2013年陜西市售水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫的檢測(cè)

張藝蓓，岳田利，喬海鷗，賈 如，蔣旭鵬，李 璐

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100； 2 陜西省疾病預(yù)防控制中心 理化檢驗(yàn)室，陜西 西安 710054)

2013年陜西市售水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫的檢測(cè)

張藝蓓1，岳田利1，喬海鷗2，賈 如1，蔣旭鵬1，李 璐1

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100； 2 陜西省疾病預(yù)防控制中心 理化檢驗(yàn)室，陜西 西安 710054)

【目的】 對(duì)2013年陜西省市售水產(chǎn)品中的4種獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)研究，為保證當(dāng)?shù)厥称钒踩峁﹨⒖肌！痉椒ā?隨機(jī)抽取16種購(gòu)自陜西省10個(gè)地市批發(fā)市場(chǎng)的120份魚(yú)樣品，采集魚(yú)樣可食部分勻漿后用乙腈提取，經(jīng)中性氧化鋁凈化，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)獸藥孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝產(chǎn)物隱性孔雀石綠、隱性結(jié)晶紫的殘留情況進(jìn)行檢測(cè)和定性、定量分析，統(tǒng)計(jì)4種獸藥殘留的總檢出率、16種樣品中獸藥殘留的檢出率、10個(gè)地市獸藥殘留的檢出率、4種獸藥殘留的平均水平及同一樣品中4種獸藥的混配使用情況。【結(jié)果】 16種120份魚(yú)肉樣品中4種獸藥的總檢出率為4.6%，其中隱性結(jié)晶紫未檢出；120份魚(yú)肉樣品獸藥殘留的樣品檢出率為15.8%，其中梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)、鯉魚(yú)、鯰魚(yú)和草魚(yú)獸藥殘留的檢出率分別為100.0%，100.0%，33.3%，15.4%和11.8%，高于2011年的全國(guó)平均水平(9.0%)，其余11種魚(yú)樣中未檢出獸藥殘留；除榆林外的9個(gè)地市市售魚(yú)樣中均檢出獸藥殘留，其中商洛、咸陽(yáng)的檢出率最高，均為10.4%；來(lái)自商洛的鯰魚(yú)樣品同時(shí)檢出多種獸藥殘留，說(shuō)明商洛存在多種獸藥混配使用現(xiàn)象?！窘Y(jié)論】 陜西省市售水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的總檢出率并不高，但市場(chǎng)占有率較高的鯉魚(yú)、鯰魚(yú)、草魚(yú)樣品中均有獸藥殘留，且檢出率均較高；10個(gè)地市中有9個(gè)地市市售水產(chǎn)品中均有獸藥檢出，且存在多種獸藥混配使用情況，對(duì)人體健康具有潛在威脅，應(yīng)當(dāng)引起重視。

水產(chǎn)品；孔雀石綠；結(jié)晶紫；獸藥殘留檢測(cè)；陜西省

孔雀石綠(Malachite green,MG)和結(jié)晶紫(Crystal violet，CV)屬于三苯甲烷類物質(zhì)，是紡織工藝中使用的染料，曾因其具有消毒和殺菌作用而在水產(chǎn)養(yǎng)殖和運(yùn)輸過(guò)程中作為驅(qū)蟲(chóng)劑和殺菌劑使用，以防治魚(yú)類水霉病、爛腮病及寄生蟲(chóng)病，延長(zhǎng)魚(yú)類的存活時(shí)間[1]。MG是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，化學(xué)名稱為四甲基代二氨基三苯甲烷(Triphenylmethane)，化學(xué)式為C23H25ClN2，易溶于水、甲醇、乙醇和戊醇，水溶液呈藍(lán)綠色。CV是一種帶有金屬光澤的深綠色固體，化學(xué)式為C25H30ClN3，與孔雀石綠的結(jié)構(gòu)相似。二者進(jìn)入生物體內(nèi)后，可以通過(guò)生物轉(zhuǎn)化還原成毒性更大的隱性代謝產(chǎn)物如隱性孔雀石綠(Leuco malachite green,LMG)和隱性結(jié)晶紫(Leuco crystal violet,LCV)[2]。這兩種隱性代謝物具有較高的親脂性，在魚(yú)類脂肪組織中代謝速度極慢，易形成穩(wěn)定的殘留，有明顯的蓄積現(xiàn)象[3-6]。研究發(fā)現(xiàn)，MG、CV、LMG、LCV的化學(xué)官能團(tuán)——三苯甲烷是一種致癌物質(zhì)，具有高毒、高殘留的特性，可通過(guò)食物鏈對(duì)哺乳動(dòng)物和人類產(chǎn)生“三致”作用，對(duì)生物體組織、生殖、免疫系統(tǒng)均有影響[7]。目前，這類獸藥大范圍使用的原因主要有兩個(gè)：一是其價(jià)格低廉，抗菌效果好；二是在治療魚(yú)類水霉病方面藥物種類有限，尚未有理想的替代品[8]。

