何林秀，孫明立，邊競，于兆進，陳文捷，李亞楠，魏敏杰

（中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，沈陽 110122）

ω-3魚油脂肪乳對環(huán)磷酰胺所致小鼠胃黏膜損傷的保護作用

何林秀，孫明立，邊競，于兆進，陳文捷，李亞楠，魏敏杰

（中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，沈陽 110122）

目的探討ω-3魚油脂肪乳對環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的小鼠胃黏膜損傷的保護作用。方法45只昆明小鼠隨機分為空白對照組、模型對照組和ω-3魚油脂肪乳組，每組15只。利用環(huán)磷酰胺制備小鼠胃黏膜損傷模型。造模后，ω-3魚油脂肪乳組小鼠尾靜脈注射ω-3魚油脂肪乳（15 mL/kg），1次/d，連續(xù)2周，其余2組注射等量的生理鹽水。自造模之日起每日觀察小鼠狀態(tài)并記錄小鼠體質(zhì)量及攝食量；于給藥第1天、第7天、第14天每組分別處死5只小鼠，采用HE染色法觀察小鼠胃黏膜形態(tài)學(xué)變化；采用黃嘌呤氧化法檢測小鼠胃黏膜組織中超氧化物歧化酶（SOD）的含量；采用紫外比色法檢測小鼠胃黏膜組織中單胺氧化酶（MAO）的含量。結(jié)果與模型對照組相比，ω-3魚油脂肪乳組小鼠的一般狀況和營養(yǎng)狀態(tài)明顯改善；給藥第14天，與模型對照組相比，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃黏膜損傷明顯改善、小鼠胃黏膜中MAO和SOD含量顯著升高（P＜0.05）。結(jié)論ω-3魚油脂肪乳對環(huán)磷酰胺所致小鼠胃黏膜損傷具有顯著的保護作用，其機制可能與上調(diào)MAO和SOD水平有關(guān)。

ω-3魚油脂肪乳；環(huán)磷酰胺；胃黏膜損傷

環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）是氮芥與磷酸胺基組成的化合物，其進入體內(nèi)后分解產(chǎn)生的酰胺氮芥對腫瘤細胞具有細胞毒性作用，為最常用的烷化劑類抗腫瘤藥，臨床上用于多種惡性腫瘤（惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤）的治療。CTX作為一種廣泛應(yīng)用的抗癌藥物，其常見的不良反應(yīng)有骨髓抑制、泌尿系統(tǒng)癥狀和消化系統(tǒng)癥狀等，其中消化系統(tǒng)癥狀（惡心、嘔吐）嚴重影響患者的營養(yǎng)狀況和生活質(zhì)量。

ω-3魚油脂肪乳富含二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA），2者均為ω-3多不飽和脂肪酸。已有大量研究證明［1，2］，EPA和DHA在抗炎、抗血栓、降低血漿中甘油三酯水平、預(yù)防過敏性疾病、改善潰瘍性結(jié)腸炎等方面發(fā)揮重要作用。但是，ω-3魚油脂肪乳對環(huán)磷酰胺所致胃腸道損傷是否具有保護作用仍未知。本研究通過觀察ω-3魚油脂肪乳對環(huán)磷酰胺所致胃損傷小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量、攝食量、胃黏膜組織形態(tài)學(xué)變化及胃黏膜中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和單胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）活性的影響，研究ω-3魚油脂肪乳對環(huán)磷酰胺所引起的小鼠胃黏膜損傷的保護作用，并探討其可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

注射用CTX（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司）；ω-3魚油脂肪乳（費森尤斯卡比公司）；SOD檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；MAO檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2 主要儀器

電子稱（JIELONG）；攤烤片機（金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司，YD-AB）；石蠟包埋機（沈陽市龍首電子儀器有限公司，LS-100）；半自動輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機（Thermo scientific，HM 340E）；高級研究型顯微鏡（尼康，80i）；組織勻漿機（MACS）；微量高速離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司，TG16-W）；數(shù)顯恒溫攪拌循環(huán)水箱（國華，HH-60）；紫外可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司，UV-2000）。

1.3 實驗動物

清潔級健康昆明種小鼠，體質(zhì)量25～30 g，雌雄各半，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，分開飼養(yǎng)，限食不限水。

