張文利,王海光,孫豐廷，2,劉燦,英聰，2,寧宜寶*

(1.中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081；2. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070；3. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100193)

?

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征GD強(qiáng)弱毒株感染對(duì)豬外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響

張文利1,王海光1,孫豐廷1，2,劉燦3,英聰1，2,寧宜寶1*

(1.中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081；2. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070；3. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京 100193)

為了從細(xì)胞水平探討PRRSV GD 強(qiáng)毒株和PRRSV弱毒疫苗接種仔豬后對(duì)其外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響，運(yùn)用血常規(guī)技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)分析了豬體外周血淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化。將30日齡20頭SPF豬分成3組，分別感染HP-PRRSV GD第5代強(qiáng)毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作對(duì)照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定，分析淋巴細(xì)胞亞群的變化。結(jié)果表明：HP-PRRSV GD強(qiáng)毒株感染可導(dǎo)致白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、B細(xì)胞、Tc細(xì)胞、Th細(xì)胞、Tm細(xì)胞、和γδT細(xì)胞數(shù)量的下降；而弱毒疫苗GDr180株免疫則表現(xiàn)為白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、引起粒細(xì)胞、B細(xì)胞、Tc細(xì)胞、Th細(xì)胞和Tm細(xì)胞的上升，對(duì)γδT細(xì)胞的影響不大；陰性對(duì)照組在整個(gè)檢測(cè)期間各種細(xì)胞基本上保持穩(wěn)定狀態(tài)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出：與HP-PRRSV GD強(qiáng)毒株破壞免疫細(xì)胞不同，PRRSV弱毒疫苗 GDr180株免疫接種能刺激豬免疫細(xì)胞增殖，給試驗(yàn)豬提供良好的免疫反應(yīng)。

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征；疫苗株；野毒株；豬；外周血淋巴細(xì)胞亞群

高致病型豬繁殖與呼吸綜合征(High Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，HP-PRRS)是由高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)引起的一種母豬繁殖障礙和各種日齡(尤其是仔豬)呼吸系統(tǒng)失調(diào)的高度接觸性傳染病，感染豬死亡率高[1-2]。在我國(guó)，雖然HP-PRRSV弱毒活疫苗已廣泛應(yīng)用于該病的防控，但是對(duì)HP-PRRSV弱毒疫苗的細(xì)胞免疫機(jī)理的研究鮮有報(bào)道，特別是對(duì)野毒株與疫苗株同時(shí)對(duì)比的研究報(bào)道更少。HP-PRRSV誘導(dǎo)的免疫系統(tǒng)應(yīng)答和其他多數(shù)豬源病毒性病原不一樣，宿主免疫系統(tǒng)一方面為PRRSV的復(fù)制提供場(chǎng)所，另一方面在感染后產(chǎn)生特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫，為病毒清除發(fā)揮重要作用[3]。Pauly T等[4]的研究表明：細(xì)胞免疫在抗PRRSV免疫中發(fā)揮著重要的作用，試驗(yàn)豬在人工感染PRRSV后第3～28天CD4+T/CD8+T的比值較感染前顯著下降，細(xì)胞因子的反應(yīng)主要是IFN-γ的反應(yīng)和少量的IL-2反應(yīng)[5]。本實(shí)驗(yàn)研究分析了HP-PRRSV GD強(qiáng)毒株和用其人工減弱的GDr180疫苗株感染豬后外周血和淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞亞群的變化特征，比較了疫苗株和野毒株在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響，從而為HP-PRRSV疫苗的細(xì)胞免疫機(jī)理研究提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和毒株 SPF豬: 20頭30日齡PSF仔豬，購(gòu)于北京市SPF豬育種管理中心。HP-PRRSV GD-F5強(qiáng)毒株：由本實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定和保存。HP-PRRSV GDr180疫苗株，由本實(shí)驗(yàn)室弱化培育。

1.2 試劑 抗體：SPRD標(biāo)記小鼠抗豬CD3ε、FITC標(biāo)記小鼠抗豬CD4、PE標(biāo)記小鼠抗豬CD8、PE標(biāo)記小鼠抗豬SWC3a、FITC標(biāo)記小鼠抗豬CD21等抗體購(gòu)于北京博蕾德生物科技有限公司(購(gòu)買于southern biotech，Birmingham，USA)；豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測(cè)試劑盒：購(gòu)于IDEXX試劑公司。胎牛血清：購(gòu)于Life Technologies 生物公司。紅細(xì)胞裂解液：購(gòu)于德國(guó)RD試劑公司。1%多聚甲醛磷酸緩沖液：1 g多聚甲醛溶于100 mL 0.01 mol/L pH7.4 PBS中，與60 ℃加熱助溶。

