姜林峰，莫漢明，張正龍，楊力兵，顏騰亞，汪晨?jī)?/p>

(西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730030)

異鼠李素在不同缺氧狀況下抗缺氧作用的實(shí)驗(yàn)研究

姜林峰，莫漢明，張正龍，楊力兵，顏騰亞，汪晨?jī)?

(西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730030)

[摘要]目的：觀察異鼠李素在不同缺氧狀況下對(duì)小鼠缺氧性損傷的保護(hù)作用.方法:采用不同方法建立常壓缺氧、特異性心肌缺氧及亞硝酸鈉中毒性缺氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型.研究異鼠李素在不同缺氧狀況下，對(duì)小鼠存活時(shí)間的影響.結(jié)果:異鼠李素能使常壓缺氧，特異性心肌缺氧及亞硝酸鈉中毒性缺氧小鼠生存時(shí)間明顯延長(zhǎng).結(jié)論:異鼠李素能提高實(shí)驗(yàn)小鼠在不同缺氧狀態(tài)下的抗缺氧能力，表明異鼠李素具有一定的耐缺氧活性.

[關(guān)鍵詞]異鼠李素；不同缺氧狀況；抗缺氧

缺氧是指因組織供氧不足或用氧障礙，而導(dǎo)致其代謝功能和組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生異常變化的病理過(guò)程，常見(jiàn)于多種臨床疾病.心、腦等器官缺氧亦是導(dǎo)致機(jī)體死亡的重要原因.針對(duì)高原地區(qū)，礦井等缺氧環(huán)境中工作和生活的人群及動(dòng)物，在食品或飼料中添加具有抗缺氧作用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)于提高其耐缺氧能力，減輕惡劣條件缺氧對(duì)機(jī)體的損害，延長(zhǎng)存活時(shí)間具有重要意義.

異鼠李素，化學(xué)名3,5,7-三羥基-2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)苯并吡喃-4-酮[3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) chromen-4-one]，是從銀杏、沙棘中提取出的主要黃酮類物質(zhì)[1].大量研究證實(shí)：異鼠李素具有擴(kuò)張冠脈，抗炎，抗病毒，抗氧化，清除氧自由基，保護(hù)心、肝、腎等多種重要臟器等多種生物學(xué)活性[2].而目前有關(guān)異鼠李素耐缺氧作用的研究還較少.本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用小鼠制作多種缺氧模型，從整體水平上研究不同缺氧狀況下異鼠李素對(duì)小鼠缺氧性損傷的保護(hù)作用.

1材料

1.1　試劑

異鼠李素(isorhamnetin, Iso)購(gòu)自上海倍卓生物科技有限公司，純度≥98%；鹽酸異丙腎上腺素，購(gòu)自上海倍卓生物科技有限公司，純度≥99%，批號(hào) 14052601；鹽酸普萘洛爾，購(gòu)自山西云鵬制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 B121101；亞硝酸鈉，購(gòu)自湖北巨勝科技有限公司，CAS No.7632-00-0.

1.2　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SPF級(jí)雄性小鼠105只，體重(26±3)g，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，普通喂養(yǎng)，自由進(jìn)食.

2方法

2.1　異鼠李素對(duì)常壓缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

將28只雄性小鼠隨機(jī)分為4組，每組7只，采用腹腔注射給藥.生理鹽水對(duì)照組：注射生理鹽水10 g/kg，異鼠李素低、中、高劑量組分別注射異鼠李素1 g/kg、2 g/kg、5 g/kg.30 min后將小鼠分別放入300 mL廣口磨口瓶中密封(瓶?jī)?nèi)放堿石灰15 g吸收CO2和H2O)，記錄小鼠存活時(shí)間，以呼吸停止為指標(biāo).

2.2　異鼠李素對(duì)特異性心肌缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

將42只雄性小鼠，隨機(jī)分為6組，每組7只.采用腹腔注射給藥.生理鹽水對(duì)照組：注射生理鹽水10 g/kg；模型組：注射生理鹽水10 g/kg + 異丙腎上腺素15 mg/kg(30 min 后皮下注射).異鼠李素低劑量組：注射異鼠李素 1 g /kg + 異丙腎上腺素15 mg/kg(30 min 后皮下注射)；異鼠李素中劑量組：注射異鼠李素 2 g/kg + 異丙腎上腺素15 mg/kg(30 min 后皮下注射)；異鼠李素高劑量組：注射異鼠李素5g/kg + 異丙腎上腺素15 mg/kg(30 min 后皮下注射)；普萘洛爾陽(yáng)性對(duì)照組：注射鹽酸普萘洛爾30 mg/kg + 異丙腎上腺素15 mg/kg (30 min 后皮下注射).10 min 后將小鼠分別放入300 mL 廣口磨口瓶中密封，記錄小鼠存活時(shí)間，以呼吸停止為指標(biāo).

