喬廣行　李興紅　周瑩　黃金寶　林秀敏　張瑋

摘要：為明確北京地區(qū)不同科蔬菜菌核病菌對(duì)4種常用殺菌劑（多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲）抗藥性現(xiàn)狀，20—202年在北京郊區(qū)縣蔬菜種植地區(qū)分別采集84個(gè)不同蔬菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）菌株，采用最小濃度抑制法測(cè)定84個(gè)不同蔬菜菌核病菌對(duì)4種殺菌劑的抗藥性。檢測(cè)結(jié)果表明：供試的84個(gè)菌株中，對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲抗藥性菌株比例分別達(dá)到9022%、0000%、3750%和5000%；不同科蔬菜的菌核病菌對(duì)不同藥劑的敏感程度不同。根據(jù)菌株對(duì)4種殺菌劑的抗藥性與敏感性表現(xiàn)分為8種抗性表現(xiàn)型；其中對(duì)多菌靈、乙霉威和異菌脲抗藥三重抗藥性菌株所占比例為3386%，對(duì)多菌靈與乙霉威抗藥二重抗藥性所占比率為275%；4重抗藥性菌株所占比例為587%；對(duì)多菌靈、乙霉威和腐霉利抗藥三重抗藥性菌株所占的比例為27%，其他表現(xiàn)型菌株所占比例均在00%以下。結(jié)果表明，北京地區(qū)蔬菜菌核病菌對(duì)供試的4種殺菌劑均已產(chǎn)生抗藥性，迫切需要選擇新型的殺菌劑或生防制劑防治。

關(guān)鍵詞：北京；蔬菜；菌核病菌；殺菌劑；抗藥性

中圖分類號(hào)： S4363文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：002-302（204）2-055-03

蔬菜菌核病菌[Sclerotinia sclerotiorum （Lib） de Bary]是非常重要的蔬菜土傳真菌病害，寄主范圍廣，可侵染400多種植物，其中包含重要的蔬菜黃瓜、番茄、茄子、辣椒、生菜、萵筍、茴香等[-2]。隨著保護(hù)地蔬菜種植面積的不斷擴(kuò)大，保護(hù)地相對(duì)低溫和高濕的環(huán)境條件下常有發(fā)生，加之保護(hù)地復(fù)種指數(shù)提高，連茬種植，病菌逐年累積，危害也逐年加重。崔文清等2006—2008年對(duì)北京通州地區(qū)蔬菜菌核病發(fā)生進(jìn)行調(diào)查并對(duì)不同類型的蔬菜發(fā)病情況進(jìn)行分析，重病田發(fā)病率20%～30%，據(jù)統(tǒng)計(jì)，菌核病造成的保護(hù)地蔬菜產(chǎn)量損失一般為0%～30%，嚴(yán)重者在80%以上甚至絕收[3]。蔬菜菌核病防控以化學(xué)殺菌劑防治為主，輔以農(nóng)業(yè)措施生態(tài)調(diào)控與生物制劑防治。近年來(lái)我國(guó)菌核病使用化學(xué)殺菌劑防治，防治效果下降，油菜菌核病菌對(duì)多菌靈[4-8]、乙霉威[9]、腐霉利[0-]和異菌脲[2-3]抗藥性研究報(bào)道較多，但未見(jiàn)不同科蔬菜菌核病菌抗藥性比較研究報(bào)道。不同種類蔬菜生長(zhǎng)期種植方式的差異以及生長(zhǎng)期防治菌核病使用殺菌劑的用藥量與用藥次數(shù)不同，使菌核病菌對(duì)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性頻次產(chǎn)生差異。為了進(jìn)一步明確目前北京地區(qū)不同科蔬菜菌核病菌的抗藥性現(xiàn)狀，作者對(duì)北京地區(qū)不同科蔬菜菌核病菌的抗藥性進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，以期為指導(dǎo)不同種類蔬菜菌核病的防治、田間病菌抗藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及綜合治理提供有價(jià)值的理論和實(shí)踐依據(jù)。

材料與方法

供試菌株

200—202年，在北京市主要蔬菜種植地區(qū)隨機(jī)采集不同科蔬菜病株上的菌核病菌。采集病株挑取病株上的菌絲于DA培養(yǎng)基上，23℃培養(yǎng)分離和單菌絲純化后保存。從北京地區(qū)共采集6個(gè)區(qū)縣以葫蘆科、茄科、豆科、十字花科、傘形科與菊科蔬菜上84個(gè)菌核病菌菌株。

