羅燕玉 黃曉丹 蘇金平 和海龍

不同產(chǎn)地的板藍根藥材的指紋特征研究

羅燕玉 黃曉丹 蘇金平 和海龍

目的分析板藍根藥材產(chǎn)地與指紋圖譜特征的關聯(lián)性。方法采用高效液相色譜法(HPLC), 使用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm, 5μm)色譜柱, 用甲醇-水梯度洗脫, 流速為1ml/min, 檢測波長為224 nm, 柱溫25℃, 對板藍根藥材指紋特征進行研究。結果將板藍根藥材的產(chǎn)地按地理緯度分為3個緯度區(qū)間, 即：安徽、河南、甘肅3個省為第一緯度區(qū)間, 緯度為北緯33～37°；河北為第二緯度區(qū)間, 緯度為北緯39～41°；黑龍江和內(nèi)蒙古兩省區(qū)為第三緯度區(qū)間, 緯度為北緯41～49°。各個區(qū)間產(chǎn)的板藍根藥材指紋特征相似。結論藥材產(chǎn)地的緯度位置是造成板藍根藥材指紋特征差異的主要原因之一。

板藍根藥材；指紋圖譜；產(chǎn)地

板藍根為十字花科植物菘藍(isatis indigotica fort)的干燥根, 始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》, 是重要的傳統(tǒng)中藥材之一。板藍根具有清熱解毒、涼血利咽等功效, 臨床上常用于流行性腮腺炎、流行性乙型腦炎、流感等病毒性感染的防治, 近年來又發(fā)現(xiàn)板藍根具有抗血小板聚集、抗內(nèi)毒素及增強機體免疫功能等作用[1-3]。

板藍根主要分布于河南、安徽、黑龍江等地[4], 化學成分較為復雜, 含有生物堿、芥子苷、黃酮等10余類成分, 不同產(chǎn)地的板藍根藥材整體質量差異大。為了探索不同產(chǎn)地的板藍根藥材存在的差異, 本實驗擬通過各藥材的指紋圖譜特征得出不同產(chǎn)地的板藍根內(nèi)在質量的規(guī)律, 為板藍根藥材的質量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀(安捷倫公司)；GT210-G電子天平(Sartorius)；HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)。

1.2 材料 甲醇為色譜純, 正丁醇為分析純, 試驗用水為純化水。28批板藍根藥材(批號：0909001～0909028)經(jīng)中國科學院華南植物園華南植物鑒定中心葉華谷研究員鑒定, 均為十字花科植物菘藍干燥的根部。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[5,6]色譜柱為Ultimate XB-C18分析柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；以甲醇為流動相A, 水為流動相B,梯度洗脫(0～19 min, A為19%, B為81%；28 min, A為29%, B為71%；45～55 min, A為38%, B為62%；72～75 min, A為70%, B為30%。)；流速為1 ml/min；檢測波長224 nm；柱溫25℃。

2.2 供試品溶液的制備[7]稱取板藍根藥材粉末(過3號篩)5.0 g, 加水100 ml加熱回流30 min, 抽濾, 濾液濃縮至約25 ml, 用水飽和正丁醇振搖提取3次(40、30、30 ml), 合并提取液, 用正丁醇飽和水50 ml振搖提取一次, 取正丁醇液,蒸干, 殘渣加甲醇使溶解, 轉移至5 ml容量瓶中, 加甲醇至刻度, 搖勻, 濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.3 數(shù)據(jù)采集及初步評價 分別精密吸取批號為0909001～0909028 的板藍根藥材供試品溶液5 μl, 注入液相色譜儀, 測定, 記錄 75 min色譜圖, 建立指紋圖譜共有模式并計算其相似度。結果可得, 除 0909004批藥材的相似度較低外, 其余27 批藥材與共有模式的相似度均＞ 0.7。

2.4 不同產(chǎn)地藥材的指紋圖譜的特征分析 通過比較, 以上28批藥材的特征圖譜按照峰形可以分成3類：第一類圖譜是圖譜中各特征峰的峰高基本一致, 無特別突出的強峰, 河北安國產(chǎn)的板藍根具有這種特征；第二類圖譜是在約16.5 min時有一強特征峰, 其峰高明顯高于其他峰的峰高, 河南、安徽、甘肅三省區(qū)產(chǎn)的板藍根均具有這一特征；第三類圖譜是最強峰為23～25 min時出現(xiàn)的一組峰, 主要是黑龍江與內(nèi)蒙古產(chǎn)的板藍根具有這類特征。

