曹雪萍　胡福良

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，杭州310058）

蜂膠活性成分咖啡酸苯乙酯的保肝作用

曹雪萍胡福良

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，杭州310058）

咖啡酸苯乙酯（CAPE）是蜂膠中研究最多的活性成分，具有多種生物學(xué)活性。本文按照肝損傷模型的誘導(dǎo)因素，綜述了近年來國內(nèi)外學(xué)者就CAPE對CCl4誘導(dǎo)的肝損傷、藥物性肝損傷、糖尿病性肝損傷、電磁波誘導(dǎo)的肝氧化應(yīng)激、肝缺血/再灌注性損傷、冷刺激誘導(dǎo)的肝損傷、LPS誘導(dǎo)的肝損傷以及膽汁淤積型肝損傷的保護(hù)作用的研究進(jìn)展，以期為蜂膠產(chǎn)品的深度開發(fā)利用和保肝活性的深入研究提供參考。

蜂膠；咖啡酸苯乙酯（CAPE）；肝損傷模型；保肝護(hù)肝作用

咖啡酸苯乙酯（CAPE），化學(xué)名為3-（3'，4'-二羥基苯基）-2-丙烯酸苯乙醇酯，是蜂膠中研究最多的生物活性成分［1］。研究表明，CAPE具有多種生物學(xué)活性，包括抑制核因子κB、抑制環(huán)氧合酶2活性和表達(dá)、抑制TREK-2鉀通道激活、預(yù)防回腸Th2免疫反應(yīng)、抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和調(diào)亡、減少淤積的腸道損傷、腺瘤性息肉和結(jié)腸癌的預(yù)防作用等［2］。近年來，有關(guān)CAPE保肝作用的研究非常多，結(jié)果表明，CAPE能通過抗炎、抗氧化等方式改善由各種因素導(dǎo)致的肝損傷。本文按照肝損傷模型的誘導(dǎo)因素，就近年來國內(nèi)外學(xué)者對CAPE保肝作用的相關(guān)研究進(jìn)行綜述，以期為蜂膠產(chǎn)品的深度開發(fā)利用和保肝活性的深入研究提供參考。

1　CAPE對CCl4誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用

四氯化碳（CCl4）是經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型常用到的毒劑之一，進(jìn)入體內(nèi)能引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝的損傷和壞死。它能通過肝細(xì)胞的CYP450代謝為更有毒性的三氯甲基自由基（CCl3·）和過氧化三氯甲基自由基（OOCCl3·），進(jìn)而引起脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致抗氧化酶活性下降；細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜的損傷；鈣離子穩(wěn)態(tài)打破；并且，高濃度CCl4本身具有的溶酶作用也會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞的壞死。因此，用CCl4誘導(dǎo)的肝損傷模型是研究蜂膠保肝作用的最常見模型。

Kus等［3］將24只大鼠分成3組：組I為對照組，組II大鼠每隔一天注射一次CCl4，時(shí)間為1個(gè)月，組III大鼠每隔一天注射一次CCl4和CAPE，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，收集血樣，檢測血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶及膽紅素的含量和肝丙二醛含量。結(jié)果表明，CAPE能顯著降低經(jīng)CCl4誘導(dǎo)后的血清中這些指標(biāo)的水平以及肝丙二醛的含量，同時(shí)組織病理學(xué)觀察結(jié)果表明，CAPE能減輕CCl4誘導(dǎo)的肝臟病變。

Sirag等［4］每天給大鼠口服2.5 mg/kg劑量的CCl4，持續(xù)8周，以誘導(dǎo)肝的損傷模型。CCl4誘導(dǎo)同時(shí)每天給予10 mg/kg的CAPE治療8周作為實(shí)驗(yàn)對照組，結(jié)束后對反映肝臟病變常見的生化指標(biāo)進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，CAPE的治療能使血清中AST、ALT和ALP的水平趨于正常，同時(shí)降低肝脂質(zhì)過氧化并顯著改善肝的GST、GSH及磷脂含量。此外，CAPE的治療還能改善CCl4所致的基因毒性，抑制CCl4誘導(dǎo)的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)，表明CAPE對CCl4所致的肝纖維化有一定的保護(hù)作用。Colakoglu等［5］通過電子顯微鏡對肝組織進(jìn)行觀察，結(jié)果表明CAPE能降低由CCl4導(dǎo)致的肝細(xì)胞細(xì)胞器膜和核膜的損傷，再次證實(shí)CAPE對CCl4致肝損傷的保護(hù)作用。

