不結(jié)球白菜提取物對(duì)肉雞免疫及抗氧化功能的影響

馬景蕃， 劉喜明， 吳 程

(1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建 龍巖 364012;2.福建省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)與獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 龍巖 364012;3.龍巖學(xué)院藝術(shù)與設(shè)計(jì)學(xué)院，福建 龍巖 364012)

不結(jié)球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)是長(zhǎng)江中下游地區(qū)主栽蔬菜品種之一，中醫(yī)認(rèn)為不結(jié)球白菜微寒味甘，具有養(yǎng)胃生津、利尿通便、除煩解渴、清熱解毒的功效［1］。國(guó)內(nèi)外學(xué)者已從不結(jié)球白菜中分離到一系列復(fù)雜的化學(xué)成分，其中相當(dāng)一部分具有重要的生理活性［2］。日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，不結(jié)球白菜提取物抗氧化銹蝕的效果很好，其中尤其是未完全成熟，葉形舒展的嫩株提取物抗氧化效果更好［3］。在美國(guó)國(guó)立癌癥研究所發(fā)表的防癌食品排行榜中，不結(jié)球白菜排在大蒜的后面，位列第二［4］。最新的研究還發(fā)現(xiàn)，不結(jié)球白菜提取物能提升血清中雌激素代謝物——2羥雌酮的水平，對(duì)預(yù)防乳腺癌有益處［5］。經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明不結(jié)球白菜具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用。Meyer等［6］報(bào)道，飼糧中添加不結(jié)球白菜提取物可提高小鼠血清抗氧化活性，龍盛京等［7］研究結(jié)果表明不結(jié)球白菜和百里香提取物可以提高雞肉和雞蛋的氧化穩(wěn)定性及更有效地延緩肉仔雞脂質(zhì)氧化。本試驗(yàn)通過在日糧中添加不同比例的不結(jié)球白菜提取物(NCCE)，運(yùn)用現(xiàn)代技術(shù)來研究其對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、屠宰性能、免疫器官指數(shù)、血清免疫指標(biāo)及血清抗氧化水平的影響，旨在探討NCCE對(duì)AA肉雞免疫功能及抗氧化功能的影響，為NCCE添加劑在肉雞生產(chǎn)上應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

同一批出雛，體質(zhì)健壯的1日齡AA肉仔雞240羽，購(gòu)自森寶(龍巖)公司。

不結(jié)球白菜品種蘇州青由龍巖學(xué)院生物技術(shù)課題組提供，定植30 d后進(jìn)行采收，用聚乙烯膜真空包裝后迅速于液氮中冷凍，經(jīng)真空冷凍干燥，粉碎過60目篩。稱取100 g粉末，用75%的乙醇500 ml超聲提取35 min，再進(jìn)行回流提取3 h后抽濾，濾渣重復(fù)以上操作1次，合并2次的濾液。經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，即為不結(jié)球白菜的粗提物。粗提物用蒸餾水溶解，得到水懸液，轉(zhuǎn)入500 ml分液漏斗中，用等體積乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥至恒質(zhì)量，即為不結(jié)球白菜提取物(NCCE)，主要組分為黃酮和多酚類等生物活性物質(zhì)［6］，將其置于4℃冰箱冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組處理與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用雞隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20羽，試驗(yàn)期35 d，4組雞飼養(yǎng)條件一致，均采用地面平養(yǎng)，自由采食及飲水，給24 h光照。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧(玉米-豆粕型)，配制參照NRC 1994《家禽的營(yíng)養(yǎng)需要量》，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組為分別在基礎(chǔ)日糧中添加100 mg/kg、500 mg/kg、900 mg/kg的NCCE。按常規(guī)免疫程序?qū)λ性囼?yàn)雞進(jìn)行免疫接種。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets

1.3 測(cè)定指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.3.1 生產(chǎn)性能的測(cè)定 分別在肉雞21、35日齡時(shí)，將每組肉雞個(gè)體空腹稱質(zhì)量，統(tǒng)計(jì)耗料量，計(jì)算各階段平均日增質(zhì)量及料肉比。

1.3.2 屠宰性能及免疫器官指數(shù)的測(cè)定 肉雞在35日齡時(shí)，每組隨機(jī)選取體質(zhì)量相近的健康雞9羽，早晨空腹12 h，稱質(zhì)量，采用頸外放血致死，分別測(cè)定其屠體質(zhì)量、全凈膛質(zhì)量、腹脂質(zhì)量和屠宰性能［8］，取胸腺、法氏囊及脾臟，剔出脂肪并用濾紙吸干血液后稱質(zhì)量，計(jì)算免疫器官指數(shù)，免疫器官指數(shù)(g/kg)=器官質(zhì)量/體質(zhì)量。