2 方法

2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 將30日齡20頭SPF豬隨機(jī)分成三組，強(qiáng)毒組和弱毒組每組7頭，空白對(duì)照組每組6頭，各個(gè)組之間飼養(yǎng)在不同的動(dòng)物舍，分開(kāi)隔離飼養(yǎng)。在30日齡時(shí)接種病毒。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和感染情況見(jiàn)表1。試驗(yàn)期間，每天觀察實(shí)驗(yàn)豬的臨床癥狀，測(cè)量直腸溫度，記錄結(jié)果。

表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和攻毒情況

2.2 豬外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的測(cè)定 將DPI 0、3、7、10、14、21、28、35 d采集的抗凝血混勻后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀吸取100 uL計(jì)數(shù)，獲得外周血白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞總數(shù)的絕對(duì)值，用于外周血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定和外周血淋巴細(xì)胞亞群的分析。

2.3 粒細(xì)胞及單核細(xì)胞數(shù)量的確定 取100 uL抗凝血于2 mL離心管中，加入2 uL PE標(biāo)記小鼠抗豬SWC3a單克隆抗體，室溫避光作用30 min，加入紅細(xì)胞裂解液1mL，輕彈管壁并上下顛倒離心管兩至三次，避光裂解3 min，300 g離心2 min，用含1%胎牛血清的PBS洗滌一次，加入1%的多聚甲醛固定，上機(jī)進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)。用專門的細(xì)胞分析軟件Cell Quest Pro分析，鑒定方法如下：SWC3aSSChigh為粒細(xì)胞，SWC3aSSClow為單核細(xì)胞。粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量=血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定的白細(xì)胞總數(shù)×流式細(xì)胞儀所分析細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。

2.4 B細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定 取100 uL抗凝血于2 mL離心管中，加入2 uL FITC標(biāo)記小鼠抗豬CD21單克隆抗體，室溫避光作用30 min，加入紅細(xì)胞裂解液1 mL，輕彈管壁并上下顛倒，離心三次，避光裂解3 min，300 g離心2 min，用含1%胎牛血清的PBS洗滌一次，加入1%的多聚甲醛，上機(jī)進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)。用專門的細(xì)胞分析軟件分析，鑒定方法如下：CD21陽(yáng)性細(xì)胞為B細(xì)胞。B細(xì)胞絕對(duì)數(shù)=血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定的淋巴細(xì)胞總數(shù)×流式細(xì)胞儀所分析的B細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。

2.5 三色流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定豬外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量 取100 uL抗凝血于2 mL離心管中，加入2 uL SPRD標(biāo)記小鼠抗豬CD3單克隆抗體，加入2 uL FITC標(biāo)記小鼠抗豬CD4單克隆抗體，加入2 uL PE標(biāo)記小鼠抗豬CD8單克隆抗體進(jìn)行染色，室溫避光作用30 min，加入紅細(xì)胞裂解液1 mL，輕彈管壁并上下顛倒離心管兩至三次，避光裂解3 min，300 g離心2 min，用含1%胎牛血清的PBS洗滌一次，加入1%的多聚甲醛，上機(jī)進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)。用專門的細(xì)胞分析軟件分析，鑒定方法如下：CD3+CD4-CD8+為輔助性T(Th)細(xì)胞，CD3+CD4+CD8-為殺傷性T(Tc)細(xì)胞，CD3+CD4+CD8+為活化/記憶T細(xì)胞，CD3+CD4-CD8 low/-為γδT細(xì)胞。

各亞群細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)=細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定的淋巴細(xì)胞×流式細(xì)胞儀所分析的各亞群細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分含量，T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)=Th細(xì)胞+Tc細(xì)胞+活化/記憶細(xì)胞+γδT細(xì)胞。

3 結(jié)果

3.1 體溫變化 除GD強(qiáng)毒感染的7頭豬在感染后第4天體溫均升至41 ℃，持續(xù)3～4 d以外，弱毒疫苗感染的7頭豬和陰性對(duì)照6頭豬均無(wú)體明顯體溫變化。

3.2 HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后外周血白細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行白細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，空白對(duì)照組在1.5×107/mL左右變化 ,結(jié)果見(jiàn)圖1。

