海安縣集約雞場(chǎng)大腸桿菌分離及防治試驗(yàn)

王炳翔林發(fā)根張金玉

（1.海安縣雅周鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇海安 226600；2.海安縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇海安 226600）

海安縣集約雞場(chǎng)大腸桿菌分離及防治試驗(yàn)

王炳翔1林發(fā)根2張金玉1

（1.海安縣雅周鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇海安 226600；2.海安縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇海安 226600）

作為中國的禽蛋之鄉(xiāng)，江蘇省海安縣這幾年的養(yǎng)雞規(guī)模是逐年擴(kuò)大。隨著養(yǎng)雞規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，禽病問題是不斷蔓延，造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)千萬元之多。而禽病中屬大腸桿菌危害最大，幾乎所有雞群都有發(fā)生大腸桿菌的可能。文章分離海安縣集約化雞場(chǎng)大腸桿菌病致病病毒血清型，結(jié)合藥敏試驗(yàn)和微生態(tài)制劑防治試驗(yàn)，探究綜合防治理念，以供參考和借鑒。

大腸桿菌 防治 藥敏實(shí)驗(yàn)

雞大腸桿菌病目前已成為集約化養(yǎng)雞業(yè)中最受重視的細(xì)菌性傳染病。臨床上雞的臍炎、關(guān)節(jié)炎、腹膜炎、輸卵管炎、眼球炎、大腸桿菌敗血癥和大腸桿菌性肉芽腫都與致病性大腸桿菌有關(guān)，這些疾病常給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 研究方法

1.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

從海安縣獸醫(yī)站門診及12個(gè)大型養(yǎng)殖場(chǎng)剖檢采集具有疑似大腸桿菌病病變的病死雞的心血、肝、腹水、脾和氣囊等病料，畫線于麥康凱斜面，37℃培養(yǎng)18h，選取單個(gè)典型菌落純培養(yǎng)后凍干保存。

1.2 生化試驗(yàn)

按文獻(xiàn)報(bào)道方法，對(duì)所有分離株進(jìn)行11項(xiàng)生化指標(biāo)（葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、蔗糖、尿素、硫化氫、檸檬酸鹽、M.R、V-P、靛基質(zhì)試驗(yàn)）進(jìn)行測(cè)定。

1.3 血清型鑒定

參照文獻(xiàn)，所有分離株首先進(jìn)行玻板凝集試驗(yàn)初步篩選可能的O血清型，然后通過試管凝集試驗(yàn)確定其O血清型，定型標(biāo)準(zhǔn)試管凝集價(jià)不小于1：640。

1.4 藥敏試驗(yàn)

按K-B紙片擴(kuò)散法將被檢分離株細(xì)菌涂布接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，間隔一定距離貼上下列各種藥敏試紙片，于37 ℃培養(yǎng)24 h。判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑小于10 mm 為不敏感，直徑在10.1～15mm 為中度敏感，大于15.1 mm 為高度敏感。我們選擇了頭孢噻呋、頭孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、諾氟沙星、多粘菌素B、氟苯尼考、多西環(huán)素、恩諾沙星、阿莫西林、林可霉素、四環(huán)素、慶大霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、頭孢氨芐等18種常用做藥敏試驗(yàn)，為選擇敏感藥物提供科學(xué)依據(jù)。

1.5 微生態(tài)制劑防治試驗(yàn)

1.5.1 試驗(yàn)分組

自種禽場(chǎng)購買1日齡健康海蘭褐雛雞，按正常飼養(yǎng)方法飼養(yǎng)至14日齡（期間不接種任何大腸桿菌疫苗），選擇500只雞隨機(jī)分成高、中、低3個(gè)不同劑量試驗(yàn)組（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組），喂服微生態(tài)制劑（乳酸菌復(fù)合活菌制劑，每克制劑中含活嗜酸乳桿菌1000萬個(gè)，糞鏈球菌100萬個(gè)，枯草桿菌10000個(gè)，用時(shí)以涼水溶解后飲服）。同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照組（Ⅳ組）和陰性對(duì)照組（Ⅴ組），共5組，每組100只。

1.5.2 動(dòng)物試驗(yàn)

雛雞于15日齡時(shí)按高（0.2g/次）、中（0.1g/次）、低（0.05g/次）3個(gè)不同劑量分別給供試雛雞灌服供試微生態(tài)制劑，每天2次，連續(xù)用藥5d，試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組于20、22、25日齡時(shí)采血備用，測(cè)定血清中SOD、GSH-PX、MDA的活性。26日齡時(shí)按1×109個(gè)cfu/ml劑量攻菌，記錄攻菌后供試雞的臨床健康狀況，觀察14d，計(jì)算發(fā)病率、死亡率和保護(hù)率。