1.3.3 血清抗體和補(bǔ)體C3、C4的測(cè)定 肉雞在35日齡時(shí)，每組隨機(jī)選取體質(zhì)量相近的健康雞9羽，早晨空腹12 h，心臟采血，3 000 r/min離心10 min，取血清采用免疫比濁法測(cè)定抗體IgG、IgM、IgA及補(bǔ)體C3、C4，按試劑盒操作說明進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物有限公司。

1.3.4 血清抗氧化水平的測(cè)定 血清SOD活性采用黃嘌呤氧化物酶法測(cè)定，T-AOC采用比色法測(cè)定，GSH-Px采用二硫代二硝基苯甲酸法測(cè)定，MDA含量采用硫巴比妥酸法(TBA)測(cè)定。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物有限公司。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0軟件One-way ANOVA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并采用LSD法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不結(jié)球白菜提取物(NCCE)對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，在肉雞飼養(yǎng)前期(0～21 d)，各試驗(yàn)組與對(duì)照間的日增質(zhì)量與料肉比差異均不顯著;但在飼養(yǎng)后期(22～35 d)，各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，日增質(zhì)量均有所提高，其中，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組較對(duì)照分別提高了4.92%和7.88%，達(dá)到顯著性差異水平。飼養(yǎng)后期各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，料肉比均有所下降，其中，試驗(yàn)Ⅱ組與對(duì)照相比，料肉比降低了9.92%，達(dá)到顯著性差異水平。

2.2 NCCE對(duì)肉雞屠宰性能的影響

由表3可知，各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，肉雞活質(zhì)量均有所增加，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組較對(duì)照分別增加了3.23%和4.48%，達(dá)到顯著性差異水平;各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，肉雞的屠宰率均有所增加，但增加不顯著;各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，肉雞的全凈膛率均有所增加，其中，試驗(yàn)Ⅲ組比對(duì)照增加了3.59%，達(dá)到顯著性差異水平;各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，肉雞的腹脂率均有所下降，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組較對(duì)照分別下降18.26%、21.58%和23.65%，達(dá)到顯著性差異水平。

表2 NCCE對(duì)肉雞日增質(zhì)量和料肉比的影響Table 2 Effects of NCCE on the growth performance and feed conversion of broilers

表3 NCCE對(duì)肉雞屠宰性能的影響Table 3 Effects of NCCE on slaughter performance of broilers

2.3 NCCE對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組與對(duì)照相比，肉雞的脾臟指數(shù)均有所增加，但增加不顯著;各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，法氏囊指數(shù)均顯著增加;各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，胸腺指數(shù)也有增加趨勢(shì)，其中試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ與對(duì)照相比差異顯著。

2.4 NCCE對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表5可見，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組均能不同程度地提高肉雞血清的免疫水平。其中血清IgG含量分別提高49.9%(P＜0.05)和63.8%(P＜0.05);血清IgM含量分別提高21.0%(P＞0.05)和68.0%(P＜0.05);血清IgA含量分別提高6.4%(P＞0.05)和0.4%(P＞0.05);血清補(bǔ)體C3含量分別提高0.2%(P＞0.05)和38.7%(P＜0.05);試驗(yàn)Ⅰ組血清補(bǔ)體C4含量比對(duì)照提高27.2%(P＜0.05)，但試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組的含量呈下降趨勢(shì);另外，試驗(yàn)Ⅲ組的血清IgG、IgM和補(bǔ)體C3均呈下降趨勢(shì)，但與對(duì)照無顯著性差異。

表4 NCCE對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響Table 4 Effect of NCCE on immune organ index of broilers

2.5 NCCE對(duì)肉雞血清抗氧化水平的影響

由表6可以看出，對(duì)照肉雞血清SOD活性最低，試驗(yàn)Ⅰ組次之，試驗(yàn)Ⅱ組最高，試驗(yàn)Ⅱ組比對(duì)照提高18.4%(P＜0.05)，對(duì)照、試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組的SOD活性無顯著差異;血清T-AOC活性Ⅱ組最高，對(duì)照最低，試驗(yàn)Ⅱ組比對(duì)照提高了21.2%(P＜0.05)，添加NCCE各試驗(yàn)組間差異不顯著(P＞0.05);添加NCCE各試驗(yàn)組血清GSH-Px活性均高于對(duì)照(P＞0.05)，其中試驗(yàn)Ⅱ組最高，比對(duì)照提高2.6%(P＞0.05);各試驗(yàn)組肉雞血清MDA含量均低于對(duì)照，但無顯著差異。

表5 NCCE對(duì)肉雞血清免疫球蛋白及補(bǔ)體C3、C4的影響Table 5 Effects of NCCE on immunoglobulins，complements C3 and C4 in broilers sera

