上皮性卵巢癌中Bcl-2/Bax比值與臨床病理因素及化療的關(guān)系

王穎欣，李昌英，何勝利

(1.河北省唐山市工人醫(yī)院分院婦產(chǎn)科，河北 唐山 063000；2.河北省灤縣食品藥品監(jiān)督管理局食品檢驗(yàn)中心，河北 灤縣 063700；3.河北省灤縣人民醫(yī)院外科，河北 灤縣 063700)

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·論 著·

上皮性卵巢癌中Bcl-2/Bax比值與臨床病理因素及化療的關(guān)系

王穎欣1，李昌英2，何勝利3

(1.河北省唐山市工人醫(yī)院分院婦產(chǎn)科，河北 唐山 063000；2.河北省灤縣食品藥品監(jiān)督管理局食品檢驗(yàn)中心，河北 灤縣 063700；3.河北省灤縣人民醫(yī)院外科，河北 灤縣 063700)

目的探討上皮性卵巢癌患者Bcl-2/Bax比值與臨床病理因素及化療敏感性的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)61例上皮性卵巢癌組織中的Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表達(dá)，分析Bcl-2/Bax比值與卵巢癌患者臨床病理因素及化療敏感性的關(guān)系。結(jié)果手術(shù)病理分期Ⅲ～Ⅳ期、組織學(xué)分級(jí)G2～G3、化療無(wú)效患者Bcl-2/Bax比值>1比例分別高于手術(shù)病理分期Ⅰ～Ⅱ期、組織學(xué)分級(jí)G1、化療有效患者(P<0.01)，不同年齡、不同病理類型、有無(wú)腹腔積液上皮性卵巢癌患者間Bcl-2/Bax比值>1比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Bcl-2/Bax比值與化療耐藥、手術(shù)病理分期及組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)(P<0.01)，與年齡、病理類型、腹腔積液無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論Bcl-2/Bax>1與上皮性卵巢癌手術(shù)病理分期、組織學(xué)分級(jí)關(guān)系密切；Bcl-2/Bax>1的患者順鉑化療敏感性差，易產(chǎn)生耐藥。

卵巢腫瘤；基因,Bcl-2；Bcl-2相關(guān)X蛋白質(zhì)doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.11.011

卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤。大多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期，多伴有腹腔種植及轉(zhuǎn)移，故總病死率一直居于高位。目前，初始腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)后輔以鉑類和紫杉醇的輔助化療是晚期卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，但鉑類藥物抵抗是卵巢癌治療失敗的主要原因。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡與腫瘤關(guān)系密切，且受一系列調(diào)控因子的影響[1]。凋亡機(jī)制在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展及化療耐藥的產(chǎn)生中起重要作用。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)上皮性卵巢癌組織中Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表達(dá)，探討B(tài)cl-2/Bax比值與卵巢癌臨床病理因素及化療敏感性的關(guān)系，旨在為卵巢癌患者早期診斷及選擇合理的化療方案提供理論依據(jù)。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2003年1月—2007年12月河北省唐山市工人醫(yī)院收治的原發(fā)性上皮性卵巢癌患者61例，均有完整病歷和隨訪資料，術(shù)前未接受化療，早期患者(Ⅰ～Ⅱa期)行卵巢癌根治術(shù)，晚期患者(Ⅱb～Ⅳ期)行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，手術(shù)均由高年資醫(yī)生完成，均經(jīng)組織病理學(xué)確診，術(shù)后給予以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療4個(gè)療程以上。61例上皮性卵巢癌患者，年齡13～79歲，中位年齡53歲；病理類型：漿液性癌43例，黏液性癌12例，子宮內(nèi)膜樣癌5例，其他1例；按2006年FIGO手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ期21例，Ⅲ、Ⅳ期40例；組織學(xué)分級(jí)：低級(jí)別(G1)25例，中、高級(jí)別(G2、G3)36例；術(shù)前有腹腔積液者17例，無(wú)腹腔積液者44例。

1.2 化療療效判定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟關(guān)于實(shí)體瘤化療療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定和進(jìn)展。完全緩解：臨床癥狀完全消失，脫落細(xì)胞學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，盆腔檢查和B超檢查均未見(jiàn)腫塊和腹腔積液，達(dá)6個(gè)月以上；部分緩解：臨床癥狀消失，腫塊縮小50%以上；穩(wěn)定(腫瘤縮小<50%或增大≤25%)；進(jìn)展(腫瘤增大>25%)。將完全緩解和部分緩解視為化療有效，穩(wěn)定和進(jìn)展視為化療無(wú)效。61例上皮性卵巢癌患者中化療有效者(化療敏感)27例，化療無(wú)效者(化療耐藥)34例。

1.3 試劑與方法Bcl-2單克隆抗體、Bax多克隆抗體、SP免疫組織化學(xué)染色超敏試劑盒和DAB染色試劑盒均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。采用免疫組織化學(xué)SP染色方法，按試劑盒說(shuō)明操作。