2　CAPE對藥物性肝損傷的保護(hù)作用

藥物性損傷是常見的肝損傷類型之一。藥物的大量攝入必然加重肝臟的負(fù)擔(dān)，一旦超出肝臟的代償能力，毒物必然會(huì)蓄積在肝內(nèi)，并通過多種方式損傷肝細(xì)胞。

Albukhari等［6］研究了CAPE對乳腺癌治療藥物三苯氧胺（TAM，它莫西芬）誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用。TAM誘導(dǎo)后，血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶升高，肝谷胱甘肽降低，氧化型谷胱甘肽增多，脂質(zhì)過氧化水平提高。此外，谷胱甘肽還原酶（GR）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性降低，并且肝組織中TNF-α含量升高。在CAPE的治療下，血清中被檢酶的活性有所下降，阻止谷胱甘肽含量的下降及氧化型谷胱甘肽的積累，降低脂質(zhì)過氧化水平，并恢復(fù)GR、GPx、SOD、CAT的活性和抑制TNF-α的升高?？傊?，CAPE能通過保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，抑制脂質(zhì)過氧化，增強(qiáng)抗氧化酶及抑制肝臟炎癥的方式保護(hù)大鼠對抗TAM誘導(dǎo)的肝臟毒性。CAPE還能通過降低活性氮和恢復(fù)谷胱甘肽水平的方式對抗癌藥物順鉑誘導(dǎo)的肝毒性，起到保肝作用［7］。

3　CAPE對糖尿病性肝損傷的保護(hù)作用

肝臟作為糖脂代謝重要器官，在糖尿病狀態(tài)下能產(chǎn)生脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化等肝臟病，這些慢性肝臟疾病的發(fā)生可能與氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激密切相關(guān)。因此，降血糖血脂同時(shí)緩解肝的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來減少細(xì)胞損傷，對改善糖尿病肝損傷有重要意義。

Yilmaz等［8］利用璉尿霉素誘導(dǎo)的大鼠糖尿病模型，研究CAPE對糖尿病大鼠肝臟脂質(zhì)過氧化水平和一些抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）活性的影響。結(jié)果表明，與對照組比較，糖尿病大鼠MDA含量及抗氧化酶的活性顯著上升；CAPE能降低糖尿病大鼠脂質(zhì)過氧化水平，使MDA恢復(fù)正常水平，但CAPE治療組的SOD和CAT活性低于糖尿病大鼠非治療組，分析認(rèn)為這可能是由于CAPE的抗氧化作用降低了糖尿病大鼠肝臟中自由基含量，從而阻止抗氧化酶活性的升高。

4　CAPE對電磁波誘導(dǎo)的肝氧化應(yīng)激的保護(hù)作用

電磁波雖然不能直接導(dǎo)致生物體產(chǎn)生自由基，但可通過影響自由基的分布和維持自由基代謝的酶類，干擾機(jī)體自由基代謝的動(dòng)態(tài)平衡，從而產(chǎn)生氧化應(yīng)激。Koyu等［9］以肝組織中CAT、SOD、GSH-Px、黃嘌呤氧化酶（XO）的酶活性及脂質(zhì)過氧化水平作為檢測指標(biāo)，利用SD大鼠研究CAPE對1800 Hz微波誘導(dǎo)的肝氧化應(yīng)激的影響。結(jié)果表明，CAPE能通過上調(diào)CAT、SOD等抗氧化酶的活性，緩解微波誘導(dǎo)的肝氧化應(yīng)激。他們后續(xù)的研究發(fā)現(xiàn)，CAPE能通過降低活性氧和增強(qiáng)抗氧化酶活性的方式減輕由一定強(qiáng)度電磁場誘導(dǎo)下的肝的氧化應(yīng)激［10］。

5　CAPE對肝缺血/再灌注性損傷的保護(hù)作用

Saavedra-Lopes等［11］通過手術(shù)制造鼠的肝缺血再灌注模型，將白化大鼠分為4組：假手術(shù)組（只進(jìn)行解剖，不進(jìn)行缺血再灌注處理）、缺血組（讓肝缺血60 min，再灌注之前將其殺掉）、缺血/再灌注組（缺血60 min，然后讓其再灌注6 h，之后將其殺掉）、缺血/再灌注加CAPE組（缺血60 min，再灌注6 h之前腹腔注射CAPE10 μmol/kg，治療30 min）。以血清中ALT、AST，組織中谷胱甘肽為檢測指標(biāo)，并評估肝組織的病理學(xué)損傷指數(shù)；通過肝組織切片結(jié)合免疫組化等方法觀察中性粒細(xì)胞的浸潤狀況、肝細(xì)胞凋亡狀況、四羥壬烯醛加合物的生成（評估脂質(zhì)過氧化程度）及NF-κB激活狀況。結(jié)果表明，再灌注后ALT、AST顯著增加，而CAPE治療組這兩種酶在血清中水平降低很多；缺血再灌注過程組織中谷胱甘肽含量逐漸降低，而在CAPE治療組得到部分恢復(fù)；缺血/再灌注組組織病理學(xué)損傷指數(shù)、凋亡指數(shù)、中性粒細(xì)胞浸潤程度、四羥壬烯醛的生成量及NF-κB激活程度都要高于缺血組，而CAPE治療組這些變化顯著降低。研究結(jié)果表明，這種保肝作用可能與CAPE抑制NF-κB激活有關(guān)。