2.3　異鼠李素對(duì)亞硝酸鈉中毒小鼠存活時(shí)間的影響

將35只雄性小鼠，隨機(jī)分為5組，每組7只.采用腹腔注射給藥.模型組：注射生理鹽水10 g/kg + 亞硝酸鈉0.2 g/kg(60 min后給藥)；異鼠李素低劑量組：注射異鼠李素1 g/kg + 亞硝酸鈉0.2 g/kg(60 min 后給藥)；異鼠李素中劑量組：注射異鼠李素2 g/kg + 亞硝酸鈉0.2 g/kg(60 min 后給藥)；異鼠李素高劑量組：注射異鼠李素5 g/kg + 亞硝酸鈉0.2 g/kg(60 min 后給藥)；普萘洛爾陽(yáng)性對(duì)照組：注射鹽酸普萘洛爾30 mg/kg + 亞硝酸鈉0.2 g/kg(60 min 后給藥)，記錄小鼠存活時(shí)間，以呼吸停止為指標(biāo).

2.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示.所有數(shù)據(jù)均用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，組間差異比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異.

3結(jié)果

3.1　異鼠李素對(duì)常壓缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

由表1可見(jiàn)，與生理鹽水對(duì)照組相比，異鼠李素低、中、高劑量組均能延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，差異有顯著性(P<0.05或P<0.01).結(jié)果表明，異鼠李素能提高常壓缺氧小鼠的抗缺氧能力.

3.2　異鼠李素對(duì)特異性心肌缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

由表2可見(jiàn)，與生理鹽水對(duì)照組相比，模型組小鼠存活時(shí)間明顯縮短，差異有顯著性(P<0.01)；與模型組相比，異鼠李素低、中、高劑量組與普萘洛爾陽(yáng)性對(duì)照組相似均能延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，差異有顯著性(P<0.05).結(jié)果表明，異鼠李素能提高異丙腎上腺素誘導(dǎo)的特異性心肌缺氧小鼠的抗缺氧能力.

3.3　異鼠李素對(duì)亞硝酸鈉中毒小鼠存活時(shí)間的影響

由表3可見(jiàn)，與模型組相比，異鼠李素低、中、高劑量組均能延長(zhǎng)亞硝酸鈉中毒小鼠的存活時(shí)間.異鼠李素中、高劑量組與普萘洛爾陽(yáng)性對(duì)照組相似能使亞硝酸鈉中毒小鼠的存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異有顯著性(P<0.05).結(jié)果表明,異鼠李素能提高亞硝酸鈉中毒小鼠的抗缺氧能力.

表3　Iso對(duì)亞硝酸鈉中毒小鼠存活時(shí)間的影響±s，n=7)

4討論

氧是維持生命活動(dòng)所必需的物質(zhì)，由于某種原因引起機(jī)體嚴(yán)重缺氧時(shí)，一些重要器官就會(huì)死亡，特別是心、腦、腎.近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)銀杏，沙棘的耐缺氧、免疫調(diào)節(jié)等作用進(jìn)行了大量的研究及報(bào)道，已證實(shí)銀杏，沙棘中的主要單體成分異鼠李素具有擴(kuò)張冠脈，抗炎，抗病毒，抗氧化，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)[3,4]，清除氧自由基，保護(hù)心、肝、腎等多種重要臟器等多種生物學(xué)效應(yīng)[5,6].