每只雞的采血量均為10mL，血樣4℃過夜后，3000r/min離心15min，分離血清。血清中相關(guān)酶的含量或活性的測(cè)定按照試劑盒說明進(jìn)行操作，用Execl軟件進(jìn)行方差分析。

2 研究結(jié)果

2.1 分離血清型結(jié)果

從剖檢具有疑似大腸桿菌病的252羽病死雞中，分離鑒定出大腸桿菌226株，定型198株，共測(cè)出23個(gè)血清型，其中O78（32株）、O18（26株）、O2（21株）、O88（17株）、O1（13株）、O11（10株）6種主要血清型。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

我們對(duì)定型的198株大腸桿菌用臨床常用的18種抗菌藥物做了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果詳見表1。

表1 大腸桿菌對(duì)18 種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)結(jié)果

從表1可以看出，隨著大量抗菌藥物應(yīng)用于臨床，所試藥物均有不同程度的耐藥現(xiàn)象，但多數(shù)菌株對(duì)頭孢噻呋、頭孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星敏感性較高，這為我們選擇臨床藥物來防治大腸桿菌病提供了科學(xué)依據(jù)和參考。

2.3 微生態(tài)制劑

用微生態(tài)制劑給大腸桿菌病雞投喂，探索防控效果，結(jié)果詳見表2。

表2 微生態(tài)制劑對(duì)雞大腸桿菌病的臨床防治結(jié)果

從表2可以看出，微生態(tài)制劑按高、中、低3個(gè)不同劑量連續(xù)喂藥5d后攻菌，均能對(duì)雛雞提供有效保護(hù)（93%以上）。雖然部分雞群出現(xiàn)了精神不振，食欲減少，甚至個(gè)別排黃綠色稀便等癥狀，但死亡率低，其中高、中劑量試驗(yàn)組死亡率僅為3%，而陽性對(duì)照組則高達(dá)62%。

微生態(tài)制劑分不同劑飼喂雞只，并檢測(cè)了雞只的血清酶，結(jié)果詳見表3。

表3 微生態(tài)制劑對(duì)雛雞血清酶影響的試驗(yàn)結(jié)果

從表3可以看出，微生態(tài)制劑按高、中、低3個(gè)不同劑量給藥后，雛雞血清SOD、GSH-PX的含量均顯著高于陰性對(duì)照組（P＜0.05），MDA含量顯著低于陽性對(duì)照組（P＜0.05），在同一時(shí)間，劑量越高，SOD、GSH-PX的含量越高，MDA含量越低，但無顯著差異（P〉0.05）。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，按0.1g/只給雛雞飼喂適當(dāng)?shù)奈⑸鷳B(tài)制劑，能提高機(jī)體免疫力，減少大腸桿菌的發(fā)病率和死亡率。

本地大腸桿菌共有23個(gè)血清型，其中，O78（32株）、O18（26株）、O2（21株）、O88（17株）、O1（13株）、O11（10株）6種主要血清型。分離株對(duì)18 種常見藥物均有不同程度的耐受性，而且敏感性也各不相同。相對(duì)而言，所分離的大腸桿菌多數(shù)對(duì)頭孢噻呋、頭孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星高度敏感，對(duì)諾氟沙星、多粘菌素B、氟苯尼考、多西環(huán)素、恩諾沙星、阿莫西林、林可霉素中敏，對(duì)四環(huán)素、慶大霉素、鏈霉素、復(fù)方新諾明、頭孢氨芐不敏感。比較西藥療法，微生態(tài)制劑同樣有著不錯(cuò)的療效，而且無毒副作用、無耐藥性、無殘留、成本低、效果顯著、不污染環(huán)境等特點(diǎn)。它不僅能促進(jìn)動(dòng)物胃腸道正常微生物區(qū)系的建立，增強(qiáng)畜禽免疫力，減少疾病的發(fā)生，促進(jìn)生長(zhǎng)，提高畜禽日增重，改善畜產(chǎn)品的質(zhì)量，還能產(chǎn)生多種氨基酸、維生素及一些未知促生物質(zhì)，還能刺激腸道內(nèi)免疫功能，及時(shí)殺死入侵病菌，又能減少氨及其他腐敗物質(zhì)的產(chǎn)生，阻礙有害物質(zhì)及廢物的吸收，有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

[1] 廖曉萍，岳磊，曾振靈.禽源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀與防治對(duì)策[J].中國家禽，2008，（6）：1-5.

[2] 白靜，王宇.河南省雞致病性大腸桿菌血清型、耐藥性的研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，（10）：105-107.

[3] 朱金鳳，王汝都.山西省雞源大腸桿菌耐藥性的監(jiān)測(cè)[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，（25）：7850-7852.