豬細(xì)小病毒病的診斷及防治措施

劉歡+劉好朋++賀東生

摘要：從臨床癥狀、病理變化、診斷方法等多方面詳細(xì)介紹了豬細(xì)小病毒病的發(fā)病特點(diǎn)、診斷和預(yù)防措施，旨在引起獸醫(yī)工作者對該病的重視，同時(shí)也為豬場診斷、預(yù)防該病提供理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：豬細(xì)小病毒；臨床癥狀；診斷方法；防制措施

中圖分類號：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）12-0019-02

豬細(xì)小病毒病是由細(xì)小病毒（PPV）引起的豬傳染病，廣泛存在于豬群中，感染率高，一些養(yǎng)殖戶仔豬出生后死亡的現(xiàn)象越來越突出，造成很大經(jīng)濟(jì)損失。2014年7月，韶關(guān)市某豬場發(fā)現(xiàn)以1～2胎為主的新母豬發(fā)病，表現(xiàn)為分娩延遲，產(chǎn)死胎、木乃伊胎，有部分健康活仔，窩產(chǎn)仔數(shù)偏少，母豬均表現(xiàn)正常，發(fā)病率100%。筆者經(jīng)臨床檢查、解剖觀察、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等方法確診為豬細(xì)小病毒病，現(xiàn)將該病的診療情況進(jìn)行報(bào)告，并結(jié)合實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，對豬細(xì)小病毒病的防治措施進(jìn)行介紹。

1 臨床癥狀

1.1 母畜生殖障礙

PPV感染的主要臨床癥狀是母畜生殖障礙，表現(xiàn)為頭胎或經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)出大部分死胎、木乃伊胎、畸形胎及正常胎兒，或產(chǎn)少數(shù)不久即死的虛弱仔豬。

1.2 生殖臨床癥狀

生殖臨床癥狀與發(fā)生感染的妊娠階段有關(guān)。妊娠母豬特別是頭胎的妊娠母豬如感染該病，在其全部妊娠期內(nèi)均可發(fā)生流產(chǎn)。當(dāng)妊娠早期（6～35 d）受到感染時(shí)，胎兒死亡率可高達(dá)80%～100%，母豬迅速吸收死亡胎兒，導(dǎo)致不孕和重復(fù)發(fā)情[1]；母豬在妊娠中期（35～70 d）感染病毒后，常形成不同程度的木乃伊胎兒，在分娩時(shí)排出；母豬在妊娠中期（70～114 d）感染病毒后，因胎兒自身免疫反應(yīng)而抵御病毒得以存活，但長期帶毒[2]。一般來講，母豬在免疫中后期感染病毒后死產(chǎn)發(fā)生率10%[3]。公豬感染后，受精率或性欲沒有明顯的影響，但成為長期帶毒者。

2 病理變化

2.1 母豬

母豬流產(chǎn)時(shí)，肉眼可見子宮內(nèi)膜有輕微炎癥，胎盤部分鈣化，胎兒在子宮內(nèi)死亡后被軟組織吸收。組織學(xué)病變?yōu)槟肛i的妊娠黃體萎縮，子宮上皮組織和固有層有局灶性和彌散性單核細(xì)胞浸潤。感染胎兒死后可見多種組織和器官有范圍廣泛的細(xì)胞壞死、炎癥和核內(nèi)包涵體[4]。

2.2 胎兒及仔豬

大多數(shù)死胎、死仔或弱仔可見皮下充血或水腫、出血、體腔積有淡紅或淡黃色滲出液、脫水等；肝、脾、腎有時(shí)腫大、脆弱或萎縮；個(gè)別死胎、死仔皮膚出血，弱仔生后半小時(shí)先在耳尖，后在頸、胸、腹部及四肢上端內(nèi)側(cè)出現(xiàn)淤血、出血斑，半天內(nèi)皮膚變紫而死亡。組織學(xué)檢查，可見死胎或死仔大腦灰質(zhì)、白質(zhì)和軟腦膜有以增生的外膜細(xì)胞、組織細(xì)胞和漿細(xì)胞形成的血管套為特征的腦膜腦炎變化，一般認(rèn)為是豬細(xì)小病毒感染的特征性病變[5]。