目前，美國(guó)、加拿大、日本和歐盟的許多國(guó)家都將MG和CV列為漁用禁用藥物[9]。2001年，中國(guó)在《無(wú)公害食品漁用藥物使用準(zhǔn)則》(農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY 5071-2001)中將MG列為漁用禁用藥物；2002年，農(nóng)業(yè)部同時(shí)將MG和CV列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》。自2006年開(kāi)始，我國(guó)湛江[10]、珠海[11]、寧波[12]、武漢[13]、福建[14]、湖北[15]和深圳[16]等地區(qū)陸續(xù)報(bào)道了水產(chǎn)品中MG的殘留情況，只有湛江出口水產(chǎn)品未檢出MG，其余幾個(gè)城市的檢出率為6.5%～23.2%。陜西省地處內(nèi)陸腹地，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)并不發(fā)達(dá)，但卻是水產(chǎn)消費(fèi)大省，草魚(yú)、鰱魚(yú)、鯽魚(yú)、羅非魚(yú)為當(dāng)?shù)刂饕酿B(yǎng)殖魚(yú)類。自2011年開(kāi)始，我國(guó)將養(yǎng)殖魚(yú)中MG及其代謝物的監(jiān)測(cè)列入國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)計(jì)劃，陜西省也開(kāi)展了養(yǎng)殖魚(yú)中MG和CV的檢測(cè)工作。

對(duì)于MG和CV的檢測(cè)，有許多不同的方法，如高效液相色譜法、共振瑞利散射法、同位素內(nèi)標(biāo)測(cè)定法和薄層色譜法、液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法、液相色譜-熒光檢測(cè)器法或液相色譜-質(zhì)譜法等[17-21]。但這些方法的靈敏度、選擇性和分析通量還存在不足之處，高效液相色譜對(duì)樣品的凈化要求高，操作步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，不利于準(zhǔn)確定性和定量。而超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(Ultra-performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,UPLC-MS/MS)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)，采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜或離子阱作為檢測(cè)器，代替高效液相色譜的紫外檢測(cè)器，可發(fā)揮液相色譜較快的分析速度、高分離度與串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，能較好地進(jìn)行目標(biāo)化合物的定性和定量分析。

本研究通過(guò)隨機(jī)抽樣和定點(diǎn)抽樣，采用高效的UPLC-MS/MS方法，對(duì)陜西省10個(gè)地市市售水產(chǎn)品中MG、CV及其代謝物的殘留進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行溯源分析，以了解陜西省市售水產(chǎn)品的安全狀況，并為化學(xué)污染物的暴露評(píng)估提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

UltiMateTM3000超高效液相色譜儀，美國(guó)Dionex公司；API-3200三重四極桿質(zhì)譜儀，美國(guó)Applied Biosystems公司。

孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品(MG)、隱性孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品(LMG)、結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)品(CV)、隱性結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)品(LCV)、孔雀石綠內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(d5-MG)、隱性孔雀石綠內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(d6-LMG)、結(jié)晶紫內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(d5-CV)、隱性結(jié)晶紫內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(d6-LCV)，純度99%,美國(guó)Sigma-Aldrich公司；甲酸、乙腈、乙酸銨，色譜純,德國(guó)Merck公司；中性氧化鋁萃取小柱，美國(guó)Supelco公司；Millipore A10純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司。

