楊 霞， 王 笑，， 管榮展， 李永豐， 董明超，， 張自常

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，江蘇 南京 210014;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，江蘇 南京 210095)

谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)是一類由超基因家族編碼的古老的多功能酶類，以同源或異源二聚體形式的可溶性蛋白廣泛存在于微生物和動(dòng)植物中。目前GST至少分為13個(gè)種類，在植物中僅發(fā)現(xiàn)7種，即phi(F)、tau(U)、theta(T)、lambda(L)、zeta(Z)、谷胱甘肽依賴的抗壞血酸還原酶(DHAR)和四氯代氫琨脫鹵素酶(TCHQD)［1］。除theta和zeta在動(dòng)物中存在外，其他GST家族為植物中所特有。phi類和tau類是種類最多、含量最為豐富的植物GST基因，利用G位點(diǎn)含有保守的絲氨酸殘基將還原型谷胱甘肽與外源親電子物質(zhì)相結(jié)合，進(jìn)行催化作用，從而達(dá)到解毒作用［2-3］;lambda類與植物耐藥性相關(guān)，如水稻中的OsGSTL1和OsGSTL2［4-5］;zeta類在酪氨酸催化機(jī)制中起功能;theta類在解毒氧化脂類中起作用［6］。植物體中GST除對(duì)包括除草劑在內(nèi)的異源物質(zhì)具有解毒功能外［7-9］，還發(fā)現(xiàn)其在抗氧化脅迫、抗逆反應(yīng)、抗病、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、跨膜運(yùn)輸定位等方面也有重要作用［10-13］。

稗草(Echinochloa crus-galli)是全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的重要惡性雜草之一，同時(shí)也是中國(guó)稻田惡性雜草之首，嚴(yán)重影響水稻的生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量［14-15］。使用除草劑防控雜草是廣大農(nóng)戶最簡(jiǎn)單、有效的措施，但是由于長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)使用單一作用機(jī)理的除草劑，加速了農(nóng)田雜草產(chǎn)生抗藥性，目前已報(bào)道了中國(guó)稻田稗草對(duì)禾草丹、丁草胺、精喹禾靈、精惡唑禾草靈及二氯喹啉酸等除草劑產(chǎn)生了抗藥性［16-17］。前期研究中，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所草害與農(nóng)藥研究室已篩選獲得具有兼抗二氯喹啉酸、五氟磺草胺和雙草醚等多種除草劑的多抗性稗草［18-19］。本研究擬從多抗性稗草中克隆抗性基因，通過(guò)原核表達(dá)、熒光定量PCR和酶比活力測(cè)定等方法進(jìn)行功能分析，研究稗草的抗藥性機(jī)制和GST解毒機(jī)理，為改良作物抗逆性、開(kāi)發(fā)新型除草劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料與供試藥劑

供試材料:多抗性和敏感性稗草(Echinochloa crus-galli)種子均于2010年7月采集于安徽省廬江縣稻田。

供試藥劑:50%二氯喹啉酸可濕性粉劑(Quinclorac，浙江新安化工集團(tuán)股份有限公司產(chǎn)品)，2.5%五氟磺草胺油懸浮劑(Penoxsulam，商品名為稻杰，美國(guó)陶氏益農(nóng)公司產(chǎn)品)和20%雙草醚可濕性粉劑(Bispyribac-sodium，江蘇省激素研究所有限公司產(chǎn)品)。

1.2 稗草總RNA的提取及cDNA的合成

在裝有土的塑料盆缽中分別播種多抗性和敏感性稗草種子，置于人工氣候箱(光照16 h/黑暗8 h、白天30℃/夜間25℃)中培養(yǎng)。待稗草苗長(zhǎng)至2～ 3葉期時(shí)，分別收獲多抗性和敏感性的稗草葉片進(jìn)行總RNA提取，提取方法參照RNA提取試劑盒(原平皓生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品)說(shuō)明書進(jìn)行。以1 μg RNA為模板，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(GBT公司產(chǎn)品)進(jìn)行稗草cDNA第一鏈的合成，反應(yīng)條件為25℃10 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min。

