蓮心堿固體分散體的表征及體外溶出度的測定

唐 婷， 嚴(yán) 航， 周 江， 桂 卉

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙410208）

蓮心堿固體分散體的表征及體外溶出度的測定

唐 婷， 嚴(yán) 航， 周 江， 桂 卉*

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長沙410208）

目的對蓮心堿固體分散體的溶出度進行測定，并探明蓮心堿在固體分散體中存在的狀態(tài)。方法以PVP-K30為載體材料，溶劑法制備蓮心堿固體分散體，通過顯微電鏡掃描法、紅外光譜法、差示量熱掃描法及X-ray衍射法對蓮心堿固體分散體的結(jié)構(gòu)進行鑒定，并進行體外溶出度測定。結(jié)果將藥物制成固體分散體后，蓮心堿以無定形狀態(tài)分散在PVP-K30載體材料中；與原料藥及物理混合物相比，固體分散體的溶出度、溶出速率均有明顯提高。結(jié)論將蓮心堿制備成固體分散體后，可顯著提高蓮心堿的溶出度及溶出速率，為蓮心堿相關(guān)制劑的研發(fā)及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

蓮心堿；固體分散體；結(jié)構(gòu)表征；溶出度

蓮心堿（1iensinine）是睡蓮科植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn）的蓮子心中含有量較高的一種雙芐基異喹啉類生物堿，具有降壓、抗心律失常［1-2］、抗氧化、降低血清總膽固醇等藥理作用。由于蓮心堿難溶于水，溶出速度慢，生物利用度低，極大地限制了其在臨床上的應(yīng)用。本實驗采用固體分散技術(shù)，以親水性載體材料PVP-K30為載體，采用溶劑法制得蓮心堿固體分散體，通過X射線衍射法、紅外光譜法、差示量熱掃描法、顯微成像法對其結(jié)構(gòu)進行表征，探明蓮心堿在固體分散體中存在的狀態(tài)，并對其體外溶出度進行考察，為蓮心堿相關(guān)制劑的研發(fā)及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，為固體分散技術(shù)用于提高難溶性藥物的溶出度和生物利用度提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZRS-8G型溶出儀（天津大學(xué)無線電廠）；756PC型紫外分光光度儀（上海奧普勒有限公司）；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 （鞏義市予華有限責(zé)任公司）；CP-114型電子分析天平 （上海奧豪斯公司）；傅里葉紅外掃描儀（FTIR-8000）；X衍射掃描儀 （北京宏昌信科技有限公司：XRD系列）；REM電子掃描儀（FEI公司：Quanta-200）；差示量熱掃描儀（NETZSCH STA 499 C）。

1.2 試藥 固體分散體自制 （蓮心堿的純度為50%）；蓮心堿對照品 （上海源葉生物有限公司，純度≥98%，批號20121122）；聚乙烯吡咯烷酮 （PVP-K30）上海源葉生物科技有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取蓮心堿對照品適量，用pH 6.8磷酸鹽緩沖液配制成 0.005、0.010、0.015 0、0.200、0.250、0.030 mg/m L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于282 nm處，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸曲線：Y=13.086X+ 0.018 3，r=0.999 6。結(jié)果表明蓮心堿對照品溶液在0.005～0.03 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 供試品的制備

2.2.1 固體分散體的制備［3］稱取蓮心堿和PVP-K30各1 g，加15 mL甲醇溶解，超聲處理10 min后，混合，磁力攪拌30 m in，揮干溶劑，40℃真空干燥，粉碎，過80目篩，制得蓮心堿固體分散體。

2.2.2 蓮心堿/PVP-K30的物理混合物的制備 將蓮心堿與PVP-K30以質(zhì)量比1∶1的比例準(zhǔn)確稱量后，置于研缽中充分混合，得到蓮心堿/PVP-K30物理混合物。

2.3 體外溶出度的測定 按照 《中國藥典》2010年版二部附錄XC中溶出度測定方法第一法 （漿法）測定溶出度。以pH=6.8的磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)，溫度 （37± 0.5）℃，轉(zhuǎn)速為100 r/min，取適量的固體分散體、蓮心堿、蓮心堿與PVP載體的物理混合物 （相當(dāng)于含蓮心堿1.0mg），分別于0、3、8、10、20、30、45 min時取樣7 mL（取后立即補充等量的溶出介質(zhì)），過0.45μm的微孔濾膜，取濾液作為供試品，在282 nm處測定其吸光度值，求算累積溶出百分率。