1.2 樣品來(lái)源與處理

1.2.1 采 樣 根據(jù)全國(guó)食品污染物監(jiān)測(cè)網(wǎng)中規(guī)定的監(jiān)測(cè)項(xiàng)目和監(jiān)測(cè)種類，結(jié)合陜西省經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平、地域特征和人口分布情況，在西安、寶雞、安康、延安、咸陽(yáng)、渭南、商洛、銅川、漢中和榆林共選取10個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，采用隨機(jī)抽樣和定點(diǎn)抽樣相結(jié)合的方法，對(duì)每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)隨機(jī)選擇2個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)進(jìn)行隨機(jī)采樣。抽樣品種涵蓋草魚(yú)、鯉魚(yú)、鯽魚(yú)等當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)上銷售的市民大宗食用魚(yú)類共16個(gè)品種120份樣品。采樣后立即密封并及時(shí)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室冷藏。各地市采樣品種及數(shù)量見(jiàn)表1。

1.2.2 樣品提取和凈化 取魚(yú)樣可食部分勻漿，準(zhǔn)確稱取5 g樣品于50 mL塑料離心管中，添加50 μL混合同位素內(nèi)標(biāo)中間液，加入提取液乙腈25 mL，渦旋混合2 min，10 000 r/min離心10 min，收集上清液于100 mL玻璃離心管中，待凈化。

用5 mL乙腈活化中性氧化鋁萃取小柱，在氮吹儀上用氮?dú)獯蹈桑蝗? mL上清液，加載在中性氧化鋁小柱上，收集濾液，再用4 mL乙腈淋洗小柱，再收集濾液，將2次濾液合并；在氮吹儀上于50 ℃用氮?dú)獯抵两?，用乙腈水溶?V(乙腈)∶V(水)=50∶50)溶解殘?jiān)?，并定容?.5 mL，0.22 μm膜過(guò)濾，液質(zhì)聯(lián)用儀上機(jī)檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Dionex Acclaim?RRSLC C8(2.1 mm×100 mm，2.2 μm)；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨水溶液；流速0.3 mL/min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣體積10 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電噴霧ESI離子源(正離子)；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；電噴霧電壓5 500 V；氣簾氣壓力137.9 kPa；霧化氣壓力275.8 kPa；輔助氣壓力275.8 kPa；離子源溫度450 ℃；碰撞電壓(CE)、去簇電壓(DP)、入口電壓(EP)、碰撞室入口電壓(CEP)、碰撞室出口電壓(CXP)等參數(shù)見(jiàn)表2。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

(1)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL)。精確稱取MG、LMG、CV、LCV標(biāo)準(zhǔn)品10 mg分別置于4個(gè)10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，-18 ℃保存。(2)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100 ng/mL)。分別準(zhǔn)確移取1 mg/mL的MG、LMG、CV、LCV標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1 mL，用乙腈稀釋成1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，再取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液用乙腈稀釋成100 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，4 ℃保存。(3)內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液(1 mg/mL)。分別精確稱取孔雀石綠、隱形孔雀石綠同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品d5-MG、d6-LMG、d5-CV、d6- LCV 10 mg(精確到0.01 mg)于4個(gè)10 mL棕色容量瓶中，分別用乙腈定容至刻度，-18 ℃保存。(4)混合內(nèi)標(biāo)工作液(1 ng/mL)。分別準(zhǔn)確移取1 mg/mL 的上述4種內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液0.1 mL，用乙腈稀釋成100 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)中間液，再取混合內(nèi)標(biāo)中間液用乙腈稀釋成1 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作液，4 ℃保存。(5)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別取100 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液0.1，0.5，1，2，5，10 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈水溶液(V(乙腈)∶V(水)=50∶50)定容至刻度，得到質(zhì)量濃度依次為1，5，10，20，50，100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

注：*為定量離子對(duì)。

Note:* means quantifier transition.