6　CAPE對冷刺激誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用

Ates等［12］研究了CAPE對冷刺激誘導(dǎo)的肝氧化應(yīng)激的影響。將24只雌性大鼠分為4組：對照組、CAPE治療組、冷刺激組、CAPE治療的冷刺激組，以抗氧化酶（CAT、SOD、GSH-Px）活性、總谷胱甘肽含量以及MDA水平作為檢測指標(biāo)。結(jié)果表明，冷刺激會(huì)顯著降低這3種抗氧化酶活性及總谷胱甘肽含量，丙二醛含量升高。與冷刺激組相比，CAPE治療的冷刺激組這3種抗氧化酶活性及總谷胱甘肽水平顯著升高，丙二醛含量降低；組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，CAPE能減輕肝臟病變。總之，CAPE能通過調(diào)節(jié)抗氧化酶活性，對抗冷刺激誘導(dǎo)的肝的氧化應(yīng)激，表現(xiàn)為抑制脂質(zhì)過氧化，減輕肝損傷。

Pekmez等［13］將21只大鼠平均分3組：對照組、煙草煙霧刺激組和煙草煙霧刺激加CAPE治療組，利用煙草煙霧刺激60 d，每天4次，每次30 min，CAPE通過腹腔注入大鼠體內(nèi)，試驗(yàn)結(jié)束后，評估大鼠肝組織氧化應(yīng)激水平和血清中總膽紅素水平及轉(zhuǎn)氨酶活性。結(jié)果表明，煙草煙霧長時(shí)間刺激會(huì)提高血清中總膽紅素水平及轉(zhuǎn)氨酶活性和一些常見抗氧化酶活性和丙二醛含量的上升，而加入CAPE組大鼠的這些參數(shù)明顯降低，接近正常水平。

7　CAPE對LPS誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用

Korish和Arafa［14］研究CAPE對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥、肝和神經(jīng)損傷及與此相關(guān)的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。將50只大鼠分為3組：對照組、LPS組、LPS加CAPE組，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對血漿中不同的細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10）和sICAM-1進(jìn)行評估，同時(shí)對肝細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的組織病理學(xué)變化進(jìn)行評估。結(jié)果表明，LPS組表現(xiàn)為較高的炎癥因子水平，反映出系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。另外，還觀察到肝細(xì)胞壞死、凋亡、廣泛性出血、炎性細(xì)胞浸潤，以及腦星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹。而CAPE的使用能降低炎癥細(xì)胞因子和增加抗炎因子水平，這與肝腦組織中炎癥細(xì)胞浸潤減少的組織學(xué)觀察結(jié)果一致。表明CAPE能通過調(diào)節(jié)促炎與抗炎因子的平衡，抑制黏附分子表達(dá)的方式，減輕LPS誘導(dǎo)的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)及肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的損傷。

8　CAPE對膽汁淤積型肝損傷的保護(hù)作用

Coban等［15］將21只Swiss白化大鼠平均分成3組：對照組（只進(jìn)行簡單的剖腹手術(shù)，不進(jìn)行膽道結(jié)扎）、膽道結(jié)扎組、膽道結(jié)扎加CAPE治療組（CAPE 10 mmol/ kg，腹腔注射，一天一次，共14 d），以此來研究CAPE對膽汁郁積型肝損傷的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與膽道結(jié)扎組相比，CAPE治療組能降低血清中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）、AST、ALT水平，同時(shí)還能顯著降低組織中MDA和髓過氧化物酶（MPO）的水平，而相比之下，CAPE治療顯著提高了組織中谷胱甘肽的水平。此外，CAPE治療還能顯著降低白介素（IL-1a和IL-6）水平。表明CAPE能對膽汁郁積型肝損傷有保護(hù)作用，且這種作用與CAPE的抗氧化、抗炎有一定關(guān)系。Esrefoglu和Ara［16］的實(shí)驗(yàn)也表明，CAPE能保護(hù)肝細(xì)胞對抗膽道膽汁郁積誘導(dǎo)的肝損傷，并認(rèn)為這與CAPE的抗氧化作用有密切聯(lián)系。

此外，CAPE對老年大鼠的肝也有一定的保護(hù)作用，表現(xiàn)為降低老齡鼠肝組織MDA的水平并增加老齡鼠肝組織CAT活性［17］。

［1］Bankova V，Dyulgeroy A，Popov S，et al.Propolis produced in Bulgaria and Mongolia:phenolic compounds and plant origin.Apidologie，1992，23:79-85.