本研究是對(duì)小鼠在不同缺氧狀況下進(jìn)行的抗缺氧實(shí)驗(yàn).研究中所采用的小鼠常壓缺氧模型、特異性心肌缺氧模型及亞硝酸鈉中毒性缺氧模型是研究耐缺氧藥物的常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，其制備方法簡(jiǎn)便易行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性高[7].常壓缺氧實(shí)驗(yàn)中，小鼠因耗盡密封瓶中O2，使吸入氣中PO2降低，發(fā)生乏氧性缺氧.異鼠李素能顯著延長(zhǎng)常壓缺氧模型中小鼠的存活時(shí)間.提示異鼠李素低、中、高劑量組均能提高常壓缺氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耐缺氧能力.特異性心肌缺氧實(shí)驗(yàn)中，異丙腎上腺素為β受體激動(dòng)劑,可明顯增加心肌耗氧量，縮短存活時(shí)間.普萘洛爾為β受體阻斷劑，具有降低心肌耗氧量，提高心肌耐缺氧力的作用.實(shí)驗(yàn)中，異鼠李素低、中、高劑量組與普萘洛爾組相似,均可以明顯降低心肌耗氧量，延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間.表明，異鼠李素能提高特異性心肌缺氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耐缺氧能力.亞硝酸鈉中毒性缺氧屬血液中毒性缺氧，亞硝酸鹽使體內(nèi)亞鐵血紅蛋白氧化成高價(jià)鐵血紅蛋白，失去攜氧能力.異鼠李素亦能明顯延長(zhǎng)亞硝酸鈉中毒小鼠的存活時(shí)間，可進(jìn)一步證明異鼠李素能提高細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受能力，降低機(jī)體耗氧，改善機(jī)體的缺氧狀態(tài).其作用機(jī)制可能與抗氧化作用有關(guān)[8].

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)異鼠李素能提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在不同缺氧條件下的耐缺氧力，其抗缺氧作用與抗氧化作用之間的關(guān)系有待進(jìn)一步研究.異鼠李素的抗氧化作用可以為其的藥物開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù).

參考文獻(xiàn)：

[1] 肖穎, 余英才, 余雄英, 等. 異鼠李素和槲皮素抗氧化活性研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2012, 23(5):1118-1120.

[2] 馬養(yǎng)民, 姜少娟, 史清華. 沙棘果渣中異鼠李素和槲皮素的提取與分離[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 24(5):121-124.

[3] 趙增光，劉應(yīng)才. 異鼠李素的心血管保護(hù)作用[J]. 臨床藥學(xué),2008,14(15): 2321-2323.

[4] 朱玲, 王正榮, 周黎明, 等. 異鼠李素對(duì)肺癌的作用及其抗腫瘤機(jī)制的初步探討[J]. 航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程, 2005, 18(5): 381-383.

[5] 董曦, 孫桂波, 羅云, 等. 異鼠李素對(duì)H2O2引起的H9C2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用研究[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2015, 31(6): 853-860.

[6] 潘金火, 薛春余, 嚴(yán)娟, 等. 異鼠李素-3,7-二-O-β-D-葡萄糖苷的保肝降酶實(shí)驗(yàn)[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2002, 13(12): 714-715.

[7] 鄭悅, 嵇揚(yáng). 抗缺氧研究常用動(dòng)物模型及抗缺氧藥物[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 26(2): 170-173.

[8] 劉瑞, 孟芳, 劉宇, 等. 異鼠李素及橙皮甙抑制LDL氧化修飾作用的研究[J].中藥材, 2007, 30(6): 677-681.

Experimental Studies about Antihypoxic Effect of Isorhamnetin on Hypoxia Injury in Rats

JIANG Lin-feng, MO Han-ming, ZHANG Zheng-long,

YANG Li-bing, YAN Teng-ya, WANG Chen-jing

(Medical College of Northwest University for Nationalities, Lanzhou 730030, China)

[Abstract]Objective To explore the protective effect of (-) isorhamnetin on hypoxic injury under different hypoxic conditions in mice. Method The survival time of mice were studies by using three different hypoxic models, including normal pressure hypoxia model, specific myocardial hypoxia model and sodium nitrite poisoning model. Result The result showed the isorhamnetin significantly increased the mice survival time under the three different hypoxia models. Conclusion Isorhamnetin could increase the anti-hypoxia ability under the different hypoxia conditions in mice, which indicated isorhamnetin had anti-hypoxia activities.

[Key words](-) Isorhamnetin; Hypoxia; Antihypoxic

[作者簡(jiǎn)介]姜林峰(1993—)，男，云南省楚雄彝族自治州大姚縣人.

[通訊作者]*

[基金項(xiàng)目]2014年國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81360490)；2015年西北民族大學(xué)本科生科研立項(xiàng)資助項(xiàng)目.

[收稿日期]2015-08-02

[中圖分類號(hào)]Q47

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1009-2102(2015)03-0038-04