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及最低檢出限

采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制質(zhì)量濃度為1，5，10，20，50，100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，在空白魚(yú)肉樣品中添加MG、LMG、CV、LCV標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別取10 μL上機(jī)測(cè)定，進(jìn)行UPLC-MS/ MS分析，以分析物質(zhì)量濃度與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(biāo)(X)，以分析物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別按信噪比大于3和信噪比大于10計(jì)算本方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。

1.6 加標(biāo)回收率和精密度分析

以3組陰性樣品為測(cè)試樣品，將MG、LMG、CV、LCV的添加質(zhì)量濃度均設(shè)為50，100和200 ng/mL 3個(gè)水平，每個(gè)添加水平在相同的試驗(yàn)條件下做6個(gè)平行樣，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算每個(gè)樣品的質(zhì)量濃度，并計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

1.7 樣品測(cè)定

在優(yōu)化的試驗(yàn)條件下，對(duì)120份經(jīng)過(guò)前處理的實(shí)際樣品進(jìn)行UPLC-MS/MS上機(jī)測(cè)定，對(duì)4種獸藥的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量，上樣量為10 μL。

1.8 待測(cè)物含量的計(jì)算

樣品中待測(cè)物含量的計(jì)算公式為：

式中:W樣為樣品中待測(cè)物的含量，μg/kg；C為測(cè)定液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，ng/mL；m為樣品質(zhì)量，g；V0為樣品定容體積，mL；V1為提取液總體積，mL；V2為過(guò)柱總體積，mL。

1.9 檢測(cè)結(jié)果判定及分析

根據(jù)檢測(cè)的結(jié)果分別對(duì)所有水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的總檢出率、16種樣品中獸藥殘留的檢出率、10個(gè)地市獸藥殘留的檢出率、4種獸藥殘留的平均水平及同一樣品中的獸藥混配使用情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及最低檢出限

MG、LMG、CV和LCV 4種待測(cè)獸藥UPLC-MS/MS分析結(jié)果的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性區(qū)間如表3所示。表3顯示，MG、LMG在質(zhì)量濃度為1～50 ng/mL時(shí)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，CV、LCV在質(zhì)量濃度為1～100 ng/mL時(shí)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。4種物質(zhì)的檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.15 μg/kg，表明本分析方法具有良好的線性關(guān)系，線性范圍寬，靈敏度高。

2.2 加標(biāo)回收率和精密度

以陰性樣品為測(cè)試樣品，在陰性樣品中分別加入50，100，200 ng/mL共3個(gè)水平的MG、LMG、CV、LCV，并進(jìn)行上機(jī)測(cè)定，計(jì)算的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表4所示。表4表明,加標(biāo)回收率為87.8%～110.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.98%～4.32%。

2.3 水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的檢測(cè)

表5顯示，120份魚(yú)肉樣品中MG、LMG、CV、LCV 4種獸藥的總檢出率為4.6%，MG、LMG、CV的檢出率分別為1.7%，6.7%，10.0%，未檢出LCV，其中CV的檢出率最高。

2.4 16種水產(chǎn)品中獸藥殘留的分析

表6表明，16種水產(chǎn)樣品中，MG、LMG、CV、LCV 4種獸藥殘留的樣品檢出率為15.8%。其中梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)、鯉魚(yú)、鯰魚(yú)、草魚(yú)等5種樣品中均有獸藥殘留檢出，其檢出率分別為100.0%，100.0%，33.3%，15.4%和11.8%。在13份鯰魚(yú)樣品中共檢出了3種獸藥，33份鯉魚(yú)樣品共檢出了2種獸藥，草魚(yú)、梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)分別只檢出1種獸藥。其余11種魚(yú)種未檢出獸藥殘留。