1.3 EcGST基因的克隆及生物信息學(xué)分析

根據(jù)前期稗草轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)中得到的GST基因序列為探針，登陸NCBI網(wǎng)站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)進(jìn)行Blastn搜索，分析其他物種已知GST同源基因序列，設(shè)計(jì)基因克隆的引物。擴(kuò)增EcGSTF1基因的正向引物5′-GAAGAGAGATCATGGCTCCGAT-3′和反向引物5′-CCACTTCAAGCAGATGGCTTC-3′;擴(kuò)增EcGSTZ1基因的正向引物5′-CACCTGACCTACTGCTGCATCT-3′和反向引物5′-GATGGCTCGGTAATCTTGATTC-3′。分別以多抗性和敏感性稗草cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，50 μl反應(yīng)體系中包括:cDNA 1 μl，5×PrimeSTAR Buffer(Mg2+) 10 μl，dNTP mixture(10 mmol/L)4 μl，PrimeSTAR HS DNA polymerase 1 μl，正、反向引物(10 μmol/L)各2 μl，ddH2O 30 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性3 min;95℃變性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，33個(gè)循環(huán)。將PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳后用膠回收試劑盒(BIOMIGA公司產(chǎn)品)進(jìn)行回收純化。然后將PCR純化產(chǎn)物進(jìn)行3′端加polyA尾，70 μl反應(yīng)體系為:10×Buffer(Mg2+)7 μl，Taq酶4 μl，dNTP(10 mmol/L)7 μl，PCR純化產(chǎn)物和ddH2O 52 μl。72℃延伸30 min后于冰上冷卻，反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行膠回收純化。將純化好的已加polyA尾的片段連接至pMD-18T載體(TaKaRa公司產(chǎn)品)，篩選陽(yáng)性單克隆送英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司進(jìn)行測(cè)序。采用BioXM 2.6軟件對(duì)測(cè)序得到的基因序列進(jìn)行開(kāi)放閱讀框(ORF)分析，翻譯得到相應(yīng)的氨基酸序列，以其氨基酸序列為探針，在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行BLASTP搜索，獲得其他物種的同源蛋白質(zhì)氨基酸序列，利用 MEGA5.05程序的 Neighbourjoining(NJ)模型對(duì)這些GST家族成員進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)分析。

1.4 載體構(gòu)建及其原核表達(dá)

采用BioXM 2.6軟件對(duì)EcGSTZ1和EcGSTF1的ORF序列進(jìn)行酶切位點(diǎn)分析，結(jié)合原核表達(dá)載體pET-28b多克隆位點(diǎn)限制性內(nèi)切酶類型，設(shè)計(jì)基因C端和N端分別含NdeⅠ和XhoⅠ酶切位點(diǎn)。其中EcGSTZ1基因的載體構(gòu)建引物為EcGSTZ1-Nde-F: 5′-GGTATATACATATGGCGACGGCGAAACC-3′(劃線處為Nde I位點(diǎn))，EcGSTZ1-Xho-R:5′-GGCTCTCACTCGAGTCATTATGATGGTGCATCTGG-3′(劃線處為XhoⅠ位點(diǎn));EcGSTF1基因的載體構(gòu)建引物為EcGSTF1-Nde-F:5′-GGTATATACATATGGCTCCGATGAAGCTGTAC-3′(劃線處為Nde I位點(diǎn))，EcGSTF1-Xho-R:5′-GGCTCTCACTCGAGTTATCAAGCAGATGGCTTCATCAG-3′(劃線處為XhoⅠ位點(diǎn))。EcGSTZ1基因以EcGSTZ1-Nde-F和EcGSTZ1-Xho-R為兩端引物，EcGSTF1以EcGSTF1-Nde-F和EcGSTF1-Xho-R為兩端引物，分別擴(kuò)增EcGSTZ1和EcGSTF1的ORF序列。用NdeⅠ和XhoⅠ酶雙酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，同時(shí)用相同的酶雙酶切含有HIS標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pET-28b，分別回收基因片段和線性載體，經(jīng)T4-DNA連接酶(TaKaRa公司產(chǎn)品)16℃連接過(guò)夜后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，在含有卡那霉素(Km+)的LB固體培養(yǎng)基上37℃過(guò)夜培養(yǎng)。經(jīng)PCR和雙酶切鑒定出陽(yáng)性單克隆后進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

將測(cè)序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株BL21接種到含Km+的LB固體培養(yǎng)基上37℃過(guò)夜培養(yǎng)后，挑取單菌落接種到10 ml含Km+(50 mg/ L)的LB液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。按1∶100的比例接種至新鮮的含Km+的LB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至OD600約0.6時(shí)，加入IPTG至終濃度為0.4 mmol/L，37℃誘導(dǎo)0 h、1 h、2 h、3 h、4 h和5 h，并依次取樣。4 000 g離心收集菌體，用緩沖液(20 mmol/L Tris-HCl、200 mmol/L NaCl、1 mmol/L EDTA)懸浮后，13 000 g離心10 min后，取上清液分別加入5×SDS上樣緩沖液，進(jìn)行12%SDS-PAGE蛋白質(zhì)表達(dá)檢測(cè)。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