據(jù)阿里方面向《中國(guó)儲(chǔ)運(yùn)》記者透露的數(shù)據(jù)，口碑和餓了么一起在676個(gè)城市服務(wù)商家達(dá)到350萬(wàn)。在餓了么的平臺(tái)上，有66.7萬(wàn)的月度活躍騎手為消費(fèi)者服務(wù)，平均每個(gè)用戶每年下單近20次；在口碑的平臺(tái)上，1.67億月度活躍用戶充分享受著完善的到店服務(wù)。

圖1 外周血白細(xì)胞數(shù)量的變化

弱毒組外周血白細(xì)胞數(shù)量在免疫第三天后迅速上升，然后一直平緩下降至第14天，隨后開(kāi)始上升。強(qiáng)毒組在攻毒后的白細(xì)胞數(shù)量一直低于空白對(duì)照組，在第14天顯著降低，并一直處于較低的水平?？瞻讓?duì)照組外周血白細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。結(jié)果表明，HP-PRRSV GD強(qiáng)毒株可以導(dǎo)致白細(xì)胞數(shù)量的減少，而GDr180代疫苗株可以刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的白細(xì)胞。

3.3 HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后外周血淋巴細(xì)胞的數(shù)量的變化 在HP-PRRSV感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行淋巴細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，空白對(duì)照組在1.2×107/mL左右變化，結(jié)果如圖2。

圖2 外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化

強(qiáng)毒組在感染的前一個(gè)星期處于較高的水平，然后下降，并且一直低于空白對(duì)照組直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。而弱毒組從免疫后淋巴細(xì)胞的數(shù)量就開(kāi)始下降直至第10天，然后快速上升至第21天，開(kāi)始趨于平穩(wěn)。空白對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。結(jié)果表明，HP-PRRSV弱毒株GDr180可以引起淋巴細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株則引起淋巴細(xì)胞數(shù)量的下降。

3.4 HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后外周血單核細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV感染后不同天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行單核細(xì)胞數(shù)量測(cè)定，空白對(duì)照組在1.5×106/mL左右變化，結(jié)果如圖3。

圖3 外周血單核細(xì)胞數(shù)量的變化

強(qiáng)毒組在攻毒后一直處于較平穩(wěn)的狀態(tài)，在第10天時(shí)明顯低于空白組，并且一直保持到整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束；弱毒組在前10天一直和空白組保持相近的水平，然后一直上升?？瞻讓?duì)照組外周血單核細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。結(jié)果表示，HP-PRRSV弱毒株GDr180可以引起單核細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株可以引起單核細(xì)胞數(shù)量的下降。

3.5 HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后外周血粒細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV強(qiáng)弱毒感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行粒細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，空白對(duì)照組在8×106/mL左右變化，結(jié)果如圖4。

圖4 外周血粒細(xì)胞數(shù)量的變化

弱毒組在免疫后粒細(xì)胞數(shù)量迅速上升，然后又迅速下降至空白組水平，接著繼續(xù)上升，并且一直保持高于空白組的狀態(tài)直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。強(qiáng)毒組感染后一直處于稍低于空白組的狀態(tài)直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。空白對(duì)照組外周血粒細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。結(jié)果表明，HP-PRRSV弱毒株GDr180可以引起粒細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株可以引起粒細(xì)胞數(shù)量的下降。

3.6 HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后外周血B細(xì)胞的數(shù)量的變化 在HP-PRRSV強(qiáng)弱毒感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行B細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，空白對(duì)照組在1.0×106/mL左右變化，結(jié)果如圖5。

圖5 外周血B細(xì)胞數(shù)量的變化

弱毒組在免疫后開(kāi)始處于比較穩(wěn)定的水平和空白組無(wú)明顯差別，在14 d后迅速上升，并且一直處于較高的水平直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。強(qiáng)毒組在攻毒后的14 d一直處于低于比空白組的水平?？瞻讓?duì)照組外周血B細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HP-PRRSV弱毒株GDr180可以引起B(yǎng)細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株可以引起B(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的下降。

3.7 HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后外周血T細(xì)胞亞群數(shù)量的變化

3.7.1 外周血Tc細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行T細(xì)胞亞群數(shù)量的測(cè)定，結(jié)果如圖6所示。

弱毒組在免疫后剛開(kāi)始變化不大，在第10天開(kāi)始上升直至第21天，隨后變得平穩(wěn),并一直高于空白組的水平。強(qiáng)毒組在感染后一直保持與空白組相當(dāng)?shù)乃?，在?0天時(shí)低于空白組，并且在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)都低于空白組?？瞻讓?duì)照組外周血Tc細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程平穩(wěn)上升。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HP-PRRSV弱毒株GDr180可以引起Tc細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株可以引起Tc細(xì)胞數(shù)量的下降。