2.5 10地市水產(chǎn)品中獸藥殘留的分析

由表7可以看出，10個(gè)采樣地市中，除了榆林以外，其他9個(gè)地市魚(yú)樣中均檢出MG、LMG、CV、LCV殘留，商洛、咸陽(yáng)、銅川、安康、延安、渭南、寶雞、漢中、西安的檢出率分別為10.4%，10.4%，6.3%，6.3%，4.2%，2.1%，2.1%，2.1%和2.1%。其中商洛檢出了3種藥物，檢出率最高為10.4%；而咸陽(yáng)的12份樣品只檢出了1種藥物，但檢出份數(shù)是5份，與商洛的檢出率相同，均高達(dá)10.4%；渭南、寶雞、漢中、西安均只有1份樣品檢出藥物，檢出率均為2.1%。

2.6 水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的平均水平

由表8可知，在檢出藥物的梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)、鯰魚(yú)、鯉魚(yú)、草魚(yú)5種樣品中，僅有的1份梭邊魚(yú)樣品檢出了CV殘留，CV的質(zhì)量濃度為1.89 μg/kg；僅有的1份鮭魚(yú)樣品檢出LMG殘留，且其質(zhì)量濃度較高，為2.93 μg/kg；13份鯰魚(yú)樣品中MG、LMG、CV均有檢出，平均質(zhì)量濃度分別為0.34，2.13，1.86 μg/kg；33份鯉魚(yú)樣品檢出了LMG、CV，平均質(zhì)量濃度分別為1.16，0.46 μg/kg；34份草魚(yú)樣品只檢出CV，平均質(zhì)量濃度為0.15 μg/kg。

2.7 同一樣品中獸藥混配的分析

表9顯示，在檢出獸藥的梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)、鯰魚(yú)、鯉魚(yú)、草魚(yú)5種樣品中，并未在1份樣品中同時(shí)檢出4種藥物成分，在梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)、鯉魚(yú)、草魚(yú)樣品中各檢出1種藥物，但在鯰魚(yú)樣品中同時(shí)檢出多種藥物，13份鯰魚(yú)樣品中，有1份同時(shí)檢出了MG、LMG、CV 3種藥物，另1份同時(shí)檢出了MG、LMG 2種藥物，這2份樣品均來(lái)自商洛市，說(shuō)明商洛市在鯰魚(yú)養(yǎng)殖或運(yùn)輸過(guò)程中存在獸藥混配使用現(xiàn)象。

3 討 論

3.1 MG、LMG、CV、LCV的檢測(cè)方法

目前，用于MG和CV的檢測(cè)方法主要有液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[22-27]。本研究參照GB/T 19857-2005《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定》、SC/T 3021-2004《水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留量的測(cè)定:液相色譜法》對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行了優(yōu)化[28-29]，采用高效的UPLC-MS/MS法成功完成了水產(chǎn)品中獸藥MG、CV及其代謝物殘留的檢測(cè)。

由于MG和CV在水產(chǎn)品中主要以隱性代謝物L(fēng)MG和LCV的形式存在，具有很好的親脂性，而且水產(chǎn)品基質(zhì)化學(xué)成分復(fù)雜，脂肪含量較高，不利于目標(biāo)分析物的提取和凈化。在樣品的前處理過(guò)程中，本研究利用中性氧化鋁固相萃取凈化，去除酸性雜質(zhì)，消除了油脂和基質(zhì)的影響，有效保護(hù)了色譜柱和質(zhì)譜儀，提高了檢測(cè)方法的靈敏度。同時(shí)，本研究采用內(nèi)標(biāo)定量法配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，且曲線具有良好的線性關(guān)系，在信噪比>3時(shí)的檢測(cè)限達(dá)到0.05 μg/kg，優(yōu)于歐盟2004年(2004/25/EC)提出的檢測(cè)限要求(2 ng/g)；陰性樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)表明，平均加標(biāo)回收率為87.8%～110.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于4.32%，達(dá)到了較好的準(zhǔn)確度及精密度，可以實(shí)現(xiàn)良好的質(zhì)量控制。

在傳統(tǒng)的檢測(cè)方法中，為了能同時(shí)檢測(cè)顯色母體和隱性代謝物，通常在液相色譜分離后，利用氧化鉛進(jìn)行柱后衍生，將隱性代謝物L(fēng)MG、LCV轉(zhuǎn)化為在可見(jiàn)光波長(zhǎng)下有強(qiáng)吸收性的顯色母體MG和CV[17,30]。但是衍生柱填料的配比容易受到流動(dòng)相和樣品基質(zhì)的影響，衍生柱的壽命也會(huì)影響檢測(cè)效果，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究未使用氧化鉛柱，避免了衍生柱質(zhì)量不穩(wěn)定對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