1.4 分組及處理

將昆明小鼠按體質(zhì)量隨機分為空白對照組、模型對照組和ω-3魚油脂肪乳組，每組15只。按120 mg/kg的劑量將注射用環(huán)磷酰胺對模型對照組和魚油脂肪乳組小鼠進行腹腔注射，1次/d，連續(xù)2 d，同時，對空白對照組小鼠腹腔注射等量生理鹽水。從第3天起，ω-3魚油脂肪乳組小鼠尾靜脈注射ω-3魚油脂肪乳（15 mL/kg），1次/d，于造模后14 d停藥，空白對照組和模型對照組小鼠尾靜脈注射等量生理鹽水。于給藥第1天、第7天、第14天每組分別處死5只小鼠，取小鼠胃組織用于后續(xù)檢測。

1.5 一般狀況及體質(zhì)量、攝食量的動態(tài)觀察

每日監(jiān)測小鼠精神狀況、體質(zhì)量及攝食量，繪制小鼠生長曲線和攝食量曲線。

1.6 小鼠胃黏膜病理學(xué)檢測

將小鼠胃組織經(jīng)過固定、脫水、透明、包埋、切片、貼片、烤片后進行HE染色，光鏡下觀察小鼠胃黏膜病理學(xué)變化。

1.7 小鼠胃組織中SOD及MAO活性檢測

采用黃嘌呤氧化法檢測小鼠胃黏膜組織中SOD的活性，采用紫外比色法檢測小鼠胃黏膜組織中MAO的活性，具體操作步驟見試劑盒說明書。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 小鼠的一般狀況

空白對照組小鼠食欲如常，精神狀況良好；模型對照組小鼠精神萎靡，食欲不佳；與模型對照組相比，ω-3魚油脂肪乳組小鼠癥狀明顯改善。

2.2 小鼠的體質(zhì)量及攝食量變化

實驗期間，空白對照組小鼠體質(zhì)量增加不明顯，模型對照組及ω-3魚油脂肪乳組小鼠體質(zhì)量先下降后上升，各時間點ω-3魚油脂肪乳組小鼠體質(zhì)量均高于同一時間模型對照組小鼠，見圖1?？瞻讓φ战M小鼠攝食量穩(wěn)定，模型對照組及ω-3魚油脂肪乳組小鼠攝食量先減少隨后增多，并且從給藥第10天開始，ω-3魚油脂肪乳組小鼠攝食量持續(xù)高于同一時間點模型對照組小鼠，見圖2。

2.3 小鼠胃黏膜病理學(xué)變化

光鏡下可見空白對照組小鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊，未出現(xiàn)典型的胃黏膜病變。給藥第1天，模型對照組和ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃黏膜損傷嚴重，上皮細胞脫落明顯，腺管形態(tài)消失；給藥第7天，模型對照組小鼠胃腺管結(jié)構(gòu)少量形成，ω-3魚油脂肪乳組小鼠可見明顯的排列疏松的腺管結(jié)構(gòu)；給藥第14天，模型對照組小鼠胃腺管結(jié)構(gòu)排列紊亂，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)已基本完整，僅可見部分上皮細胞脫落，見圖3。

2.4 小鼠胃黏膜組織中SOD活性的變化

給藥第1天、第7天、第14天分別取小鼠胃組織檢測SOD活性，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，各時間模型對照組小鼠胃組織SOD活性均顯著降低（P＜0.05）；與模型對照組相比，給藥第1天和第7天，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃組織中SOD活性無顯著改變（P＞0.05）；給藥第14天，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃組織中SOD活性明顯高于模型對照組（P＜0.05）。見圖4。

圖1 各處理組小鼠體質(zhì)量變化曲線Fig.1 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on body weight

圖2 各處理組小鼠攝食量變化曲線Fig.2 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on dietary intake

圖3 各處理組小鼠胃黏膜組織病理學(xué)改變 HE染色×200Fig.3 The pathological changes of gastric mucosa HE staining×200

圖4 各處理組小鼠胃組織中SOD的活性Fig.4 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on SOD activity

