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      不同配方下固體培養(yǎng)蛹蟲草活性成分含量比較

      2015-01-15 16:27:45翁梁溫魯
      江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年11期
      關(guān)鍵詞:腺苷多糖

      翁梁+溫魯

      摘要:以蠶蛹、黃豆、玉米糝、蛋白胨為原料固體栽培蛹蟲草,研究不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量的影響。結(jié)果表明,配方5下蛹蟲草蟲草素含量最高,配方1下腺苷含量最高,配方4下多糖、蟲草酸含量最高,在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝、蛋白胨有利于蛹蟲草活性物質(zhì)的提高。

      關(guān)鍵詞:蛹蟲草;配方培養(yǎng)基;蟲草素;腺苷;多糖;蟲草酸

      中圖分類號:S567.3+50.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號:1002-1302(2014)11-0351-02

      蛹蟲草別稱北冬蟲夏草、北蟲草等,是冬蟲夏草的近緣種,也是蟲草屬真菌的模式種[1],其活性成分和醫(yī)療保健功效與冬蟲夏草相近。冬蟲夏草由于生境特殊、寄主單一、產(chǎn)量較低,加之人工培育技術(shù)難以突破,市場價格高昂。蛹蟲草可以進(jìn)行人工培育,其主要活性成分有蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸,特別是蟲草素含量遠(yuǎn)高于冬蟲夏草[2],在藥理或臨床試驗中可作為冬蟲夏草的替代品。蛹蟲草人工培養(yǎng)方式有固體培養(yǎng)、液體發(fā)酵、有蠶培養(yǎng)、蛹培養(yǎng),還有用大米、小麥代料栽培或添加微量元素等,并在一些地區(qū)形成規(guī)模,但培育的蛹蟲草活性成分含量不高。目前,以提高蛹蟲草活性物質(zhì)含量為指標(biāo),對蛹蟲草發(fā)酵條件的優(yōu)化研究從未間斷,也取得了很大進(jìn)展[3-5]。本研究采用固體培養(yǎng),以蠶蛹作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,適量添加黃豆、玉米糝、蛋白胨,比較不同配方對蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量的影響,以期為蛹蟲草活性物質(zhì)含量研究奠定基礎(chǔ)。

      1材料與方法

      1.1材料與試劑

      菌種:蛹蟲草H-3麥粒菌種,江蘇食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與營養(yǎng)工程學(xué)院食用菌課題組自行培育。

      材料:蠶蛹(江蘇省淮安市絲織廠),蛋白胨(生化試劑,國藥集團化學(xué)試劑有限公司),黃豆、玉米糝購自江蘇省淮安市農(nóng)貿(mào)市場。

      藥品與試劑:磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸鈣、葡萄糖、D-甘露醇、高碘酸鈉、乙酸銨、冰醋酸、無水乙醇、苯酚、98%濃硫酸、磷酸氫二鉀、四氫呋喃等均為分析純,培養(yǎng)用水為自來水,分析用水為雙蒸水。蟲草素對照品、腺苷對照品由上?;瘜W(xué)試劑公司進(jìn)口分裝。

      1.2儀器設(shè)備

      培養(yǎng)設(shè)備:高壓蒸汽滅菌鍋,超凈工作臺,恒溫培養(yǎng)箱;樣品處理設(shè)備:電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,粉碎機,臺式離心機,電子天平,微波爐等;檢測設(shè)備:美國Waters高效液相色譜儀系統(tǒng)(600Epump,600controller,2487紫外檢測器,In-lineDegasserAF在線脫氣機,Empower色譜數(shù)據(jù)管理系統(tǒng))。

