動(dòng)物布氏桿菌病的診斷方法

劉偉群應(yīng)海剛

（1.內(nèi)蒙古巴林左旗動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,內(nèi)蒙古赤峰 025450；2.內(nèi)蒙古巴林左旗三山鄉(xiāng)農(nóng)村牧區(qū)綜合服務(wù)中心,內(nèi)蒙古赤峰 025474）

動(dòng)物布氏桿菌病的診斷方法

劉偉群1應(yīng)海剛2

（1.內(nèi)蒙古巴林左旗動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,內(nèi)蒙古赤峰 025450；2.內(nèi)蒙古巴林左旗三山鄉(xiāng)農(nóng)村牧區(qū)綜合服務(wù)中心,內(nèi)蒙古赤峰 025474）

布魯氏分枝桿菌病簡(jiǎn)稱布病，是由布魯氏桿菌引起的一種廣泛分布于世界各地的人畜共患的傳染病。近年來(lái)，本病多次暴發(fā)，凡有牲畜的地區(qū)都有布魯氏分枝桿菌病流行，是我國(guó)重點(diǎn)防治的地方病之一，主要發(fā)生在牧區(qū)。

1 病原體

布魯氏桿菌是革蘭氏陰性球桿菌，呈短桿狀、邊緣稍凸或直，末端鈍圓。布魯氏桿菌屬分為6個(gè)菌種，即羊種（馬耳他布魯氏菌）、牛種（流產(chǎn)布魯氏菌）、豬種及綿羊附睪種、沙林鼠種、犬種。臨床上以羊、牛、豬3種意義最大，羊種致病力最強(qiáng)。本菌為需氧菌，但很多株需CO2（5%～10%）環(huán)境，最適宜pH值6.6～7.4，最適宜溫度36℃～37℃。布魯氏桿菌在自然環(huán)境中生命力較強(qiáng)，在污染的土壤、水以及病畜的分泌物、排泄物及死畜的臟器中能生存1～4個(gè)月，在食品中約生存2個(gè)月。60℃加熱30 min、70℃加熱5 min或日光下曝曬4 h可殺死本菌，對(duì)常用化學(xué)消毒劑較敏感。

2 流行病學(xué)

本病的易感動(dòng)物范圍很廣，但主要感染羊、牛及豬。本病的主要傳染源是病畜及帶菌動(dòng)物，染疫動(dòng)物首先在同種動(dòng)物間傳播，造成帶菌或發(fā)病，隨后波及人類。本病一年四季均可發(fā)病，但以家畜流產(chǎn)季節(jié)為多。發(fā)病率，牧區(qū)高于農(nóng)區(qū)。流行區(qū)在發(fā)病高峰季節(jié)可呈點(diǎn)狀暴發(fā)流行。

3 臨床癥狀

本病的潛伏期長(zhǎng)短不一，短的兩周，長(zhǎng)的可達(dá)半年之久。家畜患病后癥狀基本相似，多數(shù)病例為隱性感染。早期出現(xiàn)結(jié)膜炎和體溫升高等。妊娠母畜流產(chǎn)（多在妊娠2～8個(gè)月），多為死胎或弱仔，但大多數(shù)流產(chǎn)經(jīng)兩個(gè)月后可以再受孕。畜群中關(guān)節(jié)炎、子宮內(nèi)膜炎、胎衣不下和不孕癥增多。公畜睪丸腫大，觸之熱、痛。多數(shù)病例有長(zhǎng)期起伏的發(fā)熱，稱“波狀熱”。

4 診斷

由于本病的易感動(dòng)物范圍很廣。主要侵害動(dòng)物的繁殖機(jī)能，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)極大的損失，所以本病的診斷很重要。

4.1 病原分離與鑒定

布魯氏桿菌是一種革蘭氏陰性球桿狀或短桿狀的細(xì)菌，培養(yǎng)條件較高，目前，常用血清葡萄糖瓊脂、胰蛋白大豆瓊脂等培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，通過(guò)布魯氏桿菌形態(tài)、染色、生長(zhǎng)特性、菌落形態(tài)、氧化酶及過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)及抗布魯氏桿菌多克隆抗體玻片凝集試驗(yàn)來(lái)鑒定布魯氏菌。

