母豬附紅細(xì)胞體病的實(shí)驗(yàn)室診斷

陶明江田 斌

（1.貴州省德江縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州銅仁 565200；2.德江縣長(zhǎng)豐鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州銅仁 565200）

母豬附紅細(xì)胞體病的實(shí)驗(yàn)室診斷

陶明江1田 斌2

（1.貴州省德江縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州銅仁 565200；2.德江縣長(zhǎng)豐鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州銅仁 565200）

2012年7月13日，德江縣長(zhǎng)豐鄉(xiāng)某養(yǎng)豬場(chǎng)兩頭母豬出現(xiàn)低燒，食欲不振，以至食欲廢絕。經(jīng)過(guò)獸醫(yī)臨床觀察，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查，診斷為豬附紅細(xì)胞體病。

1 流行病學(xué)

該豬場(chǎng)有部分母豬出現(xiàn)了食欲減退甚至食欲廢絕的情況，檢測(cè)體溫偏高，經(jīng)青霉素、鏈霉素治療，效果不明顯。出診現(xiàn)場(chǎng)觀察，發(fā)現(xiàn)有部分母豬皮膚發(fā)紅，精神不振，眼結(jié)膜等黏膜發(fā)黃。分別采集編號(hào)分別是3號(hào)和7號(hào)兩頭母豬全血，送實(shí)驗(yàn)室檢查。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查

2.1 材料與方法

2.1.1 試驗(yàn)材料

（1）試驗(yàn)病料：血樣來(lái)自某豬場(chǎng)母豬抗凝全血，分別為3號(hào)和7號(hào)。

（2）主要試劑：抗凝劑為枸櫞酸三鈉；紅細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液為0.85%NaCl溶液；白細(xì)胞稀釋液為1%的冰醋酸。

（3）培養(yǎng)基：血平板培養(yǎng)基，將滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱熔化，在冷至45℃～50℃時(shí)，加無(wú)菌脫纖維家兔鮮血5%～10%，傾注平皿。待凝固后，置37℃培養(yǎng)1天。有污染者廢棄，無(wú)菌者保存于冰箱中備用。

（4）主要儀器：?jiǎn)文抗怆婏@微鏡，白紅細(xì)胞計(jì)一套及血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板，電熱恒溫培養(yǎng)箱，手提式小型直立高壓滅菌器，電子天秤。

2.1.2 試驗(yàn)方法

（1） 細(xì)菌分離：將被檢病料（血液3號(hào)，7號(hào)）置于酒精燈旁，分別用滅菌毛細(xì)吸管取1～2滴置于血平板中央，再用滅菌的接種環(huán)做均勻涂布。于血平板蓋上分別作“3#”和“7#”記號(hào)、日期，再置于37℃培養(yǎng)48h。

（2）附紅細(xì)胞體檢查

①血液壓片：分別取3號(hào)和7 號(hào)血樣1滴于兩片載玻片上，再加1～2滴生理鹽水混勻，之后用蓋玻片覆蓋，置于光電顯微鏡下鏡檢。

②血涂片制備及瑞氏染色：

先取一張干凈的無(wú)油垢邊緣整齊的載玻片，其一端蘸取少許3#血液，以45°角放在另一張干凈無(wú)油垢的載玻片一端，從這端向另一端推成薄而均勻的血膜。同樣方法對(duì)7#血液進(jìn)行涂片，待干后備用。抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，經(jīng)1～3分鐘，再加染液等量的中性蒸餾水，輕輕晃動(dòng)玻片，使與染液混勻；經(jīng)1～3分鐘左右，直接用水沖洗，吸干后，鏡檢。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 細(xì)菌分離結(jié)果：用血平板分離，經(jīng)過(guò)在37℃培養(yǎng)48h后，沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)，呈陰性。

2.2.2 附紅細(xì)胞體檢查結(jié)果：3號(hào)、7號(hào)均為陽(yáng)性，紅細(xì)胞四周有大量附紅細(xì)胞體附著。

2.2.3 形態(tài)觀察結(jié)果

（1） 鮮血壓片：高倍鏡下即可見(jiàn)震顫和變形的血球以及呈淡綠色的附紅細(xì)胞體。在油鏡下可見(jiàn)菠蘿樣、鋸齒狀、星芒狀紅細(xì)胞，紅細(xì)胞內(nèi)和血漿中可見(jiàn)附紅細(xì)胞體。大多呈球形、逗號(hào)形、條形細(xì)小顆粒狀。

（2）血涂片經(jīng)瑞氏染色：瑞氏染色時(shí)紅細(xì)胞一般呈淡紫紅色，附紅細(xì)胞體一般呈天藍(lán)色。每個(gè)紅細(xì)胞上附著的附紅細(xì)胞體的數(shù)目各異，中度感染一般為6～7個(gè)重度感染的時(shí)可達(dá)到20個(gè)以上，此時(shí)紅細(xì)胞暗視野下如同鋸齒狀，附紅細(xì)胞體染色的鏡檢形狀與鮮血鏡檢情況相同：呈球形、逗號(hào)形、條形細(xì)小顆粒狀，也有菠蘿樣、星芒狀紅細(xì)胞。

2.2.4 紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果

從表1可見(jiàn)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果3號(hào)、7號(hào)均下降；白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果3號(hào)下降，7號(hào)正常。血紅蛋白檢查結(jié)果3號(hào)、7號(hào)均下降。紅細(xì)胞和血紅蛋白下降明顯，表現(xiàn)明顯的貧血。詳見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)室血液檢測(cè)結(jié)果

3 治療

針對(duì)附紅細(xì)胞體，選擇用藥如下：肌注長(zhǎng)效土霉素注射液、5%的血蟲(chóng)凈溶液（4毫克/公斤體重），1次/d，交替進(jìn)行。同時(shí)靜滴5%葡萄糖氯化鈉注射液、維生素C等藥物。經(jīng)過(guò)5 d藥物治療，2頭母豬均好轉(zhuǎn)，6 d后逐漸恢復(fù)健康。

4 小結(jié)與討論

（1）作者針對(duì)一例母豬發(fā)熱、皮膚發(fā)紅、厭食的病例，經(jīng)過(guò)流行病學(xué)調(diào)查、血液涂片觀察以及染色鏡檢、血液紅白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白檢查，初步判斷為附紅細(xì)胞體感染。經(jīng)過(guò)針對(duì)性藥物治療，獲得較好的治療效果，基本確定本次病例為母豬附紅細(xì)胞體感染。

（2）附紅細(xì)胞體寄生在人畜紅細(xì)胞表面、血漿和骨髓而引起的一種人畜共患的傳染病。附紅細(xì)胞體附著在紅細(xì)胞表面，使紅細(xì)胞膜內(nèi)陷形成凹陷和空洞，改變了紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和形狀。通過(guò)附紅細(xì)胞體病的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)附紅細(xì)胞體病診斷，母豬皮膚發(fā)紅，紅細(xì)胞、血紅蛋白數(shù)下降說(shuō)明了各種類(lèi)型的貧血、血孢子蟲(chóng)病、溶血性疾病。再結(jié)合附紅細(xì)胞體檢查都證明了附紅細(xì)胞體的存在。

[1] 王永，馮昕煒，嚴(yán)光文，等.附紅細(xì)胞體病原學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，30（6）：491-494.

[2] 孫亮，穆國(guó)冬，王笑玉，等.豬附紅細(xì)胞體病的研究進(jìn)展[J].吉林畜牧獸醫(yī)，2008，29（11）：10-11.