取3葉期多抗性和敏感性稗草噴施50%二氯喹啉酸可濕性粉劑(制劑用藥量為450 g/hm2)、2.5%五氟磺草胺懸浮劑(制劑用藥量為1 200 ml/ hm2)和20%雙草醚可濕性粉劑(制劑用藥量為200 g/hm2)，并設(shè)噴施清水為空白對(duì)照。藥劑噴施處理24 h后收獲植株，提取RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，設(shè)β-actin基因?yàn)閮?nèi)參，內(nèi)參的特異性引物為5′-CACACTGGTGTCATGGTAGG-3′和5′-AGAAAGTGTGATGCCAGAT-3′。目標(biāo)基因EcGSTZ1的特異性引物為:5′-AGGCTATGCCGTTATTGGTT-3′ 和 5′-TTGATGGCTCGGTAATCTTG-3′;目標(biāo)基因EcGSTF1的特異性引物為:5′-TTCCAGTGCCTCATCAGTCC-3′和5′-CCATCCGCATTAGGAAAACC-3′。實(shí)時(shí)定量PCR在ABI-Stepone plus實(shí)時(shí)定量PCR儀上進(jìn)行，反應(yīng)體系及程序參照TaKaRa SYBR Premix EX TaqTMⅡ說(shuō)明書操作。3次重復(fù)，對(duì)EcGST基因在施藥前敏感性稗草(SC)、施藥處理后敏感性稗草(ST)、施藥前多抗性稗草(RC)和施藥處理后多抗性稗草(RT)進(jìn)行熒光定量PCR，利用2-ΔΔCT方法對(duì)不同抗性稗草施藥前后EcGST基因的相對(duì)定量進(jìn)行計(jì)算［20］。以SC為對(duì)照，其EcGST基因的表達(dá)量定義為1個(gè)單位，對(duì)其他基因的表達(dá)量進(jìn)行定量分析。

1.6 GST酶比活力測(cè)定

多抗性和敏感性稗草2～3葉期，同時(shí)以50%二氯喹啉酸可濕性粉劑(制劑用藥量為450 g/ hm2)、2.5%五氟磺草胺懸浮劑(制劑用藥量為1 200 ml/hm2)和20%雙草醚可濕性粉劑(制劑用藥量為200 g/hm2)進(jìn)行噴施處理，收獲處理第0 d、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d的葉片于-80℃保存，每次處理重復(fù)3次。參照Pamela等的方法提取酶液［21］，參照Gerard等方法測(cè)定酶活力［22］，參照Bradford考馬斯亮藍(lán)G-250方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量［23］。酶比活力［nmol/(min·mg)］=酶活性單位/蛋白質(zhì)含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 EcGST基因的克隆與序列分析

以稗草cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，EcGSTZ1基因擴(kuò)增大小為750 bp左右，EcGSTF1基因擴(kuò)增大小為650 bp左右(圖1)。將回收純化后的PCR產(chǎn)物連接至pMD-18T載體中進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果分別獲得了EcGSTZ1和EcGSTF1基因擴(kuò)增的全長(zhǎng)序列及其對(duì)應(yīng)編碼的氨基酸序列(圖2和圖3)。EcGSTZ1的核苷酸序列長(zhǎng)度為747 bp，在第86個(gè)核苷酸處有起始密碼子ATG，在725個(gè)核苷酸處有終止密碼子TGA，其編碼區(qū)為639 bp，編碼212個(gè)氨基酸殘基;EcGSTF1的核苷酸序列長(zhǎng)度為661 bp，在第12個(gè)核苷酸處有起始密碼子ATG，在654個(gè)核苷酸苷酸處有終止密碼子TGA，其編碼區(qū)為645 bp，編碼214個(gè)氨基酸殘基。將EcGSTZ1和EcGSTF1基因登陸至 NCBI網(wǎng)站，GenBank登錄號(hào)分別為: JX122857和JX122858。同時(shí)，以敏感性稗草cDNA為模板，PCR擴(kuò)增出的EcGSTZ1和EcGSTF1基因的序列與從多抗性稗草中PCR擴(kuò)增出的序列完全一致。

圖1 EcGSTZ1和EcGSTF1基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 Electrophoresis of EcGST genes amplified by PCR

2.2 EcGST基因的生物信息學(xué)分析

將EcGST氨基酸序列通過(guò)NCBI的PSI-BLAST搜索，對(duì)其進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域分析，EcGSTZ1屬于zeta類GST;EcGSTF1屬于phi類GST。這兩類EcGST均有2個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域，N端為類似硫氧還蛋白超家族結(jié)構(gòu)域，C端為GST超家族結(jié)構(gòu)域。