2供試藥劑

98%多菌靈（carbendazim）原藥，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司生產(chǎn)，預(yù)溶于0 mol/L鹽酸中；95%乙霉威（diethofencarb）原藥，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司生產(chǎn)，預(yù)溶于甲醇中；96%腐霉利（procymidone）原藥，浙江禾益農(nóng)化有限公司生產(chǎn)，97%異菌脲（iprodione）原藥，江蘇快達(dá)農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)，預(yù)溶于丙酮中。上述4種藥劑分別配成 0 000 μg/mL 母液，母液儲(chǔ)存于4 ℃冰箱內(nèi)。

3試驗(yàn)方法

用最小濃度抑制法（minimum inhibitory concentration，MIC），多菌靈、乙霉威、腐霉利與異菌脲以50 μg/mL設(shè)置為鑒別濃度。將待檢測(cè)的菌核病菌各菌株在DA平皿上培養(yǎng) 3 d 后取直徑為5 mm的菌餅移至各含藥平皿中，在23℃下培養(yǎng)3 d，在含藥平板上不能或幾乎不能在該鑒別濃度上正常生長(zhǎng)的為敏感菌株，能正常生長(zhǎng)的為抗性菌株，同時(shí)觀察菌絲生長(zhǎng)狀況，用十字交叉法量取菌絲的直徑，根據(jù)菌絲生長(zhǎng)情況，鑒別菌株對(duì)藥劑的敏感性。每個(gè)藥劑濃度3個(gè)重復(fù)。統(tǒng)計(jì)各采集地敏感與抗性菌株的發(fā)生頻率。

[Z]抗藥性頻率=抗藥性菌株數(shù)/總測(cè)定菌株數(shù)×00%。

2結(jié)果與分析

2不同科蔬菜菌核病菌抗性頻率分布

20—202年從北京7個(gè)科蔬菜的菌核病菌84個(gè)菌株，[2]采用最小濃度抑制法（MIC）檢測(cè)這些菌株對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲的抗藥性。結(jié)果（表）表明，在84個(gè)供試菌株中，多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲產(chǎn)生抗藥性菌株的頻率分別為：9022%、0000%、3750%與5000%，其中對(duì)腐霉利產(chǎn)生抗藥性的比例最小。由圖可知，不同科蔬菜對(duì)4種殺菌劑抗藥性頻率存在差異，結(jié)果表明北京地區(qū)不同科蔬菜的菌核病菌對(duì)多菌靈、乙霉威和異菌脲的抗藥性水平較高。

22不同科蔬菜菌核病菌對(duì)4種殺菌劑抗藥性表現(xiàn)型

供試的84個(gè)蔬菜菌核病菌菌株，依據(jù)它們對(duì)多菌靈（car）、乙霉威（die）、腐霉利（pro）和異菌脲（ipr）這4種殺菌劑的抗感程度，可以分為8種抗藥性表現(xiàn)型（表2）。其中多菌靈、乙霉威和異菌脲表現(xiàn)抗藥性但對(duì)腐霉利表現(xiàn)敏感的菌株56個(gè)，所占比例為3043%；對(duì)多菌靈和乙霉威表現(xiàn)抗藥性而對(duì)腐霉利與異菌脲表現(xiàn)敏感的菌株5個(gè)，所占比例為2772%；對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲均表現(xiàn)抗藥性的菌株28個(gè)，所占比例為522%；對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利表現(xiàn)抗藥性而對(duì)異菌脲表現(xiàn)敏感的菌株3個(gè)，所占比例為685%，其他表型的菌株數(shù)均在0個(gè)以下，所占比例較低。

3不同科蔬菜的菌核病菌對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲4種殺菌劑抗藥性表現(xiàn)型