4.2 血清學(xué)診斷

4.2.1 全乳環(huán)狀試驗(yàn)

用一次性塑料注射器取新鮮乳樣1 mL，置于試管中，加入布病環(huán)狀反應(yīng)抗原1滴（約0.05 ml），搖動(dòng)使其充分混勻后，置于37℃恒溫水浴，1 h后小心取出試管，勿使振蕩，立即判定結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)為：明確有色脂環(huán)和白色乳柱，為“++++”；明確有色乳脂環(huán)和稍帶顏色乳柱，為“+++”；明確有色乳脂環(huán)和帶色較明顯的乳柱，為“++”；明確有色乳脂環(huán)和明確的有色乳柱，為“+”；乳脂環(huán)白色或略帶顏色和乳柱顯著著色，為“-”。

4.2.2 試管凝集試驗(yàn)（SAT）

SAT是許多國(guó)家布魯氏分枝桿菌病診斷的常規(guī)血清學(xué)方法，也是檢測(cè)布魯氏菌病的最經(jīng)典的方法。對(duì)被檢血清用0.5% 苯酚生理鹽水，分別1∶50、1∶100、1∶200、1∶400進(jìn)行倍比稀釋。然后，每個(gè)稀釋度加診斷抗源0.5 ml，混勻，與標(biāo)準(zhǔn)管比濁判斷結(jié)果。

4.2.3 平板凝集試驗(yàn)（PAT）

PAT是布魯氏分枝桿菌病血清學(xué)診斷的常規(guī)方法之一，常用作布魯氏分枝桿菌病普查的初檢。方法：取潔凈的玻璃板，劃成4cm2的小格，在每小格內(nèi)加被檢牛血清，每份血樣2個(gè)格，第1格加血清0.02mL，第2 格加血清0.04mL，然后加平板凝集反應(yīng)液0.03ml于每份被檢血清小格內(nèi)，并用玻璃棒混勻，同時(shí)做陰、陽(yáng)性血清對(duì)照。有凝集現(xiàn)象為陽(yáng)性，無(wú)凝集現(xiàn)象為陰性。平板凝集反應(yīng)具有操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快、易掌握、成本低的優(yōu)點(diǎn)。

4.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，新的快速方便的檢測(cè)技術(shù)不斷出現(xiàn)，ELISA方法特異性好，樣品需要量少，整個(gè)反應(yīng)僅需1.5h。判定：靜止5min，將反應(yīng)板放置酶聯(lián)反應(yīng)儀的正確位置上，在490nm 處空白調(diào)零，并測(cè)各孔OD值。OD 值≥0.32者判為陽(yáng)性。

4.3 PCR檢測(cè)技術(shù)

近十余年來(lái)，PCR是發(fā)展和普及最迅速的分子生物學(xué)新技術(shù)之一。由于它具有強(qiáng)大的擴(kuò)增能力，并且可與其他分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法相結(jié)合應(yīng)用，使其敏感性和特異性都大大增強(qiáng)，因而廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的各個(gè)學(xué)科。

5 結(jié)語(yǔ)與展望

布魯氏菌病是一種世界范圍的傳染病，不僅給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)?yè)p失也嚴(yán)重威脅著人類的健康。通過(guò)對(duì)幾種診斷方法的進(jìn)行比較，綜合檢測(cè)靈敏度和特異性，PCR法較高，ELISA等血清法較次。但血清法的操作簡(jiǎn)便、成本低，因此在時(shí)間檢疫工作中仍作為主要手段，PCR和ELISA準(zhǔn)確度高，但成本高。傳統(tǒng)血清法和ELISA法在檢測(cè)過(guò)程存在假陽(yáng)性的情況，在個(gè)別診斷時(shí)應(yīng)結(jié)合使用PCR法。