3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

根據(jù)流行病學(xué)臨床癥狀和病理變化可做出初步診斷，確診需進(jìn)一步做實(shí)驗(yàn)室診斷。

3.1 細(xì)菌培養(yǎng)

無菌采集病死豬的淋巴結(jié)、肺、肝、脾等病料，將病料接種于麥康凱血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板及肉湯培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)48 h，未見致病菌生長。

3.2 病原分離

取流產(chǎn)胎兒、死亡仔豬的腦、肺臟、腎等病料經(jīng)研磨、稀釋、過濾處理后接種PK-15細(xì)胞系或者ST細(xì)胞系，然后再37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)，進(jìn)行病毒分離。

3.3 病原鑒定

3.3.1 PPV熒光抗體染色 通過免疫熒光技術(shù)觀察胎兒組織的病毒抗原是診斷PPV的最好方法[6]。該方法可直接鏡檢組織冰凍切片。取疑似病豬的扁桃體或者母豬產(chǎn)出的死胎、木乃伊胎，然后將各種組織做冰凍切片，用熒光抗體診斷液染色待檢PPV標(biāo)本片，將染色標(biāo)本片置濕盒中，放入37℃培養(yǎng)箱作用30 min。取出用PBS液（pH 7.2～7.6）沖洗和漂洗15 min（中間換液1次），再用去離子水沖洗除鹽，放置標(biāo)本片讓其自然干燥，然后滴加磷酸甘油，蓋上潔凈的蓋玻片，放于熒光顯微鏡下觀察。若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有亮綠色熒光顆粒集結(jié)，而對照無現(xiàn)象，則可判定有 PPV 抗原。

3.3.2 PPV酶標(biāo)抗體直接染色法 在普通生物顯微鏡下觀察染色情況，若未接種PPV的正常對照細(xì)胞片中細(xì)胞核無棕色著染現(xiàn)象，而接種的PPV的細(xì)胞片中細(xì)胞核著染，即可確診。

3.2.3 普通RT-PCR方法檢測 根據(jù)PPV的基因序列，設(shè)計(jì)、合成特異性引物，采用普通RT-PCR方法檢測死亡胎兒、仔豬相關(guān)組織病料內(nèi)的PPV，若顯示陽性即說明感染該病毒。

3.3.4 血凝試驗(yàn)（HA） 在96微孔板中進(jìn)行，自左至右每孔中預(yù)先加入50 μL生理鹽水（或者PBS溶液），然后取病毒原液或者收獲液（將出現(xiàn)病變的細(xì)胞培養(yǎng)物反復(fù)凍融3次，2 000 r/min離心10 min，除去細(xì)胞碎片，收獲病毒液）。自左至右按1∶2、1∶4、1∶2n作倍比稀釋，每孔加入50μL，最后—孔設(shè)為對照。后每孔再加入50 μL的0.5%豚鼠紅細(xì)胞（或者1%雞紅細(xì)胞），在微型振蕩混合器上振蕩1 min混勻后，置37℃溫箱中作用15～30 min，判定結(jié)果，以50%的紅細(xì)胞能發(fā)生凝集判為終點(diǎn)，樣品出現(xiàn)凝集終點(diǎn)的最高稀釋度定為HA滴度。

3.4 抗體檢測

3.4.1 血凝抑制試驗(yàn)（HI） 取發(fā)病仔豬組織浸出液制備成血凝素，并稀釋成8個(gè)血凝單位。取患病初產(chǎn)母豬血清1 mL，注入試管中，后再向試管中加入8個(gè)凝集單位的血凝集1 mL，搖勻，然后再向試管中加入1%的雞血細(xì)胞，置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中30 min，觀察試管中有無凝集現(xiàn)象。以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的滴度，即血清效價(jià)。凡是被PPV陽性血清抑制血凝者，該病毒即為PPV[7]。

3.4.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 相對于HI是個(gè)更好的選擇。鑒別ELISA還可以區(qū)別PPV感染的動(dòng)物和接種疫苗的動(dòng)物。