圖6 外周血Tc細(xì)胞數(shù)量的變化

3.7.2 外周血Th細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行Th細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，結(jié)果如圖7所示。

弱毒組在免疫后開(kāi)始處于比較穩(wěn)定的水平和空白組無(wú)明顯差別，在14 d后迅速上升，并且一直處于較高的水平直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。強(qiáng)毒組在攻毒后的14 d一直處于低于比空白組的水平，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，更加明顯低于空白組?？瞻讓?duì)照組外周血Th細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HP-PRRSV弱毒株GDr180可以引起Th細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株可以引起Th細(xì)胞數(shù)量的下降。

3.7.3 外周血Tm細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV GD強(qiáng)弱毒感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行Tm細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，結(jié)果如圖8所示。

圖8 外周血Tm細(xì)胞數(shù)量的變化

弱毒組在免疫后開(kāi)始處于比較穩(wěn)定的水平和空白組無(wú)明顯差別，在14 d后迅速上升，并且一直處于較高的水平直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。強(qiáng)毒組在攻毒后的14 d一直處于低于比空白組的水平，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，更加明顯低于空白組。空白對(duì)照組外周血Tm細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HP-PRRSV GDr180弱毒株可以引起Tm細(xì)胞的上升，而強(qiáng)毒株可以引起Tm細(xì)胞數(shù)量的下降。

3.7.4 外周血γδT細(xì)胞數(shù)量的變化 在HP-PRRSV強(qiáng)弱毒感染后不同的天數(shù)內(nèi)采集實(shí)驗(yàn)豬的外周血(抗凝血)，進(jìn)行γδT細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定，結(jié)果如圖9所示。

圖9 外周血γδT細(xì)胞數(shù)量的變化

弱毒組在免疫后開(kāi)始處于比較穩(wěn)定的水平和空白組無(wú)明顯差別直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。強(qiáng)毒組在攻毒后一直處于低于空白組的水平，在第7天時(shí)處于最低點(diǎn)，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，更加明顯低于空白組?？瞻讓?duì)照組外周血γδT細(xì)胞數(shù)量在整個(gè)過(guò)程中相對(duì)穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PRRSV弱毒株GDr180對(duì)γδT細(xì)胞的影響不大，而強(qiáng)毒株可以引起γδT細(xì)胞數(shù)量的下降。

4 討論與小結(jié)

T淋巴細(xì)胞根據(jù)分化抗原和MHC抗原的不同和是否表達(dá)CD8和CD4，可劃分為Tc細(xì)胞，Th細(xì)胞，Tm細(xì)胞和γδT細(xì)胞。細(xì)胞免疫在抵抗病毒感染中發(fā)揮著重要的作用，因?yàn)門c細(xì)胞可特異性的殺傷靶細(xì)胞；Th細(xì)胞可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖活化，并且與B細(xì)胞作用可促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性的抗體；Tm細(xì)胞可產(chǎn)生免疫記憶，對(duì)于下次同種抗原的再次入侵發(fā)揮更強(qiáng)大的免疫效應(yīng)；B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫在抗病毒感染中也發(fā)揮著重要作用，因?yàn)锽細(xì)胞的增殖活化可產(chǎn)生中和抗體，與病毒結(jié)合使其被清除；白細(xì)胞亞群包括白細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞。白細(xì)胞是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。它通過(guò)吞噬和產(chǎn)生抗體等方式來(lái)抵御和消滅入侵的病原微生物[6]。

實(shí)驗(yàn)中PRRSV GDF5強(qiáng)毒感染后，豬體內(nèi)各種T、B淋巴細(xì)胞；白細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞等數(shù)量降低，并且絕對(duì)值都低于空白對(duì)照組，說(shuō)明PRRSV強(qiáng)毒對(duì)豬體具有免疫抑制作用。HP-PRRSV GDr180弱毒株免疫后，豬體內(nèi)的各種淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞在剛開(kāi)始和空白水平無(wú)明顯差別，在免疫后大約2周后出現(xiàn)上升，說(shuō)明HP-PRRSV GDr180疫苗株不會(huì)對(duì)仔豬的免疫系統(tǒng)造成抑制，反而會(huì)刺激豬體產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫保護(hù)作用。