      1.3方法

      1.3.1培養(yǎng)基配制配方1:蠶蛹200g(蠶蛹干質(zhì)量100g,按50%折算,下同),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,5mL水。配方2:蠶蛹140g,黃豆30g(蠶蛹與黃豆質(zhì)量比為7∶3),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,45mL水。配方3:蠶蛹120g、黃豆40g(蠶蛹與黃豆質(zhì)量比為6∶4),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,60mL水。配方4:蠶蛹100g、黃豆50g(蠶蛹與黃豆質(zhì)量比為5∶5),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,75mL水。配方5:蠶蛹140g、玉米糝30g(蠶蛹與玉米糝質(zhì)量比為7∶3),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,30mL水。配方6:蠶蛹120g、玉米糝40g(蠶蛹與玉米糝質(zhì)量比為6∶4),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,40mL水。配方7:蠶蛹190g、蛋白胨5g(蠶蛹與蛋白胨質(zhì)量比為95∶5),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,10mL水。配方8:蠶蛹180g、蛋白胨10g(蠶蛹與蛋白胨質(zhì)量比為9∶1),加1.5%硫酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.05%硫酸鎂,2%紅糖,20mL水。

      1.3.2接種培養(yǎng)將配制好的培養(yǎng)基于115℃滅菌90min,冷卻。在超凈工作臺上按無菌操作要求接入蛹蟲草H-3菌種,每瓶接6粒麥粒菌種,置培養(yǎng)箱中于25℃下培養(yǎng),培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)物于60℃烘干,粉碎待測。

      1.3.3樣品處理采用微波法提取樣品[6]。稱取一定量樣品粉末,用水作提取介質(zhì),料液比1∶100,經(jīng)微波法輔助提取,并將提取液離心得上清液,備用。

      1.3.4蟲草素與腺苷測定采用HPLC法測定蛹蟲草蟲草素與腺苷[6],上清液經(jīng)0.2μm微孔濾膜壓濾,色譜條件為:WatersNova-pakC18(3.9mm×300.0mm,4μm);流動相為KH2PO4-K2HPO4+1%(體積分?jǐn)?shù))四氫呋喃緩沖液,pH值為6.86,流速為1.0mL/min,檢測波長260nm。蟲草素標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=3.10×106x-1.34×104,r=0.9999;腺苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=3.55×106x-5.72×103,r=0.9999;式中y為色譜峰面積,x為蟲草素或腺苷的進(jìn)樣量。

      1.3.5蛹蟲草多糖測定蛹蟲草多糖測定采用苯酚-硫酸法[7-8]。多糖在酸性條件下水解成葡萄糖等單糖,用葡萄糖配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,于490nm處測定吸光度,得到葡萄糖含量(C葡萄糖)與吸光度(D)的回歸方程:D=7.3542C葡萄糖+0.0532,r=0.9996。

      1.3.6蟲草酸測定采用高碘酸鈉比色法測定蟲草酸[9]。蟲草酸的化學(xué)成分為D-甘露醇,用甘露醇配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,于420nm處測定吸光度,得到甘露糖含量(C甘露糖)與吸光度(D)的回歸方程:C甘露糖=104.5500D+0.3012,r=0.9999。

      2結(jié)果與分析

      2.1不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草蟲草素含量的影響endprint

      蠶蛹營養(yǎng)豐富,蛋白質(zhì)含量高,而且蛋白質(zhì)中氨基酸種類齊全,可直接作為蛹蟲草生長的培養(yǎng)基。由表1可知,試驗所用8種培養(yǎng)基均適合蛹蟲草生長,蟲草素含量也較高,其中配方5下蛹蟲草蟲草素含量最高,達(dá)4.75mg/g。配方5和配方6蟲草素含量差異顯著,配方5、6與配方1、2、3、4、7、8蟲草素含量差異極顯著。從表1還可見,配方5、6、7、8蟲草素含量大于配方1,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量玉米糝、蛋白胨有利于蟲草素積累;配方2、3、4蟲草素含量小于配方1,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加黃豆未能提高蛹蟲草蟲草素含量。

      2.2不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草腺苷含量的影響

      由表2可知,配方1下蛹蟲草腺苷含量最高,達(dá)0.55mg/g,其次為配方5,配方8下蛹蟲草腺苷含量最低。配方1、5與配方2、3、4、6、7、8腺苷含量差異極顯著。試驗表明,在純蛹培養(yǎng)基中添加黃豆、玉米糝、蛋白胨均未能顯著提高蛹蟲草腺苷含量。

