張 莉 張九紅 陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)

復(fù)方菟絲子膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張 莉 張九紅 陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)

目的:建立復(fù)方菟絲子膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用薄層色譜法(TLC)對主要藥材進行鑒別；采用超高效液相色譜法(UPLC)測定君藥菟絲子中金絲桃苷的含量。結(jié)果：金絲桃苷的含量在0.002112～0.02112μg范圍內(nèi)，峰面積值與進樣量呈良好線性關(guān)系。平均加樣回收率為102.11%，RSD為 1.48%。結(jié)論:定性定量方法簡便、準(zhǔn)確，準(zhǔn)屬性強，重現(xiàn)性好，能有效控制該制劑的質(zhì)量。

復(fù)方菟絲子膠囊由菟絲子、人參、黃芪、當(dāng)歸、川芎等十味藥物組成，該藥具有健脾補腎、益氣養(yǎng)血之功，應(yīng)用于脾腎兩虛、氣血不足，癥見面色萎黃、倦怠乏力、腰膝酸軟、頭暈心悸等病癥。本實驗采用薄層色譜法對復(fù)方菟絲子膠囊的質(zhì)量進行質(zhì)量控制性探究，對處方中人參、黃芪、當(dāng)歸、川芎進行TLC方法的檢測；對菟絲子中的金絲桃苷則利用高效液相色譜進行含量測定，并對其方法學(xué)進行考察，旨在為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供客觀的定性定量評價方法。

1 儀器與試藥 1.1儀 器 沃特斯UPLC H-CLSS型超高效液相色譜儀，PDA紫外可見檢測器，Empower化學(xué)工作站，B1210E-MT 超聲儀(美國BRASON ULTRASONICS公司)、電子天平(METTLER TOLE DO New classic MF型)、WS70-1型紅外快速干燥箱、FW135型粉碎機、四孔水浴鍋。

1.2 試藥對照品 金絲桃苷(批號：100736-201337)、當(dāng)歸(批號：120927-200613)、人參(批號：121045-200604)、川芎(批號：120918-200809)、黃芪(批號：120974-200609)均購自中國藥品生物制品檢定所。樣品自制批號分別為140301、140302、140303。水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 TLC鑒別 人參：取10g作為供試品，取人參對照藥材1g，取人參陰性樣品10g，按參考文獻1中方法制備與顯色[1]。黃芪鑒別：取本品5g，黃芪對照藥材1g，黃芪陰性樣品10g，按2.1法制備。當(dāng)歸和川芎的鑒別：按參考文獻2中方法制備[2]。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無相同顏色的斑點出現(xiàn)。說明本法專屬性較好，收入標(biāo)準(zhǔn)。

2.2含量測定色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm，1.7μm)；流動相: 乙腈-0.1%磷酸(13:87)；檢測波長：360nm；進樣量：1μL；流速：0.3mL。理論塔板數(shù)按金絲桃苷計應(yīng)不低于5000[3,4]。

制備溶液：對照品的制備：精密稱取一定量的金絲桃苷對照品，添加一定比例的甲醇制成10.56μg/mL濃度的對照品溶液。供試品溶液：取金絲桃苷4粒(約1.0g)，研細(xì)后防置于錐形瓶中，加入80%甲醇25mL，制成的溶液加塞密封，以33 kHz，250 W的超聲儀器處理1h，放冷，再次稱量，不足者加80%甲醇補足，搖勻。通過0.22μm微孔濾膜對供試品進行濾過，即得所需溶液。菟絲子空白溶液：稱取菟絲子空白樣品1.0g，同供試品溶液制備方法制備，即得。

關(guān)于適用性與專屬性的系統(tǒng)試驗：將上述所得液體各取1.0μL，分別進樣，在已經(jīng)測定的色譜條件下進行標(biāo)記。通過標(biāo)記發(fā)現(xiàn)，當(dāng)供試品與對照品溶液主峰相同時，色譜峰會出現(xiàn)近似的顯現(xiàn)，陰性對照無吸收，對測定結(jié)果無干擾。

2.3 結(jié) 果 線性范圍的考察精密吸取上述對照品溶液(10.56μg/mL)，在液相色譜儀中分別加入0.2μL、0.4μL、0.8μL、1.2μL、1.6μL、2μL的液體，根據(jù)峰面積對進樣量進行回歸計算，得回歸方程y=9e+0.6x-724.17，R2=1。金絲桃苷含量在0.002112～0.02112μg范圍內(nèi)，說明進樣量與峰面積值具有良好的線性關(guān)系。精密度試驗：嚴(yán)格吸取1.0μL對照品溶液，反復(fù)進樣6次，測定，結(jié)果RSD(%)=0.32，結(jié)果表明，精密度良好。重現(xiàn)性試驗取同一批號樣品6份，按照2.2項下的方法，制成供試品液，各精密吸取量1.0μL，注入液相色譜儀，測定金絲桃苷含量，結(jié)果顯示RSD(%)=0.75，表明本方法重現(xiàn)性好。穩(wěn)定性試驗精密稱取樣品約1g，按2.2項下方法制備供試品溶液，室溫放置，分別在0h、2h、4h、6h、8h、10h各進樣1 次，測定，結(jié)果RSD(%)=0.84，表明本品在10h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率試驗稱取已知含量(0.0858mg/g)的樣品共六份，每份約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入濃度為10.56 ug/ml對照品溶液5ml，按供試品溶液制備方法制成加樣回收樣品，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 金絲桃苷回收情況

取三個批次的樣品(140301、140302、140303)，結(jié)果測定三批樣品的含量分別為0.085mg/g、0.078mg/g、0.081 mg/g。

3 討 論 復(fù)方菟絲子膠囊為口服制劑，具有健脾補腎、益氣養(yǎng)血之功，因此對方中的人參、黃芪、當(dāng)歸、川芎等主要藥物進行鑒別研究，對菟絲子中的金絲桃苷進行了含量測定的方法學(xué)研究，可以控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。參照文獻對本品中的淫羊藿和女貞子進行薄層鑒別，但結(jié)果顯示分離效果不太好，斑點不清晰，因此該兩種藥材暫不納入標(biāo)準(zhǔn)。本制劑中川芎和當(dāng)歸同為傘形科植物，所含化學(xué)成分相似，故對方中當(dāng)歸或川芎進行專屬鑒別難度較大，因此選擇兩者共有成分鑒別當(dāng)歸和川芎。由于不同批次樣品不一樣，因此含有金絲桃苷含量有所差異，根據(jù)實驗結(jié)果，以每克菟絲子含金絲桃苷(C21H20O12)不少于0.065mg為宜。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:8，283.

[2] 楊 麗，胡昌江，周 維，等．川芎配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國藥業(yè)，2012，21(10) :28-29．

[3] 李秋紅，王曉蕾，李延利，等.HPLC測定菟絲子炮制前后金絲桃苷和槲皮素的含量[J].中成藥，2009，31(9)：1394.

[4] 趙 華, 李新莉, 王秦勇.正交設(shè)計優(yōu)選鹽炙菟絲子最佳炮制工藝研究[J] .陜西中醫(yī)，2012, 33(9) :12-18.

(收稿2014-09-03；修回2014-10-15)

薄層色譜法 高效液相色譜法 @復(fù)方菟絲子膠囊

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A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.02.050