大量實(shí)驗(yàn)室研究和臨床數(shù)據(jù)證明，HP-PRRS體液免疫在疾病預(yù)防控制中作用有限，由于PRRSV 的抗體依賴特性的存在，在低抗體水平情況下，抗體不但不能減輕PRRS的疾病程度，反而促進(jìn)了PRRSV的增殖，加重藍(lán)耳病的嚴(yán)重性。由此可見(jiàn)，單憑體液免疫不能有效防控豬藍(lán)耳病，同時(shí)，大量的臨床數(shù)據(jù)表明，HP-PRRS減毒活疫苗在藍(lán)耳病防控中的作用顯著優(yōu)于滅活疫苗，究其原因，可能是細(xì)胞免疫發(fā)揮了重要作用。本研究結(jié)果表明：與HP-PRRS GD強(qiáng)毒株感染后各種免疫細(xì)胞顯著下降不同，HP-PRRS GDr180弱毒疫苗免疫豬 的各種免疫細(xì)胞在疫苗免疫兩周后均明顯上升，其上升量甚至明顯高于非免疫正常對(duì)照組。由此可見(jiàn)，弱毒活疫苗免疫豬的細(xì)胞免疫在疾病控制中發(fā)揮了重要作用。

[1] Tian K, Yu X, Zhao T,etal. Emergence of fatal PRRSV variants: unparalleled outbreaks of a typical PRRS in China and molecular dissection of the unique hallmark[J]. PLoS One, 2007, 2(6): e526.

[2] 寧宜寶, 鄭 杰, 張純萍. 我國(guó)南方豬高熱病的研究(Ⅱ)——豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離、鑒定和致病性測(cè)定[J]. 中國(guó)獸藥雜志, 2007, 41(4): 14-18.

[3] Yoon K J, Zimmerman J J, Swenson S L,etal. Characterization of the humoral immune response to porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus infection.[J]. J Vet Diagn Invest, 1995, 7(3): 305-312.

[4] Pauly T, Weiland E, Hirt W,etal. Differentiation between MHC-restricted and non-MHC-restricted porcine cytolytic T lymphocytes[J]. Immunology, 1996, 88(2): 238-246.

[5] Shimizu M, Yamada S, Kawashima K,etal. Changes of lymphocyte subpopulations in pigs infected with porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus [J]. Vet Immunol Immunopathol, 1996, 50(1/2): 19-27.

[6] 寧宜寶. 獸用疫苗學(xué)[M]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2009.

(編輯：李文平)

·新聞資訊·

《中國(guó)獸藥雜志》入編《中文核心期刊要目總覽》

自《中文核心期刊要目總覽》2014年版編委會(huì)2015年7月獲悉：依據(jù)文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)的原理和方法，經(jīng)研究人員對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)的檢索、統(tǒng)計(jì)和分析，以及學(xué)科專家評(píng)審，《中國(guó)獸藥雜志》入編《中文核心期刊要目總覽》2014年版(即第七版)之畜牧、動(dòng)物醫(yī)學(xué)、狩獵、蠶、蜂類的核心期刊。

歡迎踴躍投稿！http://zgsyzz.ijournals.cn

Study on Changes of Lymphocyte Subpopulations in Peripheral Blood of the Pigs Inoculated with Highly Pathogenic PRRSV GD Wild and Vaccine Strain

In the study, we used an immunofluorescence assay to investigate changes in lymphocyte subpopulations in peripheral blood of the specific-pathogen-free (SPF) pigs inoculated with highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) GD wild and vaccine strains, which was in a cellular way to discuss the effect between the lymphocyte subpopulations in peripheral blood of the SPF pigs and HP-PRRSV GD wild and vaccine type. SPF pigs inoculated with PRRS wild virus showed remarkable decreases in total lymphocytes，white blood cells，monocytes，granulocytes，B cells，Tc cells，Th cells, Tm cells and γδT cells, while SPF pigs inoculated with PRRS vaccine virus increases in total lymphocytes，white blood cells，monocytes，granulocytes，B cells, Tc cells, Th cells，Tm cells after PID 3, and the numbers of all cells remain substantially stable in the negative control group. From these results we can conclude that HP-PRRSV GD wild type can destroy immune cells, while HP-PRRSV GD vaccine type can stimulate immune cell proliferation, which provides a good immune response to the pigs.

highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome; vaccine strain; virulent strain; pig; lymphocyte subpopulations in peripheral blood

張文利，碩士，從事分子病毒學(xué)研究。

寧宜寶。E-mail: ningyibao@ivdc.org.cn

2015-08-07

A

1002-1280 (2015) 09-0001-06

S858.28

(1.ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081,China; 2.HuazhongAgricultureUniversity,Wuhan430070,China; 3.ChinaAgricultureUniversity,Beijing100093,China)

ZHANG Wen-li1, WANG Hai-guang1, SUN Feng-ting1,2, LIU Can3, YING Cong1,2, NING Yi-bao1*