2.5 小鼠胃組織中MAO活性的變化

與空白對照組相比，各時間模型對照組小鼠胃組織檢測MAO活性均顯著降低（P＜0.05）；與模型對照組相比，給藥第1天和第7天，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃組織中MAO活性無顯著改變（P＞0.05）；給藥第14天，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃組織中MAO活性明顯高于模型對照組（P＜0.05），見圖5。

圖5 各處理組小鼠胃組織中MAO的活性Fig.5 Effect of omega-3 fish oil fat emulsion on MAO activity

3 討論

ω-3魚油脂肪乳中富含ω-3多不飽和脂肪酸，ω-3多不飽和脂肪酸是人體自身不能合成但又不可缺少的重要營養(yǎng)物質(zhì)，已有研究［3］證明，飲食中補充ω-3多不飽和脂肪酸可以降低多種促炎介質(zhì)（如IL-2、IL-6、TNF-α等）的產(chǎn)生，在多種炎癥性疾?。ㄈ珙愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎［4］等）中發(fā)揮積極作用。另外，魚油補充劑還能夠促進短腸綜合征模型大鼠的腸道代償作用［5］、促進腸道缺血再灌注模型大鼠的腸道恢復(fù)［6］、維持胃上皮的完整性并保護胃黏膜［7］。但是，ω-3魚油脂肪乳對化療所致胃腸道損傷是否具有保護作用未見報道。化療會帶來胃腸道不良反應(yīng)，產(chǎn)生消化系統(tǒng)癥狀，影響患者營養(yǎng)狀態(tài)，因此本研究首先通過觀察ω-3魚油脂肪乳對小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量及攝食量的影響，以初步評價ω-3魚油脂肪乳的胃腸道保護作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ω-3魚油脂肪乳能改善小鼠的一般狀態(tài)，改善小鼠體質(zhì)量和攝食水平，提示ω-3魚油脂肪乳可能對CTX所致的小鼠胃黏膜損傷具有一定的保護作用。為深入觀察ω-3魚油脂肪乳的保護作用，我們進一步采用HE染色法觀察ω-3魚油脂肪乳對胃黏膜病理損傷的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型對照組相比，ω-3魚油脂肪乳組小鼠胃黏膜損傷明顯改善，以上結(jié)果提示ω-3魚油脂肪乳對CTX所致的小鼠胃黏膜損傷具有保護作用。

5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）既是一種神經(jīng)遞質(zhì)，廣泛參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)過程，又是一種自體活性物質(zhì)，在外周組織中發(fā)揮重要功能。研究表明，化療引起的5-HT釋放能夠興奮黏膜迷走傳入纖維，從而發(fā)生惡心、嘔吐。MAO作為催化單胺氧化脫氨的酶，是催化降解5-HT的重要酶類。近來研究表明［8］，抗腫瘤藥物對MAO的活性具有很強的抑制作用，如果其活性降低則5-HT的降解速度降低，使患者產(chǎn)生胃腸道不良反應(yīng)。故為探討ω-3魚油脂肪乳胃黏膜損傷的保護機制，我們研究了ω-3魚油脂肪乳對小鼠胃組織中MAO活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ω-3魚油脂肪乳可顯著增加小鼠胃組織中MAO活性，提示ω-3魚油脂肪乳對CTX所致小鼠胃黏膜損傷的保護作用可能與上調(diào)MAO水平有關(guān)。

SOD廣泛分布于各種生物體內(nèi)，是體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化金屬酶，在機體氧化與抗氧化平衡中起到至關(guān)重要的作用?；熕幬镆鹞改c道黏膜損傷的機制之一就是能夠引起自由基生成增加。因此，為進一步探討ω-3魚油脂肪乳的胃腸道保護機制，本研究探討了ω-3魚油脂肪乳對小鼠胃組織中SOD活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ω-3魚油脂肪乳可顯著增加小鼠胃組織中SOD活性，提示ω-3魚油脂肪乳對CTX所致小鼠胃黏膜損傷的保護作用可能與上調(diào)SOD水平有關(guān)。

總之，本研究結(jié)果顯示，ω-3魚油脂肪乳對CTX所致小鼠胃黏膜損傷具有顯著的保護作用，其機制可能與上調(diào)MAO和SOD水平有關(guān)。

［1］HS W.Overview of prescription omega-3 fatty acid products for hypertriglyceridemia［J］.Postgraduate Med，2014，126（7）：7-18.