1.4 結(jié)果觀察與判定 請(qǐng)2位有經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)專家閱片，判定染色結(jié)果。Bcl-2、Bax染色均定位于細(xì)胞漿，鏡下組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞漿可見(jiàn)棕黃色顆粒沉著且染色明顯高于背景者視為陽(yáng)性表達(dá)(圖1，2)。高倍鏡下綜合陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及染色強(qiáng)度，用組織學(xué)評(píng)分(∑Pi)計(jì)算積分。其中P代表將陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)值進(jìn)行半定量分級(jí)，包括0分、<5%，1分、5%～25%，2分、>25%～50%，3分、>50%～75%，4分、>75%；i代表細(xì)胞染色深淺，不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。所得積分在1～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～8分為中度陽(yáng)性(++)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。++及以上者為陽(yáng)性表達(dá)，用以計(jì)算陽(yáng)性率。將Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)積分相除，61例上皮性卵巢癌患者Bcl-2/Bax比值≤1者23例，Bcl-2/Bax比值>1者38例。

圖1 卵巢癌Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性(SP×100)

Figure1PositiveexpressionofBcl-2inovariancancer(SP×100)

圖2 卵巢癌Bax表達(dá)陽(yáng)性(SP×100)

Figure2PositiveexpressionofBaxinovariancancer(SP×100)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同臨床因素Bcl-2/Bax比值比較 手術(shù)病理分期Ⅲ～Ⅳ期、組織學(xué)分級(jí)G2～G3、化療無(wú)效患者Bcl-2/Bax比值>1比例高于手術(shù)病理分期Ⅰ～Ⅱ期、組織學(xué)分級(jí)G1、化療有效患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；不同年齡、不同病理類型、有無(wú)腹腔積液上皮性卵巢癌患者間Bcl-2/Bax比值>1比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 上皮性卵巢癌患者不同臨床因素Bcl-2/Bax比值比較

2.2 相關(guān)性分析Bcl-2/Bax比值與化療耐藥、手術(shù)病理分期和組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)(P<0.01)，與年齡、病理類型、腹腔積液無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 相關(guān)性分析

3 討 論

細(xì)胞凋亡又稱程序性死亡，是指機(jī)體為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序死亡。越來(lái)越多的研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡異常有關(guān)，Bcl-2家族的表達(dá)在細(xì)胞凋亡調(diào)控中發(fā)揮著非常重要作用[2-3]。

Bcl-2和Bax是Bcl-2家族中的2個(gè)代表成員。其中Bcl-2是抗凋亡分子,是一個(gè)較好的預(yù)后指標(biāo)，定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和連續(xù)的核周膜[4]。其抑制細(xì)胞凋亡的主要機(jī)制為：通過(guò)阻止線粒體細(xì)胞色素C的釋放及降低caspase蛋白酶的活性[5]來(lái)發(fā)揮抗凋亡作用；通過(guò)抑制鈣離子的跨膜流動(dòng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度來(lái)調(diào)節(jié)凋亡。Bax是促凋亡分子，是與Bcl-2同源的相關(guān)蛋白，存在于細(xì)胞內(nèi)膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核上，能拮抗Bcl-2的生物學(xué)活性，加速細(xì)胞凋亡。

Bcl-2/Bax比率是調(diào)控細(xì)胞死亡的“可變電阻器”，在外界因素的刺激下，Bcl-2和Bax調(diào)控因子是否平衡決定了細(xì)胞的生死。有研究認(rèn)為，Bcl-2、Bax可以形成異源二聚體，二者的比例調(diào)控著細(xì)胞的凋亡，當(dāng)Bcl-2過(guò)多時(shí)，細(xì)胞凋亡減少，而B(niǎo)ax增多時(shí)，細(xì)胞凋亡加速[6-7]。