選取單子葉植物高粱(Sorghum bicolor)、玉米(Zeamays)、二穗短柄草 (Brachypodiumdistachyon)、粳稻(Oryza sativa Japonica Group)，雙子葉植物油桃(Prunus persica)、毛果楊(Populus trichocarpa)、大豆(Glycine max)和昆蟲(chóng)綱柑桔全爪螨(Panonychus citri)、帝王蝶(Danaus plexippus)的GST家族成員與稗草中的EcGSTZ1和EcGSTF1進(jìn)行多重序列比較，并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果顯示，GST家族歸為兩類，即phi類GST和zeta類GST。EcGST和單子葉植物的高粱、玉米、二穗短柄草和粳稻的GST聚為一枝，親緣關(guān)系較近;雙子葉植物油桃的GST和毛果楊的GST聚為一枝，親緣關(guān)系較近;昆蟲(chóng)綱的帝王蝶的GST和柑橘全爪螨的GST聚為一枝(圖4)。

2.3 EcGST的原核表達(dá)分析

將EcESTZ1和EcGSTF1的ORF序列插入至含HIS標(biāo)簽的pET28b載體中，對(duì)重組質(zhì)粒HIS::EcGSTs進(jìn)行雙酶切和測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果顯示EcGST基因序列無(wú)缺失和突變，表明HIS::EcGST載體構(gòu)建成功。

圖2 EcGSTZ1基因的核苷酸序列及其所編碼的氨基酸序列Fig.2 Nucleotide and putative amino acid sequence of EcGSTZ1

以空載體 pET28b為陰性對(duì)照，0.4 mmol/L IPTG誘導(dǎo)HIS::EcGST的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)12%SDSPAGE電泳分析結(jié)果顯示，蛋白質(zhì)大小約26 000左右，與預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)分子量接近，表明HIS::EcGST經(jīng) IPTG誘導(dǎo)后能夠在大腸桿菌BL21中成功表達(dá)(圖5)。

圖3 EcGSTF1基因的核苷酸序列及其所編碼的氨基酸序列Fig.3 Nucleotide and putative amino acid sequence of EcGSTF1

圖4 鄰接法構(gòu)建的GST家族成員的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.4 Phylogenetic trees constructed by neighbor-joining based on GST family from various plant species

2.4 EcGST基因的實(shí)時(shí)熒光定量分析

實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析結(jié)果顯示，EcGSTZ1和EcGSTF1基因在多抗性和敏感性稗草中均有表達(dá)，且在處理前的稗草中表達(dá)量無(wú)顯著性差異。而在噴藥處理后，EcGSTZ1和EcGSTF1基因在多抗性稗草中表達(dá)量均最高，相對(duì)表達(dá)量分別為6.25和8.79，比其在噴藥處理后的敏感性稗草中的表達(dá)量高(圖 6)。

2.5 稗草GST酶比活力

圖7顯示在處理前多抗性稗草的GST酶比活力高于敏感性稗草。多抗性稗草GST酶比活力在藥劑處理第1 d降低到最低值后開(kāi)始持續(xù)上升;敏感性稗草的GST酶比活力在藥劑處理后持續(xù)下降2 d后才開(kāi)始上升，并在處理第5 d達(dá)到最高值后開(kāi)始呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在處理第7 d時(shí)多抗性稗草的GST酶比活力高于敏感性稗草。

圖5 SDS-PAGE電泳分析HIS::EcGSTs的誘導(dǎo)表達(dá)Fig.5 SDS-PAGE analysis of HIS::EcGSTs fusion protein induced with IPTG

圖6 EcGST基因在多抗性和敏感性稗草施藥前后的相對(duì)表達(dá)水平Fig.6 The relative expression level of EcGST before or after herbicide application in herbicide-resistant and susceptible barnyardgrass

3 討論

本研究通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了稗草中GST家族的2個(gè)不同成員，即zeta類EcGSTZ1和phi類EcGSTF1，通過(guò)生物信息學(xué)方法分析了其基因序列。結(jié)果顯示EcGSTF1和EcGSTZ1分別在多抗性和敏感性稗草中堿基序列沒(méi)有差異;原核表達(dá)分析結(jié)果顯示HIS::EcGST融合蛋白質(zhì)的分子量大小約為26 000，與推測(cè)理論值相一致。構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示，phi類GST和zeta類GST分別聚為一大簇，其中稗草GST與禾本科植物高粱、玉米、二穗短柄草和粳稻的GST聚為一大簇，具有較高的同源性，推測(cè)禾本科植物在進(jìn)化上具有相似性，形態(tài)特征與系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系緊密，形態(tài)相同的禾本科植物親緣關(guān)系較近。