2.4.1 河北安國產(chǎn)板藍根的共有模式 從河北省安國市不同村共收集了7 批板藍根樣品, 其指紋圖譜特征基本一致,均無明顯的強吸收峰, 其指紋圖譜共有模式見圖1。

圖1 河北安國產(chǎn)板藍根的指紋圖譜共有模式

2.4.2 安徽-河南-甘肅產(chǎn)板藍根共有模式 從安徽阜陽收集3 批、亳州收集1批, 河南安陽和禹州各收集2 批, 甘肅隴西收集1批, 共9批板藍根樣品具有基本一致的指紋特征, 均在約16.5 min時有一相對較強的特征峰, 其指紋圖譜共有模式見圖2。

圖2 安徽-河南-甘肅產(chǎn)板藍根的指紋圖譜共有模

2.4.3 黑龍江-內(nèi)蒙古產(chǎn)板藍根的共有模式 從黑龍江大慶收集10批、鶴崗收集1 批, 內(nèi)蒙古赤峰收集1 批, 共12批板藍根樣品具有基本一致的指紋特征, 即在23～25 min時出現(xiàn)的一組強特征峰, 其指紋圖譜共有模式見圖3。

圖3 黑龍江-內(nèi)蒙古產(chǎn)板藍根的指紋圖譜共有模式

結合不同產(chǎn)地板藍根藥材指紋圖譜共有模式的研究結果分析可知, 三個指紋圖譜共有模式代表的產(chǎn)地, 其地理緯度分布存在一定規(guī)律即：安徽、河南、甘肅3個省的產(chǎn)地為第一緯度區(qū)間, 為北緯33～37°；河北的產(chǎn)地為第二緯度區(qū)間,為北緯 39～41°；黑龍江和內(nèi)蒙古兩省區(qū)的產(chǎn)地為第 三緯度區(qū)間, 為北緯 41～49°。由此可見, 以上三個指紋圖譜共有模式代表的產(chǎn)地與3個緯度分布區(qū)間完全吻合, 即緯度位置相同的產(chǎn)地, 其板藍根藥材的指紋圖譜特征基本相似, 隨著緯度的增加, 16.5 min 附近的強峰的逐漸減弱, 而23～25 min的一組峰則逐漸增強。以上結果表明, 藥材產(chǎn)地的緯度位置是造成藥材指紋特征差異的主要原因之一。

3 小結

3.1 本實驗采用的指紋圖譜分析方法, 經(jīng)過大量的實驗摸索及方法驗證所得, 能有效的測定出板藍根藥材的各成分,共有22個特征色譜峰。

3.2 本實驗收集的28批樣品, 采自河南、安徽、河北、甘肅、黑龍江、內(nèi)蒙古等6省區(qū), 區(qū)域分布比較均衡, 能體現(xiàn)不同產(chǎn)地的板藍根藥材指紋圖譜的特征, 具有較強的代表性。

[1]劉云海, 杜光, 韓洪剛, 等. 板藍根抗內(nèi)毒素研究. 醫(yī)學導報, 2001, 20(9):547-548.

[2]秦箐, 賀海平, Soren Brogger Christensen, 等. 板藍根低極性流分的分離及其免疫活性. 中國臨床藥學雜志, 2001, 10(1):29-31.

[3]秦箐, 賀海平. 板藍根中高級不飽和脂肪酸的分離鑒定及其免疫活性的研究. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志, 2001, 11(1):105-106.

[4]劉盛, 謝華, 喬傳卓. 板藍根藥材道地性初步研究總結. 中藥材, 2001, 24(5):319-321.

[5]孟巖, 范麗芳, 張?zhí)m桐. 河北道地藥材板藍根HPLC指紋圖譜研究. 河北醫(yī)藥, 2012, 34(11):1720-1723.

[6]林文艷, 莫建霞, 于榮敏, 等. 板藍根藥材HPLC指紋圖譜研究.中國現(xiàn)代應用藥學雜志, 2005, 22(5):378-380.

[7]趙艷玲, 曹琳, 王伽伯, 等. 板藍根正丁醇部位指紋圖譜的聚類分析及抑菌活性相關分析.中藥材, 2005, 28(12):1079-1082.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.18.215

2015-06-03]

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黃曉丹