王雅靜　王欣放

[摘要] 目的 建立RP-HPLC法測定復(fù)方甘草酸單銨注射液中甘草酸單銨含量的方法。 方法 色譜柱：Waters C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（35∶65），用H3PO4調(diào)pH值為3.0；柱溫：25 ℃；流速：1.0 ml/min；檢測波長：252 nm；進(jìn)樣體積：20 μl。 結(jié)果 甘草酸單銨線性范圍：0.16048～3.2096 μg（r=0.9999，n=5）；甘草酸單銨加樣回收率平均值為99.4%（RSD=0.72%，n=9）。 結(jié)論 該方法靈敏、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方甘草酸單銨注射液中甘草酸單銨的含量測定。

[關(guān)鍵詞] RP-HPLC；復(fù)方甘草酸單銨注射液；含量測定

[中圖分類號] R961 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）02（b）-0009-03

Determination of ammonium glycyrrhetate in compound ammonium glycyrrhetate injection by RP-HPLC

WANG Ya-jing WANG Xin-fang

Institute for Food and Drug Safety Supervision of Chaoyang City in Liaoning Province，Chaoyang 122000，China

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of ammonium glycyrrhetate in compound ammonium glycyrrhetate injection by RP-HPLC. Methods The determination was performed on a Waters C18 column（5 μm，4.6 mm×150 mm）with the mobile phase consisted acetonitrile：water（35∶65，adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid）.The column temperature was 25 ℃.The flow rate was 1.0 ml/min.The detective wavelength was 252 nm.The injection volume was 20 μl. Results The liner range of ammonium glycyrrhetate was 0.16048-3.2096 μg（r=0.9999，n=5）.The average recovery was 99.4%（RSD=0.72%，n=9）for the added amount of ammonium glycyrrhetate. Conclusion This method is sensitive，specific，accurate and reproducible.It can be used for determination of ammonium glycyrrhetate in compound ammonium glycyrrhetate injection.

[Key words] RP-HPLC；Compound ammonium glycyrrhetate injection；Content determination

復(fù)方甘草酸單銨注射液為甘草酸單銨、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸的滅菌水溶液，適用于急、慢性肝炎引起的肝功能異常；對中毒性肝炎有一定的輔助治療作用；亦可用于食物中毒、藥物中毒、藥物過敏等[1]，其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-（HD-0347）-2002，采用紫外分光光度法（吸收系數(shù)法）測定甘草酸單銨的含量[2]，專屬性不強(qiáng)，本文建立了反相高效液相色譜法[3-18]測定復(fù)方甘草酸單銨注射液中甘草酸單銨的含量，方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于復(fù)方甘草酸單銨注射液中甘草酸單銨的含量測定。

1 儀器與試劑

Waters e2695-2489型高效液相色譜儀；甘草酸單銨對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：Y0000433；復(fù)方甘草酸單銨注射液（江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號：20140217、20140321、20131203）；乙腈：色譜純；磷酸：分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性

色譜柱：Waters C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（35∶65），用H3PO4調(diào)pH值為3.0；柱溫：25 ℃；流速：1.0 ml/min；檢測波長：252 nm；進(jìn)樣體積：20 μl。在此色譜條件下，理論塔板數(shù)以甘草酸單銨峰計(jì)：4500；拖尾因子：1.01；甘草酸單銨與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均符合要求。

2.2 制備溶液

精稱甘草酸單銨對照品40.12 mg，加水溶解并稀釋至50 ml，搖勻，作為對照品儲(chǔ)備液；精取對照品儲(chǔ)備液5 ml，加水稀釋至50 ml，搖勻，作為對照品溶液；取供試品，制備40 μg/ml供試品溶液。

2.3 專屬性

取復(fù)方甘草酸單銨注射液適量（約相當(dāng)于甘草酸單銨4 mg），分別經(jīng)1.0 mol/L鹽酸、1.0 mol/L氫氧化鈉、強(qiáng)熱（160 ℃，1 h）、氧化（30%過氧化氫）得各破壞產(chǎn)物，制備溶液，進(jìn)樣，由色譜圖得知甘草酸單銨與各降解產(chǎn)物分離良好，專屬性強(qiáng)（圖1）。

時(shí)間（min）

A

時(shí)間（min）

B

時(shí)間（min）

C

時(shí)間（min）

D

圖1 專屬性色譜圖

A.酸破壞；B.堿破壞；C.熱破壞；D.氧化破壞

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精取對照品儲(chǔ)備液1、2、5、10、20 ml，分別加水稀釋至置50 ml，搖勻，進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，作回歸曲線：Y=13423.19X-7067.18，r=0.9999（n=5），表明甘草酸單銨在0.16048～3.2096 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系。

2.5 精密度

精取對照品溶液20 μl進(jìn)樣，測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積的RSD=0.76%，說明儀器精密度符合要求。

2.6 穩(wěn)定性

取同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h測定峰面積，RSD=0.65%（n=5），說明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性

取同一樣品（批號：20140217），制備供試品溶液5份，測定含量，平均值=98.0%，RSD=0.78%，說明重現(xiàn)性符合要求。

2.8 加樣回收率

精取樣品（批號：20140217，含量98.9%）適量各9份，每三份一組，每組精密加入對照品貯備液3、5、7 ml，制備低、中、高（80%、100%、120%）3個(gè)濃度的溶液，測定加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果（n=9）

2.9 樣品含量測定

取對照品溶液及供試品溶液，依法測定，按外標(biāo)法計(jì)算，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

檢測波長的選擇：以流動(dòng)相為溶劑，用島津UV-2550紫外分光光度計(jì)測定，甘草酸單銨在252 nm波長處有最大吸收，故選定在此波長處測定含量，方法靈敏。

流動(dòng)相的確定：本法流動(dòng)相是乙腈-水（35∶65），用H3PO4調(diào)pH值為3.0，不含緩沖鹽，對色譜系統(tǒng)的損害程度較小，且峰型對稱（拖尾因子為1.01）。流動(dòng)相的選擇符合《中國藥典》2010年版二部附錄新增要求盡可能少用含有緩沖液流動(dòng)相的原則。

本法具有較寬的線性范圍和較高的回收率，結(jié)果簡便、可靠準(zhǔn)確。

通過專屬性實(shí)驗(yàn)可以得出，甘草酸單銨主峰能與各種條件破壞后的降解產(chǎn)物峰良好分離，專屬性強(qiáng)，可以作為復(fù)方甘草酸單銨注射液含量測定的方法。

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（收稿日期：2014-11-04 本文編輯：李亞聰）