      2.3不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草多糖含量的影響

      表3顯示,配方4下蛹蟲草多糖含量最高,達(dá)75.67mg/g,配方8下蛹蟲草多糖含量最低。配方2、3、4和配方1、5、6、7、8多糖含量差異極顯著,配方5、6和配方1、7、8多糖含量差異極顯著,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝有利于蛹蟲草多糖的產(chǎn)生和積累。

      2.4不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草蟲草酸含量的影響

      由表4可知,配方4下蛹蟲草蟲草酸含量最高,達(dá)76.73mg/g,配方3下蛹蟲草蟲草酸含量最低。配方4和其他配方下的蟲草酸含量差異極顯著。

      3結(jié)論與討論

      本研究對不同配方培養(yǎng)基處理下的蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,配方5(蠶蛹與玉米糝質(zhì)量比為7∶3)下蛹蟲草蟲草素含量最高,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量玉米糝可顯著提高蟲草素含量;在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝有利于蛹蟲草多糖的產(chǎn)生和積累;配方4(蠶蛹與黃豆質(zhì)量比為5∶5)下蛹蟲草蟲草酸含量最高。綜上,以純蛹為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,添加適量黃豆、玉米糝、蛋白胨有利于蛹蟲草蟲草素、多糖、蟲草酸含量的提高。但在該試驗條件下,腺苷含量沒有顯著提高。如要提高腺苷含量,還須進(jìn)一步研究。

      蠶蛹營養(yǎng)價值高,可直接作為蛹蟲草的培養(yǎng)基,添加適量黃豆、玉米糝后培養(yǎng)基碳氮比更加合理,有利于蛹蟲草活性物質(zhì)產(chǎn)生和積累。如果再配合其他育種技術(shù),會使活性成分總量得到進(jìn)一步提高。在純蛹培養(yǎng)基中添加其他成分能否進(jìn)一步提高蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量,還須深入研究。

      參考文獻(xiàn):

      [1]敬一兵,陸魯生.蟲草[M].昆明:云南科技出版社,1986:24.

      [2]韋會平,肖波,胡開治.蛹蟲草藥用價值考[J].中藥材,2004,27(3):215-217.

      [3]林群英,宋斌,李泰輝.蛹蟲草研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)通報,2006,33(4):154-157.

      [4]翁梁,溫魯.硒和鈣對蛹蟲草活性物質(zhì)含量的影響[J].北方園藝,2012(22):159-161.

      [5]王志高,溫魯,袁小轉(zhuǎn),等.加硒對蛹蟲草主要活性成分含量的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(29):9293-9294.[HJ1.9mm]

      [6]翁梁,溫魯.TLCS與HPLC對比測定蟲草中蟲草素和腺苷含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2008,24(4):539-540.

      [7]翁梁,溫魯,楊芳,等.不同提取方法對蛹蟲草多糖抗氧化性的影響[J].食品科技,2008,33(11):180-182.

      [8]汪瓊,徐增萊,呂曄.微波消解ICP-MS法測定冬蟲夏草中30種無機元素含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(2):269-270.

      [9]溫魯,翁梁,朱明偉,等.不同林區(qū)蛹蟲草活性成分含量的比較[J].林業(yè)科學(xué),2008,44(8):149-151.endprint

      蠶蛹營養(yǎng)豐富,蛋白質(zhì)含量高,而且蛋白質(zhì)中氨基酸種類齊全,可直接作為蛹蟲草生長的培養(yǎng)基。由表1可知,試驗所用8種培養(yǎng)基均適合蛹蟲草生長,蟲草素含量也較高,其中配方5下蛹蟲草蟲草素含量最高,達(dá)4.75mg/g。配方5和配方6蟲草素含量差異顯著,配方5、6與配方1、2、3、4、7、8蟲草素含量差異極顯著。從表1還可見,配方5、6、7、8蟲草素含量大于配方1,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量玉米糝、蛋白胨有利于蟲草素積累;配方2、3、4蟲草素含量小于配方1,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加黃豆未能提高蛹蟲草蟲草素含量。