3.2 陜西省水產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)狀評(píng)估

本次抽檢結(jié)果顯示，來(lái)自陜西省10個(gè)地市的16個(gè)品種120份魚(yú)樣中，4種獸藥的總檢出率為 4.6%，MG、LMG、CV的檢出率分別為1.7%，6.7%和10.0%，LCV未檢出。120份魚(yú)肉樣品中有19份樣品檢出了獸藥殘留，樣品檢出率為15.8%，高于2011年農(nóng)業(yè)部有關(guān)全國(guó)水產(chǎn)品質(zhì)量安全的例行監(jiān)測(cè)結(jié)果(平均檢出率9.0%)[31]，16個(gè)品種魚(yú)樣中有5種(梭邊魚(yú)、鮭魚(yú)、鯉魚(yú)、鯰魚(yú)、草魚(yú))魚(yú)樣檢出獸藥殘留。分析認(rèn)為，導(dǎo)致檢出率較高的原因主要是梭邊魚(yú)和鮭魚(yú)樣品采樣量各1份，其中分別檢出了CV和LMG，檢出率均為100%，但并不能簡(jiǎn)單地認(rèn)為梭邊魚(yú)和鮭魚(yú)安全性低；相應(yīng)地，鯉魚(yú)、鯰魚(yú)、草魚(yú)的采樣量較多，雖其檢出率較低，但也不可認(rèn)為鯉魚(yú)、鯰魚(yú)、草魚(yú)的安全性較高。其余11種魚(yú)樣未檢出獸藥殘留，可能是由于部分魚(yú)種價(jià)格貴、數(shù)量少、銷量小，且多由外省運(yùn)購(gòu)，且采樣份數(shù)少，因此需要加大檢測(cè)頻率和樣本量。

本次檢測(cè)中，MG的檢出率為1.7%，LMG的檢出率為6.7%，均低于2007年王麗玲等[11]報(bào)道的珠海市餐廳池養(yǎng)水產(chǎn)品中MG殘留的調(diào)查結(jié)果(10.2%)，也低于2013年傅武勝等[31]報(bào)道的廣東、福建水產(chǎn)品中MG的檢測(cè)結(jié)果 (56.1%)。LMG的檢出率高于MG，說(shuō)明多數(shù)MG在生物體內(nèi)轉(zhuǎn)化成了LMG，LMG在魚(yú)體內(nèi)的清除速率顯著慢于MG。有研究顯示，在鲇魚(yú)肌肉中，MG和LMG的半衰期分別是2.8和10 d，在虹鱒魚(yú)肌肉中MG的半衰期是1.5 d，LMG的半衰期在10～40 d；在虹鱒魚(yú)苗中，MG和LMG總的半衰期是13 d[32]。這可能是由于部分魚(yú)類體內(nèi)脂肪含量較高，與獸藥結(jié)合緊密，造成魚(yú)體內(nèi)獸藥殘留量高，從而導(dǎo)致檢出率較高。

本次研究還發(fā)現(xiàn)：4種獸藥中LCV未檢出，可能是由于檢測(cè)時(shí)未使用氧化鉛柱后衍生，導(dǎo)致LCV未氧化成在可見(jiàn)光區(qū)有特異吸收波長(zhǎng)的CV，使其結(jié)果呈陰性；也可能是由于CV不是用在魚(yú)類養(yǎng)殖過(guò)程而是用在后期的運(yùn)輸過(guò)程中，魚(yú)吸收CV后還未來(lái)得及轉(zhuǎn)化成LCV就被抽樣送檢。但4種獸藥殘留中以CV的檢出率最高，說(shuō)明CV在當(dāng)?shù)卮嬖谳^為普遍的非法使用現(xiàn)象。