2.4 蓮心堿固體分散體結(jié)構(gòu)表征

2.4.1 顯微掃描電鏡 加速電壓20 kV，放大倍數(shù)2 000倍，分別對蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/PVP-K30物理混合物及蓮心堿固體分散體進行顯微電鏡掃描。

2.4.2 傅里葉紅外光譜鑒別 將蓮心堿，PVP-K30，蓮心堿/PVP-K30物理混合物、蓮心堿固體分散體用KBr壓片，分別在4 000～400 cm-1處檢測紅外吸收光譜。

2.4.3 差示掃描量熱分析 將蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/PVP-K30物理混合物及蓮心堿固體分散體分別封閉在鋁盤中，調(diào)節(jié)溫度，以10℃/min的速度升溫，在30～300℃范圍內(nèi)進行差示量熱掃描。

2.4.4 X-ray衍射分析 在室溫條件下，采用Cu靶，KA線，加速電壓為40 kV，掃描范圍5°～75°，掃描速度8°/min。采用壓片法制片，分別對蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/PVP-K30物理混合物及蓮心堿固體分散體的粉末進行X衍射掃描分析。

3 實驗結(jié)果

3.1 體外溶出度及溶出曲線 蓮心堿固體分散體、蓮心堿原料藥及蓮心堿/PVP-K30物理混合物（1∶1）在45 min的溶出度及累積溶出曲線見圖1。由圖可知，與蓮心堿原料藥及蓮心堿/PVP-K30物理混合物比較，蓮心堿固體分散體在溶出介質(zhì)中的溶出度、溶出速率都有較明顯提高。45 min時蓮心堿固體分散體的累積溶出百分率達(dá)到了88.02%，為蓮心堿原料藥的 4.71倍，物理混合物的6.55倍。

3.2 顯微掃描電鏡 蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/PVP-K30物理混合物、蓮心堿固體分散體顯微掃描電鏡結(jié)果見圖2。由圖2可知，在蓮心堿與PVP-K30物理混合物中，兩種物體只是物理混合，而在固體分散體中，蓮心堿高度分散在PVP-K30中，從而掩蓋了蓮心堿晶體狀形狀，說明蓮心堿固體分散體已經(jīng)形成，藥物以非晶體的狀態(tài)存在于固體分散體中，能夠提高藥物的溶出度。

3.3 傅里葉紅外光譜 蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/PVPK30物理混合物、蓮心堿固體分散體的紅外光譜圖見圖3。由圖3可知，蓮心堿固體分散體 （d）與PVP-K30（b）在2 370 cm-1處的-COCH3伸縮振動吸收峰和3 365 cm-1附近的-OH伸縮振動吸收峰的峰型相似，但在3 456 cm-1處的-OH伸縮振動吸收峰發(fā)生了明顯的紅移，且藥物的吸收強度降低，可能是蓮心堿和PVP-K30之間發(fā)生了結(jié)合作用，且以氫鍵結(jié)合，從而降低了藥物與PVP-K30之間的鍵能。此外，固體分散體中蓮心堿在2 370 cm-1處的特征峰被遮蔽，說明蓮心堿固體分散體已經(jīng)形成，且并非物理混合［4-5］。

圖2 顯微掃描電鏡結(jié)果

圖3 蓮心堿/PVP-K 30紅外吸收圖譜

3.4 差示掃描量熱分析 蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/ PVP-K30物理混合物、蓮心堿固體分散體的差示掃描升溫曲線見圖4。由圖4可知，蓮心堿/PVP-K30物理混合物在115°和83°兩點處的特征峰，分別為蓮心堿與載體PVP-K30的熔點峰。而固體分散體中蓮心堿的115°處的熔點峰消失了，只剩下PVP-K30的熔點峰。蓮心堿熔點峰的消失或者減少表明蓮心堿是以非晶態(tài)均勻分散在PVP-K30中，即形成了分散體［6-7］。

