別[J].淮海醫(yī)藥，2004，22（5）：431.endprint

2.2粉末形狀

血葉蘭干燥全草粉末為淡黑色，有淡淡的蘭香味，淀粉顆粒較多，形狀無規(guī)則。纖維多為梭形，細胞腔較大，內(nèi)徑21～23μm，兩端尖銳，細胞腔內(nèi)有可見紋孔，直徑26～40μm。細胞導(dǎo)管多螺紋狀，直徑18～40μm。石細胞較多，形狀無規(guī)則，壁厚6～7μm。

2.3血葉蘭形狀描述

2.3.1葉片血葉蘭葉片表面光滑平整。葉片形狀多為長橢圓形或長橢圓狀披針形，長6～11cm，寬2～3cm。葉片對生，全草下部葉片?？菸卸稳~片有短柄，葉片比較大，經(jīng)常出現(xiàn)三全裂或三深裂。全草上部葉片較小。葉片先端漸小，邊緣有細齒或不規(guī)則粗齒，兩邊沿脈疏有少量柔毛，無腺點。葉片有淡淡草香，葉片捏碎后有明顯的蘭花香味[16-19]。

2.3.2花花葡匐狀，形似蠶，莖節(jié)生根，葉呈紫黑色，有金紅色或銀白色脈紋。花苞呈粉紅色，花呈白色，秋季開花，觀賞價值較高。

2.3.3根莖

血葉蘭根狀莖呈圓形，表面為棕褐色，有點粗糙，有木纖維瘤，呈散點分布。節(jié)較大，呈結(jié)節(jié)狀，每節(jié)約7～9cm。根須長短不一，約2～5cm。每個結(jié)節(jié)兩側(cè)有殘留的葉痕，葉柄殘基中間稍凹。血葉蘭根莖質(zhì)地柔軟，韌勁大，不容易折斷。

3結(jié)論

本研究表明，血葉蘭根莖有18個纖維管束，排成間斷的環(huán)形，每個環(huán)間距不等；葉、花、根莖、粉末均有草酸鈣砂晶體；葉片的橫切面表皮細胞較大，且下表皮細胞大于上表皮細胞，有環(huán)式氣孔，有副衛(wèi)細胞2～3環(huán)，每個環(huán)有3個細胞，可作為血葉蘭的鑒定依據(jù)。

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2.2粉末形狀

血葉蘭干燥全草粉末為淡黑色，有淡淡的蘭香味，淀粉顆粒較多，形狀無規(guī)則。纖維多為梭形，細胞腔較大，內(nèi)徑21～23μm，兩端尖銳，細胞腔內(nèi)有可見紋孔，直徑26～40μm。細胞導(dǎo)管多螺紋狀，直徑18～40μm。石細胞較多，形狀無規(guī)則，壁厚6～7μm。

2.3血葉蘭形狀描述

2.3.1葉片血葉蘭葉片表面光滑平整。葉片形狀多為長橢圓形或長橢圓狀披針形，長6～11cm，寬2～3cm。葉片對生，全草下部葉片?？菸?，中段葉片有短柄，葉片比較大，經(jīng)常出現(xiàn)三全裂或三深裂。全草上部葉片較小。葉片先端漸小，邊緣有細齒或不規(guī)則粗齒，兩邊沿脈疏有少量柔毛，無腺點。葉片有淡淡草香，葉片捏碎后有明顯的蘭花香味[16-19]。

2.3.2花花葡匐狀，形似蠶，莖節(jié)生根，葉呈紫黑色，有金紅色或銀白色脈紋?；ò史奂t色，花呈白色，秋季開花，觀賞價值較高。

2.3.3根莖

血葉蘭根狀莖呈圓形，表面為棕褐色，有點粗糙，有木纖維瘤，呈散點分布。節(jié)較大，呈結(jié)節(jié)狀，每節(jié)約7～9cm。根須長短不一，約2～5cm。每個結(jié)節(jié)兩側(cè)有殘留的葉痕，葉柄殘基中間稍凹。血葉蘭根莖質(zhì)地柔軟，韌勁大，不容易折斷。

3結(jié)論

本研究表明，血葉蘭根莖有18個纖維管束，排成間斷的環(huán)形，每個環(huán)間距不等；葉、花、根莖、粉末均有草酸鈣砂晶體；葉片的橫切面表皮細胞較大，且下表皮細胞大于上表皮細胞，有環(huán)式氣孔，有副衛(wèi)細胞2～3環(huán)，每個環(huán)有3個細胞，可作為血葉蘭的鑒定依據(jù)。

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