4 防制措施

4.1 嚴(yán)防引進(jìn)豬帶毒，發(fā)病豬場做好控制

引入豬的健康問題直接影響豬場的安全。豬場應(yīng)避免從外地購進(jìn)種豬、仔豬，尤其是禁止從疫區(qū)購進(jìn)。規(guī)模化豬場在引進(jìn)種豬、小型養(yǎng)殖場和家庭豬場在引進(jìn)仔豬的時(shí)候，應(yīng)選擇規(guī)范化的、無規(guī)定疫病的豬場，引進(jìn)時(shí)，必須進(jìn)行檢測，確認(rèn)抗體為陰性后方可引入，引回的生豬須在本場的隔離圈舍隔離觀察，觀察期限按照當(dāng)?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督所規(guī)定執(zhí)行，一般為15～30 d。引進(jìn)公豬精液時(shí)，必須進(jìn)行檢查，PPV陰性者方可使用。發(fā)病豬場應(yīng)特別防止小母豬在第1胎受孕時(shí)被感染，或把其配種期拖延到9月齡，因?yàn)榇藭r(shí)母源抗體已消失[8]。

4.2 嚴(yán)格控制豬群，做好隔離和消毒

養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，一旦發(fā)現(xiàn)產(chǎn)死胎和木乃伊胎的母豬，必須做到緊急隔離飼養(yǎng)，母豬、仔豬等帶毒豬在隔離過程中，必須配備專門的飼養(yǎng)員、飼養(yǎng)用具等，并與健康豬群所用器具嚴(yán)格分開，避免交叉感染。一旦發(fā)病，對豬舍徹底清洗消毒，乙醛消毒劑、高濃度的次氯酸鈉（2 500 μg/L）或者7.5%過氧化鈉溶液能達(dá)到理想的消毒效果。同時(shí)，做好滅蚊、滅鼠工作，避免蚊子等吸血昆蟲的叮咬和疫病傳播。對那些流產(chǎn)或產(chǎn)木乃伊胎同群的幸存仔豬不能留作種用，同樣第1胎發(fā)病母豬的后代也不留作種用。對死亡豬、胎兒及病豬的糞便、污物、飼料等進(jìn)行無害化處理，并加強(qiáng)消毒和定期監(jiān)測[9]。

4.3 規(guī)模豬場應(yīng)嚴(yán)格按照免疫程序做好豬細(xì)小病毒的免疫接種工作

選用通過國家GMP體系認(rèn)證的廠家生產(chǎn)的安全、高效、優(yōu)質(zhì)的疫苗，根據(jù)豬場的具體情況做好免疫。推薦免疫程序?yàn)椋盒律胸iPPV疫苗的免疫接種可以選擇在20周齡左右進(jìn)行，后備種豬要在配種前20 d以前接種，經(jīng)產(chǎn)母豬應(yīng)在產(chǎn)后15 d進(jìn)行，每年接種2次，連續(xù)3年即可；種公豬每年春秋兩季分別進(jìn)行；對于曾發(fā)生過PPV病的豬，大多數(shù)豬感染后獲得免疫力，體內(nèi)已產(chǎn)生持續(xù)時(shí)間長、滴度較高的抗體，可以獲得良好的保護(hù)，這些豬不需再接種[10]。

4.4 定期進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測

頻率一般是每半年進(jìn)行1次，按飼養(yǎng)數(shù)量15%隨機(jī)抽樣豬只，采血后進(jìn)行抗體檢測，以達(dá)到掌握豬群免疫水平和免疫效果的目的，根據(jù)檢查結(jié)果，對抗體保護(hù)率不到70%的豬只及時(shí)接種，堅(jiān)決淘汰免疫耐受豬；小型豬場和家庭豬場為確保豬只健康，也必須堅(jiān)持抗體檢測，特別是在懷疑發(fā)病的時(shí)候。

實(shí)踐證明，豬細(xì)小病毒病發(fā)病過程中往往引起其他疾病的繼發(fā)感染，從而使疾病的診斷、治療變得非常復(fù)雜，這也是目前養(yǎng)豬生產(chǎn)中豬病難以診斷和防治的根本原因所在。在養(yǎng)豬生產(chǎn)過程中，應(yīng)該認(rèn)真貫徹落實(shí)預(yù)防保健綜合措施，從根本上減少畜禽疾病的發(fā)生，提高養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。

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