202年采用最小濃度抑制（MIC）法測(cè)定了不同科蔬菜菌核病菌菌株對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲的抗藥性，結(jié)果表明，不同科蔬菜的菌核病菌對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲的產(chǎn)生抗藥性的菌株所占的比例分別為9022%、0000%、3750%與50%。試驗(yàn)結(jié)果（表、圖）表明，北京地區(qū)不同科蔬菜菌核病菌對(duì)多菌靈、乙霉威抗藥性較嚴(yán)重，應(yīng)用這2種藥劑防治蔬菜菌核病意義不大，其次對(duì)異菌脲抗藥性水平較高。但北京不同科蔬菜抗藥性水平存在差異，其中源自豆科蔬菜的菌核病菌菌株對(duì)多菌靈抗藥性頻率相對(duì)較低，達(dá)6667%；源自十字花科蔬菜的菌核病菌菌株對(duì)腐霉利抗藥性頻率相對(duì)較高，達(dá)到7000%；而源自菊科與茄科蔬菜的菌核病菌菌株對(duì)異菌脲的抗藥性水平相對(duì)較高，所占比例分別為6742%與5789%，田間使用腐霉利與異菌脲應(yīng)考慮不同科蔬菜菌核病菌抗藥性水平，注意限制多菌靈與乙霉威2種藥劑使用，腐霉利與異菌脲2種藥劑使用要根據(jù)蔬菜的種類注意與其他不同作用方式的藥劑輪換使用，適當(dāng)減少存在抗藥性風(fēng)險(xiǎn)的殺菌劑在個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)的使用量與使用次數(shù)，以延緩異菌脲與腐霉利抗藥性進(jìn)一步增加。

32不同科蔬菜的菌核病菌對(duì)殺菌劑多重抗藥性

菌核病菌對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲抗藥性在油菜、大豆和向日葵等大田作物均有報(bào)道，但是也多數(shù)是對(duì)單種或2種殺菌劑抗藥性的研究，而對(duì)蔬菜菌核病菌菌株的多重抗藥性的報(bào)道較少。本研究202年測(cè)定了84個(gè)不同科蔬菜的菌核病菌對(duì)多菌靈、乙霉威、腐霉利和異菌脲抗藥性，沒(méi)有檢測(cè)到對(duì)這4種殺菌劑都敏感的菌株。4重抗藥性菌株28個(gè)，所占比例為522%；對(duì)多菌靈、乙霉威和異菌脲3重抗藥性菌株56個(gè)，所占比例為3043%；對(duì)多菌靈、乙霉威和腐霉利3重抗藥性菌株3個(gè)，所占比例為685%；對(duì)多菌靈與乙霉威2種藥劑2重抗藥性菌株5個(gè)，所占比例為272%；對(duì)多菌靈與乙霉威2種藥劑產(chǎn)生抗藥性菌核病菌的抗性普遍較強(qiáng)，而對(duì)多菌靈與乙霉威2種藥劑具有交互抗性的菌株8個(gè)，所占比例為979%，田間應(yīng)盡量減少這2種藥劑的使用。菊科蔬菜菌核病菌對(duì)異菌脲抗藥性相對(duì)較重，所占比例為6742%。田間使用，應(yīng)注意確定防治適期并與其他不同作用方式新型藥劑如啶酰菌胺[4- 5]、咯菌腈[6]、咪鮮胺[7]與申嗪霉素[8]等輪換使用，目前國(guó)內(nèi)正式登記生物防治制劑只有噬菌核酶2億活孢子/g可濕性粉劑[9]，但有研究報(bào)道認(rèn)為生物防治制劑盾殼霉[20]、枯草芽孢桿菌[2]、放線菌[22]與粘帚霉[23]對(duì)菌核病菌有較好的防治效果，生產(chǎn)上還可輔以合理的農(nóng)業(yè)管理措施如溫湯浸種、及時(shí)清除病殘?bào)w、溫濕度控制等，發(fā)病嚴(yán)重的注意水旱輪作以及與非寄主植物輪作等，以達(dá)到延緩病菌對(duì)常規(guī)殺菌劑藥劑的抗藥性。

植物病原菌對(duì)殺菌劑的抗性風(fēng)險(xiǎn)是由藥劑和病原菌共同決定的，如藥劑的選擇壓力和作用機(jī)制、病原菌自身的抗藥性頻率、抗藥性突變體的適合度和交互抗性等[24]。在蔬菜菌核病防治研究中沒(méi)有明確菌核病菌對(duì)這些新殺菌劑抗性風(fēng)險(xiǎn)情況下，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中，各地要根據(jù)當(dāng)?shù)氐纳a(chǎn)水平和實(shí)際情況，科學(xué)、合理地指導(dǎo)施藥，避免長(zhǎng)期、單一地使用某一種藥劑或某一類型的藥劑，有條件的地區(qū)，要定期做好田間病菌抗藥性的監(jiān)測(cè)工作，并配合不同作用機(jī)理的藥劑合理搭配使用，減少因防治不當(dāng)而帶來(lái)的蔬菜品質(zhì)下降和產(chǎn)量損失。在應(yīng)用中應(yīng)該遵循殺菌劑使用準(zhǔn)則，與其他不同作用機(jī)制的殺菌劑輪換使用或交替使用，以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生。

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