分析圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌感染和耐藥性檢測對妊娠結(jié)局的影響

黃秋蘭

分析圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌感染和耐藥性檢測對妊娠結(jié)局的影響

黃秋蘭

目的分析圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌(GBS)感染和耐藥性檢測對妊娠結(jié)局的影響。方法410例產(chǎn)期孕婦, 于孕35～37周時取孕婦陰道下1/3分泌物及肛周分泌物拭子, 采用實(shí)時定量PCR和培養(yǎng)法法進(jìn)行GBS檢測, 對培養(yǎng)分離出的GBS進(jìn)行藥敏試驗(yàn), 觀察并對比圍產(chǎn)期孕婦GBS感染陽性者(GBS陽性組,41例)與陰性者(GBS陰性組,369例)的妊娠結(jié)局。結(jié)果實(shí)時PCR檢測圍產(chǎn)期GBS感染陽性率10.0％高于培養(yǎng)法5.5％(P＜0.05)；GBS對青霉素、萬古霉素、氨芐青霉素、頭孢噻肟的敏感率均為100％, 對左氧氟沙星的敏感率為68.8％, 對克林霉素、阿奇霉素、紅霉素的敏感率分別為59.2％、45.2％和34.6％；兩組在早產(chǎn)發(fā)生率方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；GBS陽性組胎膜早破、宮內(nèi)感染的發(fā)生率分別為34.1％、14.6％, 高于陰性組的19.5％、5.1％(P＜0.05)。結(jié)論實(shí)時PCR檢測可作為孕晚期檢測GBS感染的一種快速準(zhǔn)確的方法；青霉素、氨芐青霉素為預(yù)防妊娠期GBS感染的理想抗生素；GBS感染會增加妊娠晚期孕婦宮內(nèi)感染及胎膜早破的發(fā)生率。

B族鏈球菌；耐藥性；感染；妊娠結(jié)局

B族鏈球菌(group B Streptococcus, GBS)也叫無乳鏈球菌[1], 是一種兼性厭氧革蘭陽性鏈球菌, 屬于條件致病菌,常寄居陰道及胃腸道, 也可寄居于嬰幼兒上呼吸道, 臨床常通過細(xì)菌培養(yǎng)、GBS核酸檢測等進(jìn)行GBS篩檢。據(jù)相關(guān)研究報道[2], 正常孕婦陰道中GBS的檢出率為6.5％～36.0％, 孕婦圍產(chǎn)期感染GBS是引發(fā)胎膜早破、新生兒敗血癥、新生兒宮腔感染、腦膜炎、肺炎等疾病的重要因素之一, 有研究證實(shí), 對GBS陽性孕婦采取抗生素治療, 對有效降低新生兒感染率、發(fā)病率均具有重要意義。本文分析研究圍生期孕婦B族鏈球菌(GBS)感染和耐藥性檢測對妊娠結(jié)局的影響。總結(jié)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月～2014年2月本院婦產(chǎn)科接診的410例產(chǎn)期孕婦, 年齡22～37歲, 平均年齡(28.2±1.6)歲, 孕期35～37周, 所有產(chǎn)婦均知悉本組研究目的, 自愿參與本實(shí)驗(yàn)并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑 ①GBS培養(yǎng)鑒定：采用Todd-Hewrtt肉湯、小牛血清、哥倫比亞血瓊脂(英國OXOID公司), GBS鑒定采用rapidID32STAEP鑒定板條(法國生物梅里埃公司)。②GBS藥敏定量試驗(yàn)：采用VITEK-2全自動鑒定藥敏儀(法國梅里埃), 質(zhì)控菌株肺炎鏈球菌ATCC49619[中國衛(wèi)生部(現(xiàn)衛(wèi)計委)臨床檢驗(yàn)中心]。③PCR檢測：實(shí)時熒光PCR儀選用CFX96實(shí)時熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司), PCR檢測試劑采用B族鏈球菌核酸檢測試劑盒[泰普生物科學(xué)(中國)有限公司]。DNA提取試劑(美國Qiagen公司)。

1.2.2 標(biāo)本采集 由醫(yī)師規(guī)范采集陰道和直腸拭子標(biāo)本各2份。參照美國疾病預(yù)防控制中心在《圍生期GBS預(yù)防指南》中推薦的取材方法[3], 于孕35～37周取材, 不使用陰道窺器,清除外陰分泌物后, 將2根無菌陰道棉拭子同時置入陰道內(nèi)下1/3處, 旋轉(zhuǎn)1周, 采集陰道分泌物；將兩根棉拭子同時插入肛門, 于肛門括約肌上2～3 cm處輕輕旋轉(zhuǎn), 采集直腸分泌物, 每位孕婦均采集兩份標(biāo)本, 一份(陰道拭子+肛拭子)用于實(shí)時熒光PCR檢測, 一份用于細(xì)菌培養(yǎng)。

