黃文明，尕松代吉，李增魁

（1.青海省同德縣畜牧獸醫(yī)工作站，青海 同德813200 ；2.青海省玉樹州畜牧獸醫(yī)工作站，青海 玉樹 815000；3.青海大學農牧學院，青海 西寧 810016）

布魯菌病（Brucellosis）簡稱“布病”，是由布魯菌（Brucella spp）引起的以家畜為主要傳染源的人畜共患傳染病。本病呈世界范圍流行，在全球的200 多個國家和地區(qū)中，大約170 多個國家和地區(qū)報告了人、畜間布魯菌病不同程度的流行，給畜牧業(yè)生產帶來嚴重危害并嚴重威脅人類健康。布魯菌病呈人、畜雙重性危害，對于家畜生產來說，主要表現(xiàn)為產肉、產奶、使役能力降低等生產性能損害；同時還直接影響家畜優(yōu)良品種的改良和推廣，感染家畜表現(xiàn)為流產、不孕、空懷、繁殖力降低、仔畜存活率降低，從而致使牲畜的數(shù)量減少[2]。人的感染途徑主要因吃未煮熟的肉、奶或接觸染有布魯菌的畜產品所致；此外，人感染該病后常因誤診而轉為慢性，反復發(fā)作長期不愈，影響身體健康[1-3]。

布魯菌病曾猖獗一時，然而由于世界各國均采取了有力的防制措施，截至20 世紀80 年代布魯菌病疫情已經趨于平穩(wěn)，甚至美國、瑞典、丹麥等國家和地區(qū)達到消除的狀態(tài)。我國的人畜布魯菌病疫情于20 世紀80 年代末期下降到有史以來的最低點，且北京市、天津市、上海市、陜西省、遼寧省、吉林省、寧夏回族自治區(qū)和甘肅省等8 個省市區(qū)先后達到我國規(guī)定的人畜布魯菌病控制標準[2]。然而出乎意料的是自20 世紀90 年代開始，我國人畜布魯菌病疫情開始逐年上升，特別是在1995 年后幾乎所有的過去有布魯菌病流行的省區(qū)皆出現(xiàn)了疫情反彈，在東北和西北的近10個省區(qū)內尤為突出[3]。據(jù)衛(wèi)生部2011 年報告，人布魯菌病發(fā)病數(shù)38 151 例，相比2010 年增加12.45%，有逐年上升趨勢，且動物發(fā)病數(shù)更達到驚人數(shù)目，這給人類健康和畜牧業(yè)帶來嚴重危害和造成巨大的經濟損失。因此我國的布魯菌病現(xiàn)況與結核病相似，均被列為再度肆虐的傳染病。青海省地處我國西北地區(qū)，畜牧業(yè)生產條件得天獨厚，全省牧區(qū)均以草原牧業(yè)為主，擁有較大的牛羊存欄量，同時由于牛布魯菌病疫情又有上升趨勢，因此進行布魯菌病的流行病學調查和防制措施分析研究具有重要的現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 血液樣本采集 2012 年5 月至2013 年8 月選取青海省海西蒙古族藏族自治州（HX）、海南藏族自治州（HAN）、黃南藏族自治州（HUN）、果洛藏族自治州（GL）和玉樹藏族自治州（YS）5 個市縣的大型牛場、規(guī)?；B(yǎng)殖戶及農戶飼養(yǎng)的未經免疫牛進行血液采樣。采血針采取牛頸靜脈血5 mL 置于滅菌離心管中，待血液凝固析出血清后，以2 500 r/min 離心5 min，分離血清，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.2 牛布魯菌病虎紅平板凝集試驗（RBT）分析我們對采集的牛血液進行血清分離后，根據(jù)《動物布魯菌病診斷技術》（GB/T18646—2002）進行布魯菌病的血清學分析[4]。我們首先用虎紅平板凝集試驗（RBPT）進行初篩，在陰、陽性血清對照成立的條件下，對被檢血清進行判定。受檢血清在4 min 內出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。布魯菌病RBT 抗原，購自中國疾病預防控制中心傳染病研究所；布魯菌病標準陰、陽性血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 牛、羊布魯菌病動物布病試管凝集試驗（SAT）分析 采用動物布病試管凝集試驗（SAT）對牛血清進行定量復篩診斷，參照比濁管，按各試管上層液體清亮度進行結果判讀：（1）++++菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；（2）+++菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；（3）++菌體凝集顯著，液體50%清亮；（4）凝集物有沉淀，液體25%清亮；（5）凝集物無沉淀，液體均勻混濁。我們以牛1∶100血清稀釋出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時，受檢血清及判定為陽性；牛1∶50 血清稀釋出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時，受檢血清判定為可疑反應。對于可疑反應家畜經3～4 周后重檢，如果仍為可疑，該牛判為布魯菌病血清學陽性。SAT 抗原，購自中國疾病預防控制中心傳染病研究所；布魯菌病標準陰、陽性血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.4 數(shù)據(jù)分析 不同地區(qū)間布魯菌病患病率差異采用SPSS16.0 軟件進行Chip-Square統(tǒng)計學分析；P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.01、P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示沒有顯著性差異。

2 結果

2.1 牛布魯菌病虎紅平板凝集試驗（RBT）檢測結果 我們于2012 年5 月至2013 年8 月對青海省5 個市縣的大型牛場、規(guī)模化養(yǎng)殖戶及農戶飼養(yǎng)的未經免疫牛進行了血清學流行病調查，共采集牛血液樣品2 734 份，虎紅平板凝集試驗（RBPT）調查結果顯示，青海省牛的布魯菌病陽性率為3.51%（96/2734）；海西蒙古族藏族自治州（HX）、海南藏族自治州（HAN）、黃南藏族自治州（HUN）、果洛藏族自治州（GL）和玉樹藏族自治州（YS）地區(qū)牛的布魯菌感染率分別為2.87%，2.78%，2.20%，6.13%和2.98%，不同地區(qū)間的布魯菌病患病率經統(tǒng)計學分析無顯著性差異（P＞0.05）（表1）。