表6 NCCE對(duì)肉雞血清抗氧化水平的影響Table 6 Effects of NCCE on antioxidant levels in broilers sera

3 討論

3.1 NCCE對(duì)肉雞生產(chǎn)性能和屠宰性能的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明添加500 mg/kg的NCCE能顯著提高肉雞后期日增質(zhì)量和飼料轉(zhuǎn)化率，顯著增加肉雞活質(zhì)量，降低肉雞腹脂率。各試驗(yàn)組與對(duì)照相比，肉雞的屠宰率有所增加，全凈膛率有所增加(P＜0.05)?？梢奛CCE對(duì)肉雞的產(chǎn)肉性能具有良好的促進(jìn)作用，其機(jī)制可能與NCCE具有的廣泛生物學(xué)活性有關(guān)，NCCE含有黃酮及多酚類等活性物質(zhì)，Afolabi研究結(jié)果［9］表明，黃酮類物質(zhì)能明顯改變小鼠胃黏膜的損傷，對(duì)其具有保護(hù)作用;Yakubu等研究結(jié)果［10］表明，添加0.08%的十字花科植物西蘭花提取物(主要成分為黃酮及多酚類物質(zhì))對(duì)AA肉雞具有一定的促生長(zhǎng)作用，這與本試驗(yàn)的結(jié)果相類似?？梢娞砑覰CCE后，可能使肉雞的胃黏膜得到了保護(hù)，進(jìn)而提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率和肉雞的生長(zhǎng)速度。

3.2 NCCE對(duì)肉雞免疫指標(biāo)的影響

免疫器官是動(dòng)物有機(jī)體執(zhí)行免疫功能的組織，是淋巴細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞發(fā)生、分化、增殖和產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所［11］。動(dòng)物有機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱與免疫器官的發(fā)育有著密切的關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組與對(duì)照相比能提高免疫器官指數(shù)，這說明NCCE可以有效提高肉雞免疫器官的發(fā)育，從而提高免疫器官指數(shù)，最終使機(jī)體的免疫力提高。Pattanaik等［12］報(bào)道，添加植物黃酮類物質(zhì)，可顯著提高肉雛雞免疫器官指數(shù)。Fasscas等［13］報(bào)道，植物多酚可增加正常小鼠和免疫抑制小鼠的脾臟和胸腺質(zhì)量?？梢?，不結(jié)球白菜活性提取物可以促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，抑制其細(xì)胞凋亡，提高機(jī)體抵抗力。

免疫球蛋白質(zhì)是執(zhí)行體液免疫，具有抗體活性的蛋白質(zhì)，是衡量動(dòng)物有機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)［14］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組肉雞血清中IgG、IgM、IgA及補(bǔ)體C3、C4水平都有一定的提高，Milos等［15］通過研究五味子黃酮對(duì)小鼠免疫生成細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)五味子黃酮可使免疫球蛋白數(shù)量明顯增多;Sato等［16］報(bào)道黨參主要活性成分黨參多酚具有明顯的增強(qiáng)雛雞免疫功能的作用。NCCE可顯著提高肉雞血清中免疫球蛋白含量，從而使機(jī)體免疫力增強(qiáng)。本試驗(yàn)高劑量組(試驗(yàn)Ⅲ組)并未顯示顯著的促進(jìn)作用甚至還有降低的趨勢(shì)，這可能與機(jī)體對(duì)NCCE的適應(yīng)性有關(guān)。

3.3 NCCE對(duì)肉雞血清抗氧化能力的影響

SOD、GSH-Px是防御體系中清除H2O2的主要物質(zhì)［17］，血清中SOD、GSH-Px活力間接反映了動(dòng)物有機(jī)體清除自由基的能力，其活性越高，越有利于動(dòng)物機(jī)體健康［18］。添加NCCE在一定程度上提高了血清中SOD、GSH-Px活力，可能是由于含有黃酮和多酚類等生物活性物質(zhì)阻礙過氧化物的形成［19］。T-AOC可反映血清抗氧化系統(tǒng)功能情況，本試驗(yàn)結(jié)果表明，各試驗(yàn)組血清T-AOC活性均顯著高于對(duì)照，說明添加NCCE能提高肉雞血清的總抗氧化能力。有學(xué)者對(duì)NCCE進(jìn)行體外抗氧化試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其多酚類物質(zhì)有很強(qiáng)的抗氧化作用，而其他次要成分發(fā)揮著重要的協(xié)同作用［20］。MDA含量可反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化的程度即機(jī)體氧化損傷的程度［21］，本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組肉雞血清MDA含量均低于對(duì)照，這可能是NCCE多種抗氧化成分進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)最終在血清中表現(xiàn)出抗氧化活性的結(jié)果。

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