1.2.3 GBS的分離培養(yǎng)及鑒定 標(biāo)本盡快送至實(shí)驗(yàn)室, 將拭子置于3 mg/ml Todd-Hewrtt肉湯(含茶噬酸15 Hg/ml+慶大霉素8 Hg/ml), 在35℃環(huán)境中增菌培養(yǎng)18～24 h, 然后分別接種于小牛血清和羊血脂平板培養(yǎng)基, 在35℃ CO2濃度5％的環(huán)境中培養(yǎng)24～36 h, 選擇有β溶血環(huán)的菌落, 通過革蘭染色鏡檢查陽性, 觸酶試驗(yàn)陰性, 將菌落接種于rapidID32STAEP鑒定板條, 在37℃中培養(yǎng)4 h, 讀取結(jié)果, 采用VITEK-2進(jìn)行B群鏈球菌細(xì)菌藥敏MIC實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 定量PCR檢測 提取陰道分泌物核酸DNA, 將陰道拭子浸于1 ml Tris-HCl溶液中, 加入溶菌酶至濃度至100 μg/ml, 在37℃環(huán)境下震蕩3 min, 加入蛋白酶K至200 μg/ml, 在56℃條件下反應(yīng)3 h, 然后以10000 r/min離心5 min, 取200 μl上清液提取DNA, 具體步驟按照DNA提取試劑盒說明書操作。GBS的PCR檢測按照GBS核酸檢測試劑盒說明進(jìn)行操作。GBS核酸熒光定量PCR檢測按照GBS核酸熒光定量PCR試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.5 擴(kuò)增測序 送上海生工生物工程股份有限公司測試分析。

1.3 觀察指標(biāo) ①實(shí)時PCR法與培養(yǎng)法檢測GBS感染結(jié)果的對比；②GBS藥敏試驗(yàn)結(jié)果；③圍生期孕婦GBS感染陽性者與陰性者的妊娠結(jié)局。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(％)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)時PCR法與培養(yǎng)法檢測GBS感染結(jié)果的對比本組410例孕婦中, 經(jīng)培養(yǎng)法檢測陽性者23例, 陽性率為5.5％(23/410), 實(shí)時PCR法檢測陽性者41例, 陽性率為10.0％(41/410), 兩種檢測方法的陽性檢出率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.491, P＜0.05)；以分離培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn), 實(shí)時熒光PCR法檢測圍產(chǎn)期孕婦GBS感染的敏感性為100％(23/23),特異性為95.6％。

2.2 培養(yǎng)法分離出GBS的耐藥性檢測結(jié)果 培養(yǎng)法共檢出23例GBS陽性者, 對其進(jìn)行進(jìn)行藥物敏感MIC實(shí)驗(yàn), 敏感度見表1。

2.3 PCR法檢測GBS感染陽性者與陰性者妊娠結(jié)局的對比 GBS陽性組與陰性組在早產(chǎn)發(fā)生率方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), GBS陽性組胎膜早破、宮內(nèi)感染的發(fā)生率明顯高于陰性組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), 見表2。

表1 培養(yǎng)法分離出GBS的耐藥性檢測結(jié)果(n=23)

表2 PCR法檢測GBS感染陽性者與陰性者妊娠結(jié)局的對比[n(％)]

3 討論

GBS是一種常寄居陰道及胃腸道的兼性厭氧革蘭陽性鏈球菌, 多項(xiàng)研究表明[4,5], 圍生期GBS感染會導(dǎo)致妊娠不良結(jié)局, 據(jù)相關(guān)研究報道[6], 我國妊娠婦女GBS帶菌率為3.5％～32.4％ , 研究GBS的檢測方法、耐藥性均對指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。本組研究以410例產(chǎn)期孕婦作為研究對象,于孕35～37周時取孕婦陰道下1/3分泌物及肛周分泌物拭子,采用實(shí)時定量PCR和培養(yǎng)法法進(jìn)行GBS檢測, 對培養(yǎng)分離出的GBS進(jìn)行藥敏試驗(yàn), 結(jié)果顯示, 實(shí)時PCR檢測、培養(yǎng)法檢測圍產(chǎn)期GBS感染陽性率分別為10.0％和5.5％, 均在上述研究報告的范圍內(nèi), 但二者差異顯著, 實(shí)時PCR檢測的陽性率明顯高于培養(yǎng)法。除此之外, 培養(yǎng)法檢測會受到標(biāo)本采集、運(yùn)送、培養(yǎng)條件等因素的影響, 因而檢出率會存在一定的變化；而實(shí)時PCR檢測可有效規(guī)避上述因素, 且檢測時間僅為4 h, 本組研究中實(shí)時PCR檢測的敏感性為100％(23/23), 特異性為95.6％。由此可見, 其有望成為妊娠晚期檢測GBS感染的首選方法。本組研究中對培養(yǎng)法共檢出23例GBS陽性標(biāo)本進(jìn)行藥物敏感MIC實(shí)驗(yàn), 結(jié)果顯示, GBS對青霉素 、萬古霉素、氨芐青霉素、頭孢噻肟的敏感率均為100.0％, 對左氧氟沙星的敏感率為68.8％, 對克林霉素、阿奇霉素、紅霉素的敏感率分別為59.2％、45.2％和34.6％, 提示青霉素、氨芐青霉素為預(yù)防妊娠期GBS感染的理想抗生素, 這與陳惠玲等[7]、Regan等[8]研究結(jié)論具有一致性。本組410例孕婦中, GBS陽性組與陰性組在早產(chǎn)發(fā)生率方面無明顯差異, GBS陽性者組胎膜早破、宮內(nèi)感染的發(fā)生率明顯高于陰性者組(P＜0.05), 說明GBS感染會增加妊娠晚期孕婦宮內(nèi)感染及胎膜早破的發(fā)生率, 與李亞梅等[9]研究結(jié)論吻合, 可進(jìn)一步證實(shí), 圍產(chǎn)期GBS感染會導(dǎo)致妊娠不良結(jié)局。

綜上所述, 實(shí)時PCR檢測可作為孕晚期檢測GBS感染的一種快速準(zhǔn)確的方法；青霉素、氨芐青霉素為預(yù)防妊娠期GBS感染的理想抗生素；GBS感染會增加妊娠晚期孕婦宮內(nèi)感染及胎膜早破的發(fā)生率。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.07.096

2014-12-30]

523660 東莞市清溪醫(yī)院婦產(chǎn)科