圖4 差示量熱掃描圖

3.5 X-Ray衍射分析 蓮心堿、PVP-K30、蓮心堿/PVPK30物理混合物、蓮心堿固體分散體的粉末衍射結(jié)果見圖5。由圖5可知，蓮心堿在12.5°、30.12°、52.66°處有強度的吸收，在40.06°也有吸收，PVP-K30在5°～75°范圍內(nèi)有13.54°、22.54°兩處較大的衍射峰；蓮心堿與PVP-K30物理混合物則為兩者的結(jié)合，保留了蓮心堿與PVP-K30的所有特征峰；而蓮心堿固體分散體中蓮心堿的特征晶體的衍射峰全部消失，僅保留了PVP-K30的兩個特征峰，證明蓮心堿是以非晶狀態(tài)均勻分散在載體中，形成了固體分散體［8］。

圖5 X-Ray衍射圖譜

4 結(jié)果與討論

體外溶出實驗顯示蓮心堿固體分散體的溶出度大于其物理混合物，大于蓮心堿原料藥，故將蓮心堿制備成固體分散體能夠增大其溶出度及溶出速率。

以PVP-K30為載體制備蓮心堿固體分散體，可明顯增加藥物蓮心堿的溶出度，究其原理，可能與蓮心堿在固體分散體中狀態(tài)的改變有關(guān)。顯微電鏡掃描法分析結(jié)果顯示，蓮心堿/PVP-K30物理混合物中，兩者僅為物理混合，而蓮心堿以非晶體的狀態(tài)存在于固體分散體中；由紅外色譜掃描圖可知，在固體分散體中，蓮心堿特征峰被載體所遮蔽，以高度分散的狀態(tài)存在于載體材料中；通過差示量熱掃描分析顯示，在固體分散體中蓮心堿的115°處的熔點峰消失，只剩下PVP-K30的熔點峰，說明蓮心堿與載體發(fā)生了相互作用，使蓮心堿的晶體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變；由X-ray衍射圖譜可知，蓮心堿的特征衍射峰清晰可見，而固體分散體的衍射峰僅為一條寬帶，說明在固體分散體中，蓮心堿的晶體已經(jīng)完全消失，而以高度分散的狀態(tài)分散在載體材料中，從而提高蓮心堿的溶出度及溶出速率。

以PVP-K30為載體材料，采用溶劑法制得固體分散體能顯著提高蓮心堿的溶出度及溶出速率，對于將蓮心堿制成固體分散體是否能提高其在體內(nèi)的生物利用度，將通過進一步的實驗進行研究。

［1］許 磊，姚崇舜，陳濟民.蓮心堿的研究概況［J］.中草藥，2000，31（12）：956-958.

［2］王 輝，劉 剛，羅順德.蓮心堿對血小板聚集-凝血功能和血栓形成的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2010，26（6）：768-772.

［3］唐 婷，彭買姣，周 江.蓮心堿固體分散體的制備工藝研究［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，34（4）：17-20.

［4］郭波紅，黃嘉敏，李曉芳，等.頭孢地尼-聚乙烯吡咯烷酮固體分散體的制備［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，32（8）：1072-1075.

［5］阮氏越秋，趙浩如.齊墩果酸固體分散體的制備及體外溶出度測定［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2003，34（3）：236-239.

［6］王曙賓，黃蘭芷.葛根素固體分散體的分散狀態(tài)及其體外評價［J］.中草藥，2007，38（11）：1632-1634.

［7］姜官鑫，沈國清，朱鴻林，等.阿維菌素緩釋固體分散體的制備及其性能研究［J］.科技通報，2012，28（5）：125-129.

［8］韓 剛，閻林奇，索 煒，等.大黃素固體分散體的制備及其溶出度測定［J］.中草藥，2011，42（3）：487-490.

R927.11

B

1001-1528（2015）08-1853-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.051

2014-05-17

湖南省教育廳創(chuàng)新平臺開放基金科研項目 （13K078）；湖南省科技計劃項目社會發(fā)展支撐計劃項目 （2013SK3100）；國家中醫(yī)藥管理局 “中藥藥劑學(xué)”重點學(xué)科項目（國中醫(yī)藥發(fā) ［2009］30號）；湖南省 “中藥學(xué)”重點學(xué)科建設(shè)項目資助（湘教通 ［2011］76號）

唐 婷（1988—），女，碩士生。E-mai1：232319194@qq.com

*通信作者：桂 卉，教授，碩士生導(dǎo)師，從事中藥新劑型與新技術(shù)研究。Te1：13707488252，E-mai1：guihui1993@126.com