      2.2不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草腺苷含量的影響

      由表2可知,配方1下蛹蟲草腺苷含量最高,達(dá)0.55mg/g,其次為配方5,配方8下蛹蟲草腺苷含量最低。配方1、5與配方2、3、4、6、7、8腺苷含量差異極顯著。試驗表明,在純蛹培養(yǎng)基中添加黃豆、玉米糝、蛋白胨均未能顯著提高蛹蟲草腺苷含量。

      2.3不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草多糖含量的影響

      表3顯示,配方4下蛹蟲草多糖含量最高,達(dá)75.67mg/g,配方8下蛹蟲草多糖含量最低。配方2、3、4和配方1、5、6、7、8多糖含量差異極顯著,配方5、6和配方1、7、8多糖含量差異極顯著,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝有利于蛹蟲草多糖的產(chǎn)生和積累。

      2.4不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草蟲草酸含量的影響

      由表4可知,配方4下蛹蟲草蟲草酸含量最高,達(dá)76.73mg/g,配方3下蛹蟲草蟲草酸含量最低。配方4和其他配方下的蟲草酸含量差異極顯著。

      3結(jié)論與討論

      本研究對不同配方培養(yǎng)基處理下的蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,配方5(蠶蛹與玉米糝質(zhì)量比為7∶3)下蛹蟲草蟲草素含量最高,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量玉米糝可顯著提高蟲草素含量;在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝有利于蛹蟲草多糖的產(chǎn)生和積累;配方4(蠶蛹與黃豆質(zhì)量比為5∶5)下蛹蟲草蟲草酸含量最高。綜上,以純蛹為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,添加適量黃豆、玉米糝、蛋白胨有利于蛹蟲草蟲草素、多糖、蟲草酸含量的提高。但在該試驗條件下,腺苷含量沒有顯著提高。如要提高腺苷含量,還須進(jìn)一步研究。

      蠶蛹營養(yǎng)價值高,可直接作為蛹蟲草的培養(yǎng)基,添加適量黃豆、玉米糝后培養(yǎng)基碳氮比更加合理,有利于蛹蟲草活性物質(zhì)產(chǎn)生和積累。如果再配合其他育種技術(shù),會使活性成分總量得到進(jìn)一步提高。在純蛹培養(yǎng)基中添加其他成分能否進(jìn)一步提高蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量,還須深入研究。

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      [3]林群英,宋斌,李泰輝.蛹蟲草研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)通報,2006,33(4):154-157.

      [4]翁梁,溫魯.硒和鈣對蛹蟲草活性物質(zhì)含量的影響[J].北方園藝,2012(22):159-161.

      [5]王志高,溫魯,袁小轉(zhuǎn),等.加硒對蛹蟲草主要活性成分含量的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(29):9293-9294.[HJ1.9mm]

      [6]翁梁,溫魯.TLCS與HPLC對比測定蟲草中蟲草素和腺苷含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2008,24(4):539-540.

      [7]翁梁,溫魯,楊芳,等.不同提取方法對蛹蟲草多糖抗氧化性的影響[J].食品科技,2008,33(11):180-182.

      [8]汪瓊,徐增萊,呂曄.微波消解ICP-MS法測定冬蟲夏草中30種無機元素含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(2):269-270.

      [9]溫魯,翁梁,朱明偉,等.不同林區(qū)蛹蟲草活性成分含量的比較[J].林業(yè)科學(xué),2008,44(8):149-151.endprint

      蠶蛹營養(yǎng)豐富,蛋白質(zhì)含量高,而且蛋白質(zhì)中氨基酸種類齊全,可直接作為蛹蟲草生長的培養(yǎng)基。由表1可知,試驗所用8種培養(yǎng)基均適合蛹蟲草生長,蟲草素含量也較高,其中配方5下蛹蟲草蟲草素含量最高,達(dá)4.75mg/g。配方5和配方6蟲草素含量差異顯著,配方5、6與配方1、2、3、4、7、8蟲草素含量差異極顯著。從表1還可見,配方5、6、7、8蟲草素含量大于配方1,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量玉米糝、蛋白胨有利于蟲草素積累;配方2、3、4蟲草素含量小于配方1,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加黃豆未能提高蛹蟲草蟲草素含量。