圖7 抗性及敏感種群葉片谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶比活力Fig.7 GSTs specific activity in the leaves of resistant and susceptible barnyardgrass

實(shí)時(shí)定量PCR分析結(jié)果顯示，EcGSTZ1和EcGSTF1基因在施藥前的多抗性稗草中的表達(dá)量(1.18和1.73)均高于其在敏感性稗草中的表達(dá)量(1.00和1.00);在施藥后的多抗性稗草中的表達(dá)量(6.25和8.79)均比其在施藥后的敏感性稗草中的表達(dá)量(3.33和6.18)要高，這與稗草GST酶比活力測(cè)定結(jié)果一致，施藥前多抗性稗草的GST酶比活力高于敏感性稗草，施藥7 d后敏感性稗草的GST酶比活力明顯低于多抗性稗草。同時(shí)施藥1 d后GST酶比活力在多抗性和敏感性稗草中先呈下降趨勢(shì)，隨后多抗性稗草首先出現(xiàn)上升趨勢(shì)，雖然敏感性稗草也出現(xiàn)上升趨勢(shì)，但最終仍明顯低于多抗性稗草，這與高效氟吡甲禾靈處理日本看麥娘后GST酶的活性趨勢(shì)［24-25］相一致。而熒光定量PCR結(jié)果顯示施藥1 d后GST酶基因表達(dá)量均得到提高，表明在施藥初期GST酶比活力與酶表達(dá)量并非呈正相關(guān)，從基因激活、轉(zhuǎn)錄到翻譯成蛋白質(zhì)需要一段時(shí)間進(jìn)程，從而導(dǎo)致GST酶比活力存在一定的滯后性。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，無(wú)論施藥前還是施藥后，EcGSTF1在多抗性稗草中的表達(dá)量均比EcGSTZ1要高，推測(cè)phi類GST在催化谷胱甘肽(GSH)與除草劑共軛作用過(guò)程中可能比zeta類更為顯著，有力地支撐了phi類GST的強(qiáng)解毒功能。國(guó)際上已對(duì)phi類GST做了深入的研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)包括除草劑在內(nèi)的外源化學(xué)物質(zhì)有廣泛的解毒能力［26］，因此稗草中的phi類GST可以作為植物抵抗除草劑能力的一個(gè)重要指標(biāo)。zeta類GST酶具有異構(gòu)酶活性，在苯丙氨酸/酪氨酸分解代謝中作為馬來(lái)酰乙酰乙酸異構(gòu)酶(MAAI)將GSH可逆地與馬來(lái)酰乙酰乙酸(MAA)的順式雙鍵結(jié)合，形成延胡索乙酰乙酸(FAA)，是苯丙氨酸/酪氨酸降解代謝的關(guān)鍵步驟?？的塑暗?個(gè)zeta家族啟動(dòng)子上存在乙烯響應(yīng)元件，能被乙烯或逆境誘導(dǎo)表達(dá)，在芳香族氨基酸的分解代謝中起作用［27］。本試驗(yàn)得到的 zeta類GST在除草劑處理后的多抗性和敏感性稗草中表達(dá)量增加，說(shuō)明此類GST產(chǎn)生解毒能力可能與異構(gòu)酶活性有一定的關(guān)系。

GST介導(dǎo)的除草劑代謝解毒功能的研究結(jié)果可應(yīng)用于除草劑安全劑、增效劑的篩選以及抗藥性雜草治理和改良作物抗逆性方面，如精惡唑禾草靈除草劑的安全劑吡唑解草酯和解草唑誘導(dǎo)了鼠尾看麥娘中GSTF1活性，導(dǎo)致GPOX活性加倍，類黃酮保護(hù)類物質(zhì)增加［28］;多抗性鼠尾看麥娘AmGSTF1轉(zhuǎn)基因擬南芥植株表現(xiàn)出了多藥抗性，在次生代謝、外源物質(zhì)代謝和抗氧化代謝方面與多抗性鼠尾看麥娘有著相似之處［29］。因此，擬通過(guò)phi類EcGSTF1和zeta類EcGSTZ1的轉(zhuǎn)基因植株，分析供試除草劑的降解動(dòng)力學(xué)和催化效率，從而深入闡明多抗性稗草的GST介導(dǎo)的除草劑代謝解毒機(jī)制，為改良作物抗逆性及開(kāi)發(fā)新型除草劑提供理論基礎(chǔ)。

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