2.2 牛布病試管凝集試驗（SAT）檢測結果 虎紅平板凝集試驗（RBPT）作為《動物布魯菌病診斷技術》（GB/T18646—2002）規(guī)定的牛布魯菌病診斷方法具有快速、簡單及易操作的優(yōu)點，然而為了進一步確診復查牛的布魯菌病，我們采取《動物布魯菌病診斷技術》（GB/T18646—2002）規(guī)定的動物布病試管凝集試驗（SAT）對牛血清進行定量復篩診斷，結果顯示，5 個不同地區(qū)的牛血清樣品布魯菌陽性率分別為2.29%，2.62%，2.20%，5.00%和2.46%，平均感染率為3.00%（82/2734）。經Chip-Square 統(tǒng)計學分析，不同地區(qū)間的布魯菌血清陽性率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）（表1）。

表1 青海省不同地區(qū)牛布魯菌病感染率

3 討論

布魯菌病是一種呈世界性分布的人獸共患病，20 世紀80 年代末期，我國的布魯菌病疫情下降到有史以來的最低點，甚至多個省、市、區(qū)達到我國規(guī)定的布魯菌病控制標準。但是20 世紀90年代以后，我國的布魯菌病人畜感染率逐年上升，特別是在1995 年后幾乎所有的過去有布魯菌病流行的省區(qū)皆出現(xiàn)了疫情反彈，在東北和西北的近10 個省區(qū)內尤為突出[3、5-6]。2011 年衛(wèi)生部報告人布魯菌病發(fā)病率相比2010 年增加12.45%，呈逐年上升趨勢。此外，動物發(fā)病數(shù)更達到驚人數(shù)目，給畜牧業(yè)發(fā)展帶來嚴重危害和巨大的經濟損失，并嚴重威脅人類健康，因此布魯菌病被列為再度肆虐的傳染病。

青海省的布魯菌病流行于解放前，危害嚴重。解放后全省對于牛、羊布魯菌病的防治先后經歷了檢疫、免疫、免疫效果考核及疫情監(jiān)測4 個階段，截至1997 年青海省牛、羊布魯菌病的陽性率逐漸下降至0.32%和0.33%，顯著低于建國初期的22.89%和17.88%，疫情達到可控狀態(tài)，促進了青海全省的畜牧業(yè)發(fā)展及經濟發(fā)展[7]。然而，我們的調查結果顯示，青海省牛的布魯菌血清陽性率為3.00%～3.51%，顯著高于1997 年的布魯菌感染率，提示我們青海省牛的布魯菌病患病率出現(xiàn)了顯著的反彈。現(xiàn)代化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，牲畜流動和交易的頻繁等可能是布魯菌病患病率出現(xiàn)反彈的原因。

我們采用布病試管凝集試驗(SAT)對青海省的5 個市、縣及區(qū)進行布魯菌病的血清學調查，結果虎紅平板凝集試驗（RBPT）青海省牛的布魯菌病患病率為3.51%（96/2734）；布病試管凝集試驗（SAT）的復篩分析結果顯示，青海省牛的布魯菌病患病率為3.00%（82/2734）。上述結果表明，虎紅平板凝集試驗（RBPT）檢測到的布魯菌血清陽性率高于動物布病試管凝集試驗（SAT），經統(tǒng)計學分析并沒有顯著性的差異，提示我們作為我國使用最廣泛的標準布魯菌病診斷方法，可信度較高。但是，有研究報道，在布魯菌病的流行病學調查中采用OIE 標準方法iELISA和cELISA與RBPT 和SAT 同時進行檢測，OIE 標準方法的檢出陽性率均低于國標方法，提示我們RBPT 和SAT檢測的特異性和敏感性可能低于iELISA和cELISA，有假陰性及假陽性結果的出現(xiàn)[4]。然而，由于RBPT 和SAT 作為我國的官方布魯菌標準診斷方法，在我國的布魯病診斷調查中依然是具有參考性的。

我們的調查結果顯示，青海省牛的布魯菌病患病率出現(xiàn)了顯著的反彈，布魯菌陽性率顯著高于布病可防可控的標準，因此為了更好防制本病今后要加強疫情監(jiān)測，制定綜合防制措施。

[1]衛(wèi)生部地方病防治司，農業(yè)部畜牧獸醫(yī)司.布魯菌病防治手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1989：3-4.

[2]農業(yè)部畜牧獸醫(yī)司.中國動物疫病志[M].北京：科學出版社，1993：106-118.

[3]尚德秋.布魯菌病再度肆虐及其原因[J].中國地方病防治雜志，2001，16（1）：29.

[4]Mangalgi S，Sajjan A.Comparison of three blood culture techniques in the diagnosis of human brucellosis[J].JLab Physicians，2014，6（1）：14-17.

[5]Xulong L，Hailong Q，Zhaoyang B，et al.Seroprevalence of Brucella infection in yaks（Bos grunniens）on the Qinghai-Tibet plateau of China [J].Trop Anim Health Prod，2011，43（2）：305-306.

[6]Chen Z，Zhang W，Ke Y，et al.High-risk regions of human brucellosis in china：implications for prevention and early diagnosis of travel-related infections[J].Clin Infect Dis，2013，57（2）：330-332.

[7]傅義娟.青海省海東地區(qū)牛羊布魯菌病流行病學調查及防治效果分析[D].蘭州：甘肅農業(yè)大學，2005 .