［2］Miyata J，Arita M.Role of omega-3 fish oil fat emulsion and their metabolites in asthma and allergic diseases.［J］.Allergol Inter，2015，64（1）：27-34.

［3］孔萬權(quán)，王征，夏軼姿，等.ω-3多不飽和脂肪酸對急性呼吸窘迫綜合征患者血清炎癥介質(zhì)的影響［J］.中華危重癥醫(yī)學(xué)雜志（電子版），2012，5（1）：11-14.

［4］Leeb BF，Sautner J，Andel I，et al.Intravenous application of omega-3 fish oil fat emulsion in patients with active rheumatoid arthritis. The ORA-1 trial.An open pilot study［J］.Lipids，2006，41（1）：29-34.

［5］Sukhotnik I，Shany A，Bashenko Y，et al.Parenteral but not enteral omega-3 fish oil fat emulsion（Omegaven）modulate intestinal regrowth after massive small bowel resection in rats［J］.JPEN J Parenter Enteral Nutr，2010，34（5）：503-512.

［6］Igor S，Nadav S，Yulia P，et al.Parenteral omega-3 fatty acids（Omegaven）modulate intestinal recovery after intestinal ischemia-reperfusion in a rat model［J］.J Pedia Surg，2011，46（7）：1353-1360.

［7］Yu JH，Kang S，Jung U，et al.Effects of omega-3 fish oil fat emulsion on apoptosis of human gastric epithelial cells exposed to silicaimmobilized glucose oxidase［J］.Ann N Y Acad Sci，2009，1171（6）：359-364.

［8］鞠傳霞，岳旺，孫福生，等.塞來昔布抑制順鉑致大鼠遲發(fā)性嘔吐的作用及機制研究［J］.中國藥房，2009，28：2174-2176.

（編輯 武玉欣）

Protective Effect of Omega-3 Fish Oil Fat Emulsion on Cyclophosphamide-induced Gastric Mucosal Injury in Mice

HE Lin-xiu，SUNMing-li，BIANJing，YU Zhao-jin，CHEN Wen-jie，LIYa-nan，WEIMin-jie

（Department of Pharmacology，School of Pharmacy，China Medical University，Shenyang 110122，China）

ObjectiveTo investigate the protective effect of omega-3 fish oil fat emulsion on cyclophosphamide-induced gastric mucosal injury in mice.MethodsForty-five Kunming mice were randomly divided into three groups as control，model，and omega-3 fish oil fat emulsion group（with 15 mice in each group）.Mice of the two experiment groups were administrated with cyclophosphamide i.p.for 2 days to establish the damage model. Then mice in omega-3 fish oil fat emulsion group received omega-3 fish oil fat emulsion at a dose of 15 mL/kg daily for 14 days.Meanwhile，the animals in control group and model group were intravenously administered with the same volume of saline.The weight and food intake of the mice in each group were assessed daily.Five mice in each group were respectively sacrificed at day 1，day 7，day 14 after intravenous injection.Morphology of gastric mucosa was observed by HE staining and the activities of SOD and MAO in gastric mucosa were measured respectively by xanthine oxidation and ultraviolet spectrophotometry methods.ResultsCompared with the model group，the general status，nutritional status and the injury in stomach mucosa in omega-3 fish oil fat emulsion group were significantly improved.After 14 day′s treatment，the activities of SOD and MAO in gastric mucosa of mice in omega-3 fish oil fat emulsion group were significantly increased（P＜0.05）compared with model group.Conclusionomega-3 fish oil fat emulsion has a significant protective effect on the cyclophosphamide induced injury in gastric mucosa of mice，which may be related to the upregulation of MAO and SOD.

omega-3 fish oil fat emulsion；cyclophosphamide；gastric mucosal lesion

R965.1

A

0258-4646（2015）12-1090-04

遼寧省高校創(chuàng)新團隊支持計劃（LT2014016）

何林秀（1992-），女，碩士研究生.

魏敏杰，E-mail：weiminjiecmu@163.com

2015-05-17

網(wǎng)絡(luò)出版時間：