本次研究發(fā)現(xiàn)，所采集的16種魚(yú)類中有5種魚(yú)類檢出獸藥殘留(31.3%,5/16)，其中檢出MG的有1種(6.3%,1/16)，檢出LMG的有3種(18.8%,3/16)，檢出CV的有4種(25.0%,4/16)，低于2011年華永有等[14]報(bào)道的福建市售淡水魚(yú)中檢出MG的魚(yú)種比例53.5%(15/28)，也低于2011年邵生文等[15]報(bào)道的湖北省淡水魚(yú)中檢出MG的魚(yú)種比例57.1%(8/14)。10個(gè)地市中有9個(gè)地市的市售魚(yú)樣中檢出獸藥殘留，說(shuō)明陜西省市售水產(chǎn)品中非法使用4種獸藥的現(xiàn)象較為普遍，其中咸陽(yáng)、商洛檢出率最高，而且商洛還存在4種獸藥混配使用的現(xiàn)象。

綜上所述，陜西省水產(chǎn)品中獸藥總檢出率總體并不高，但在鯉魚(yú)、鯰魚(yú)、草魚(yú)樣品中檢出率相對(duì)較高，且在多個(gè)地區(qū)樣品中均檢出獸藥，還有多種獸藥混配使用的情況，存在MG和CV殘留的安全隱患，應(yīng)當(dāng)引起食藥監(jiān)部門(mén)的相對(duì)重視。

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Determination of malachite green and crystal violet residues in aquatic products of Shaanxi in 2013

ZHANG Yi-bei1,YUE Tian-li1,QIAO Hai-ou2,JIA Ru1,JIANG Xu-peng1,LI Lu1

(1CollegeofFoodScienceandEngineering,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China;2ShaanxiProvinceCenterforDiseaseControlandPrevention,Xi’an,Shaanxi710054,China)

【Objective】 This study determined residual levels of 4 veterinary drugs in aquatic products in Shaanxi in 2013 to ensure food security.【Method】 A total of 120 fish samples for 16 types were collected from wholesale markets in 10 cities of Shaanxi Province.After homogenate was collected,the veterinary drugs were extracted by acetonitrile and cleaned up by neutral alumina.The concentrations of total malachite green and crystal violet and their metabolites residues were detected by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) and qualitatively and quantitatively analyzed.The total detection rates of 4 veterinary drugs,detection rates of 16 samples,detection rates of samples in 10 cities,mean levels of veterinary drugs residues and the detection rates of mixed veterinary drugs were counted.【Result】 The total detection rate of 4 veterinary drugs was 4.6% and leuco crystal violet was not detected.The detection rate in 16 kinds of samples was 15.8%,and those of spindle edge fish,trout,carp,catfish,and grass carp samples were 100.0%,100.0%,33.3%,15.4%,and 11.8%,respectively,higher than the mean level in China (9.0%).None of veterinary drugs was detected in other 11 kinds of samples.Veterinary drugs were detected in 9 areas except Yulin,with the highest detection rates of 10.4% in Shangluo and Xianyang.Various veterinary drugs were detected simultaneously in the samples from Shangluo,indicating abuse of mixed veterinary drugs.【Conclusion】 The detection rates of 4 veterinary drugs residue in aquatic products were not high in Shaanxi Province.However,the high presence of drugs in carp,catfish,and grass carp samples in 9 areas and mixed abuse of veterinary drugs poses potential threat to human health, which high attention should be paid to.

aquatic products;malachite green;crystal violet;veterinary drugs residues determination;Shaanxi province

2013-12-13

西北農(nóng)林科技大學(xué)“2013年度國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃”校級(jí)重點(diǎn)項(xiàng)目(1201310712174)

張藝蓓(1993-)，女，陜西西安人，本科在讀，主要從事食品安全研究。E-mail：zhangyibei0666@163.com

岳田利(1965-)，男，陜西寶雞人，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事食品與發(fā)酵工程及食品安全控制技術(shù)研究。 E-mail：yuetl@nwsuaf.edu.cn

時(shí)間:2015-04-13 12:59

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.05.012

TS207.3

A

1671-9387(2015)05-0192-09

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