［2］Aviello G，Scalisi C，F(xiàn)ileccia R，et al.Inhibitory effect of caffeic acid phenethyl ester，a plant-derived polyphenolic compound，on rat intestinal contractility［J］.European Journal of Pharmacology，2010，640（1-3）:163-167.

［3］Kus I，Colakoglu N，Pekmez H，et al.Protective effects of caffeic acid phenethyl ester（CAPE）on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in rats［J］.Acta Histochemica，2004，106（4）:289-297.

［4］Sirag HM，Ibrahim HA，Amer AA，et al.Ameliorative effect of caffeicacid phenethylester and candsartaincilexetil on CCl4 hepatotoxicity in male rats［J］.Annals of Biological Research，2011，2（4）: 503-515.

［5］Colakoglu N，Kus I，Kukner A，et al.Protective effects of CAPE on liver injury induced by CCl4:an electron microscopy study［J］. Ultrastructural Pathology，2011，35（1）:26-30.

［6］Albukhari AA，Gashlan HM，El-Beshbishy HA，et al.Caffeic acid phenethyl ester protects against tamoxifen-induced hepatotoxicity in rats［J］.Food and Chemical Toxicology，2009，47（7）:1689-1695.

［7］Kart A，Cigremis Y，Karaman M，et al.Caffeic acid phenethyl ester（CAPE）ameliorates cisplatin-induced hepatotoxicity in rabbit［J］.Experimental and Toxicologic Pathology，2010，62（1）:45-52.

［8］Yilmaz HR，Uz E，Yucel N，et al.Protective effect of caffeic acid phenethyl ester（CAPE）on lipid peroxidation and antioxidant enzymes in diabetic rat liver［J］.Journal of Biochemical and Molecular Toxicology，2004，18（4）:234-238.

［9］Koyu A，Naziroglu M，Ozguner F，et al.Caffeicacid phenethyl ester modulates 1800MHz microwave-induced oxidative stress in rat liver［J］.Electromagnetic Biology and Medicine，2005，24（2）:135-142.

［10］Koyu A，Ozguner F，Yilmaz H，et al.The protective effect of caffeic acid phenethyl ester（CAPE）on oxidative stress in rat liver exposed to the 900 MHz electromagnetic field［J］.Toxicology and Industrial Health，2009，25（6）:429-434.

［11］Saavedra-Lopes M，Ramalho FS，Ramalho LN，et al.The protective effect of CAPE on hepatic ischemia/reperfusion injury in rats［J］.The Journal of Surgical Research，2008，150（2）:271-277.

［12］Ates B，Dogru MI，Gul M，et al.Protective role of caffeic acid phenethyl ester in the liver of rats exposed to cold stress［J］.Fundamental&Clinical Pharmacology，2006，20（3）:283-289.

［13］Pekmez H，Kus I，Colakoglu N，et al.The protective effects of caffeic acid phenethyl ester（CAPE）against liver damage induced by cigarette smoke inhalation in rats［J］.Cell Biochemistry and Function，2007，25（4）:395-400.

［14］Korish AA，Arafa MM.Propolis derivatives inhibit the systemic inflammatory response and protect hepatic and neuronal cells in acute septic shock［J］.Brazilian Journal of Infectious Diseases，2011，15（4）:332-338.

［15］Coban S，Yildiz F，Terzi A，et al.The Effect of caffeic acid phenethyl ester（cape）against cholestatic liver injury in rats［J］. Journal of Surgical Research，2010，159（2）:674-679.

［16］Esrefoglu M，Ara C.Beneficial effect of caffeic acid phenethyl ester（CAPE）on hepatocyte damage induced by bile duct ligation: an electron microscopic examination［J］.Ultrastructural Pathology，2010，34（5）:273-278.

［17］Esrefoglu M，Iraz M，Ates B，et al.Melatonin and CAPE are able to prevent the liver from oxidative damage in rats:an ultrastructural and biochemical study［J］.Ultrastructural Pathology，2012，36（3）:171-178.

國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)（CARS-45），上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目［（2014）第6-1-1號(hào)］

胡福良，E-mail:flhu@zju.edu.cn