Bcl-2/Bax比值決定了細(xì)胞是否進(jìn)入凋亡狀態(tài)。王琳等[8]研究發(fā)現(xiàn)，由正常胃黏膜→胃癌前病變→胃癌的演變過(guò)程中，Bcl-2 對(duì)細(xì)胞凋亡有明顯負(fù)調(diào)節(jié)作用。劉紅等[9]研究顯示，溶血磷脂酸(lysophosphatidicacid,LPA)促進(jìn)卵巢癌發(fā)展的機(jī)制之一可能是通過(guò)LPA2和LPA3影響B(tài)cl-2和Bax的表達(dá)，從而改變Bcl-2/Bax比例，抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，手術(shù)病理分期Ⅲ～Ⅳ期、組織學(xué)分級(jí)G2～G3患者Bcl-2/Bax比值>1比例高于手術(shù)病理分期Ⅰ～Ⅱ期、組織學(xué)分級(jí)G1患者，且Bcl-2/Bax比值與手術(shù)病理分期和組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)。由此推斷，分期較晚及組織學(xué)分級(jí)較高的卵巢癌中，細(xì)胞凋亡受到抑制，Bcl-2/Bax比值調(diào)控著卵巢癌的發(fā)生及發(fā)展。申薇等[10]成功建立了卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP，并研究其與凋亡途徑蛋白的關(guān)系，表明其耐藥機(jī)制可能與Bcl-2的異常表達(dá)有關(guān)。周明杰等[11]研究發(fā)現(xiàn)，與親本細(xì)胞株Hep3B細(xì)胞相比，在紫杉醇耐藥的人肝癌細(xì)胞株Hep3B/TAX中抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量顯著升高，促凋亡蛋白Bax的表達(dá)量顯著降低，表現(xiàn)出凋亡抵抗的現(xiàn)象，證實(shí)了肝癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥機(jī)制主要是通過(guò)改變細(xì)胞線粒體上與凋亡相關(guān)蛋白的含量，導(dǎo)致凋亡抵抗現(xiàn)象的出現(xiàn)。黃錦宏等[12]研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒介導(dǎo)的白細(xì)胞介素24基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞的放療增敏作用之一是上調(diào)促細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Bax，并下調(diào)細(xì)胞抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)，從而改變Bax/Bcl-2的比例來(lái)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，化療無(wú)效患者Bcl-2/Bax比值>1的比例明顯高于化療有效患者，且Bcl-2/Bax比值與上皮性卵巢癌化療耐藥呈正相關(guān)，即上皮性卵巢癌化療耐藥與凋亡抵抗有關(guān)。

由此可見(jiàn)，在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，Bcl-2/Bax比值增高，說(shuō)明凋亡抑制作用占優(yōu)勢(shì)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞不易于凋亡，積聚相對(duì)較多，惡性程度相對(duì)增高，并且影響了化療藥物的促凋亡作用，從而出現(xiàn)化療耐藥。

總之，Bcl-2/Bax比值>1提示上皮性卵巢癌患者的手術(shù)病理分期晚、組織學(xué)分級(jí)高及化療耐藥，聯(lián)合檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白并計(jì)算其比值可以作為早期診斷及預(yù)測(cè)化療敏感性的指標(biāo)。Bcl-2、Bax基因還可以成為抗卵巢癌的治療靶點(diǎn)，通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)預(yù)防及治療卵巢癌將會(huì)受到越來(lái)越多的重視。

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(本文編輯：趙麗潔)

Relationship of Bcl-2/Bax ratio with pathological factors and chemotherapyin primary epithelial ovarian cancer

WANGYing-xin1,LIChang-ying2,HESheng-li3

(1.Department of Obstetrics and Gynecology,Branch Hospital,the Workers′ Hospital of Tangshan City,Hebei Province，Tangshan 063000,China；2.Department of Food Inspection Center,Food and Drug Administration of Luanxian,Hebei Province，Luanxian 063700,China；3.Department of Surgery,the People′s Hospital of Luanxian County,Hebei Province，Luanxian 063700，China)

ObjectiveToexploretherelationshipofBcl-2/Baxratiowithpathologicalfeatures,sensitivitytoplatinum-basedchemotherapyofpatientswithprimaryepithelialovariancancer.MethodsTheexpressionsofBcl-2proteinandBaxproteinwereexaminedin61paraffinspecimensofepithelialovariancarcinomabySPimmuohistochemicalmethodtocalculateBcl-2/Baxratio,thentoexploretherelationsbetweenBcl-2/Baxratioandpathologicalfeatures,sensitivitytoplatinum-basedchemotherapyofpatientswithprimaryepithelialovariancancer.ResultsTheproportionofBcl-2/Bax>1intheoperational-pathologicalstageⅢ-Ⅳ,histologicalgradeG2-G3andchemotherapyresistantpatientswererespectivelyhigherthanthatinoperational-pathologicalstageⅠ-Ⅱ,histologicalgradeG1andchemotherapysensitivepatients(P<0.01).TherewerenostatisticalsignificanceintheproportionsofBcl-2/Bax>1patientswithdifferentages,pathologicalsubtypesandasceticfluid(P>0.05).TherewerepositivecorrelationbetweenBcl-2/Baxratioandchemotherapyresistance,operational-pathologicalstageandhistologicalgrade(P<0.01),whileBcl-2/Baxratioshowednocorrelationwithage,pathologicalsubtypeandasceticfluid.ConclusionBcl-2/Bax>1hascloserelationwiththeoperational-pathologicalstageandhistologicalgradeofpatientswithprimaryepithelialovariancancer.PatientswithprimaryepithelialovariancancerandBcl-2/Bax>1maybeinsensitivetoplatinumchemotherapy.

ovarianneoplasms;genes,Bcl-2；Bcl-2-associatedXprotein

2015-06-03；

2015-08-25

河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃(20121574)

王穎欣(1975-)，女，河北唐山人，河北省唐山市工人醫(yī)院分院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事婦產(chǎn)科疾病診治研究。

R

A

1007-3205(2015)11-1282-04