      2.2不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草腺苷含量的影響

      由表2可知,配方1下蛹蟲草腺苷含量最高,達(dá)0.55mg/g,其次為配方5,配方8下蛹蟲草腺苷含量最低。配方1、5與配方2、3、4、6、7、8腺苷含量差異極顯著。試驗表明,在純蛹培養(yǎng)基中添加黃豆、玉米糝、蛋白胨均未能顯著提高蛹蟲草腺苷含量。

      2.3不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草多糖含量的影響

      表3顯示,配方4下蛹蟲草多糖含量最高,達(dá)75.67mg/g,配方8下蛹蟲草多糖含量最低。配方2、3、4和配方1、5、6、7、8多糖含量差異極顯著,配方5、6和配方1、7、8多糖含量差異極顯著,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝有利于蛹蟲草多糖的產(chǎn)生和積累。

      2.4不同配方培養(yǎng)基對蛹蟲草蟲草酸含量的影響

      由表4可知,配方4下蛹蟲草蟲草酸含量最高,達(dá)76.73mg/g,配方3下蛹蟲草蟲草酸含量最低。配方4和其他配方下的蟲草酸含量差異極顯著。

      3結(jié)論與討論

      本研究對不同配方培養(yǎng)基處理下的蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,配方5(蠶蛹與玉米糝質(zhì)量比為7∶3)下蛹蟲草蟲草素含量最高,說明在純蛹培養(yǎng)基中添加適量玉米糝可顯著提高蟲草素含量;在純蛹培養(yǎng)基中添加適量黃豆、玉米糝有利于蛹蟲草多糖的產(chǎn)生和積累;配方4(蠶蛹與黃豆質(zhì)量比為5∶5)下蛹蟲草蟲草酸含量最高。綜上,以純蛹為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,添加適量黃豆、玉米糝、蛋白胨有利于蛹蟲草蟲草素、多糖、蟲草酸含量的提高。但在該試驗條件下,腺苷含量沒有顯著提高。如要提高腺苷含量,還須進(jìn)一步研究。

      蠶蛹營養(yǎng)價值高,可直接作為蛹蟲草的培養(yǎng)基,添加適量黃豆、玉米糝后培養(yǎng)基碳氮比更加合理,有利于蛹蟲草活性物質(zhì)產(chǎn)生和積累。如果再配合其他育種技術(shù),會使活性成分總量得到進(jìn)一步提高。在純蛹培養(yǎng)基中添加其他成分能否進(jìn)一步提高蛹蟲草中蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸含量,還須深入研究。

      參考文獻(xiàn):

      [1]敬一兵,陸魯生.蟲草[M].昆明:云南科技出版社,1986:24.

      [2]韋會平,肖波,胡開治.蛹蟲草藥用價值考[J].中藥材,2004,27(3):215-217.

      [3]林群英,宋斌,李泰輝.蛹蟲草研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)通報,2006,33(4):154-157.

      [4]翁梁,溫魯.硒和鈣對蛹蟲草活性物質(zhì)含量的影響[J].北方園藝,2012(22):159-161.

      [5]王志高,溫魯,袁小轉(zhuǎn),等.加硒對蛹蟲草主要活性成分含量的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(29):9293-9294.[HJ1.9mm]

      [6]翁梁,溫魯.TLCS與HPLC對比測定蟲草中蟲草素和腺苷含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2008,24(4):539-540.

      [7]翁梁,溫魯,楊芳,等.不同提取方法對蛹蟲草多糖抗氧化性的影響[J].食品科技,2008,33(11):180-182.

      [8]汪瓊,徐增萊,呂曄.微波消解ICP-MS法測定冬蟲夏草中30種無機元素含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(2):269-270.

      [9]溫魯,翁梁,朱明偉,等.不同林區(qū)蛹蟲草活性成分含量的比較[J].林業(yè)科學(xué),2008,44(8):149-151.endprint

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