趙婧，荊洋，呂宗舜，周璐

(天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津 300052)

有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤患者瘤組織中APC、Survivin蛋白的表達(dá)及意義

趙婧，荊洋，呂宗舜，周璐

(天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，天津 300052)

目的 觀察有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤組織中中抑癌基因APC和凋亡抑制基因Survivin的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)20例大腸腺癌、32例有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤、32例無大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤、20例正常大腸組織中APC及Survivin蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 在大腸腺癌、有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤、無大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤和正常組織中APC蛋白的陽性表達(dá)率分別為20.0%、56.3%、65.6% 和95.0%。Survivin蛋白的陽性表達(dá)率分別為 75.0%、40.6%、28.1%和0。有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤組APC蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度低于無家族史的大腸多發(fā)性腺瘤組，Survivin蛋白陽性強(qiáng)度高于無家族史的大腸多發(fā)性腺瘤組(P均<0.05)。結(jié)論 與正常大腸組織相比，大腸多發(fā)性腺瘤組織中APC蛋白表達(dá)下調(diào)，Survivin蛋白表達(dá)上調(diào)；與無大腸癌家族者相比，有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤組織中APC蛋白表達(dá)更低，Survivin蛋白表達(dá)更高。

大腸癌；家族史；大腸腺瘤；腺瘤性息肉病蛋白；生存素

流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)有大腸癌家族史的人群中大腸腺瘤的惡變風(fēng)險(xiǎn)高于普通人群，但這些腺瘤組織中分子生物學(xué)的改變是否不同于普通人群仍待研究[1, 2]。腺瘤性息肉病(APC)基因是一種抑癌基因，其突變會(huì)引起大腸腫瘤的發(fā)生，在腺瘤向腺癌進(jìn)展的過程中，表達(dá)逐漸減低[3]。生存素(Survivin)基因是一種凋亡抑制基因，表達(dá)于腫瘤組織中，并且隨著腫瘤的發(fā)展，其表達(dá)逐漸增強(qiáng)。這兩種基因可以作為大腸腺瘤惡變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的生物學(xué)標(biāo)志[3, 4]。2009年6月～2013年12月，我們檢測(cè)了大腸腺癌、有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤、無大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤及正常組織中APC及Survivin蛋白的表達(dá)情況，并探討其臨床意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2009年6月～2013年12月于我院腸鏡下活檢并由病理科存檔的大腸組織標(biāo)本，其中大腸腺癌20例(A組)，有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤32例(B組)，無大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤32例(C組)及正常結(jié)腸黏膜20例(D組)。4組患者性別年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有病例均經(jīng)病理確診并有完整的隨訪資料(包括一般情況、個(gè)人疾病史、家族史)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有大腸多發(fā)性息肉至少取兩處組織并經(jīng)病理證實(shí)均為腺瘤，取腺瘤較大者納入；②所有病例均無家族性腺瘤性息肉病史、遺傳性非息肉病性大腸癌史、克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎病史；③B、C、D組患者本人無惡性腫瘤病史；④B、C組患者均為首次發(fā)現(xiàn)大腸腺瘤；⑤所有患者檢查前均未接受放療、化療及免疫治療。B組中管狀腺瘤19例，管狀絨毛狀腺瘤9例，絨毛狀腺瘤4例；輕、中度非典型增生28例，重度非典型增生4例；腺瘤最大徑<1 cm者25例, ≥1 cm者7例；息肉數(shù)量<5個(gè)19例，≥5個(gè)13例。C組中管狀腺瘤20例，管狀絨毛狀腺瘤8例，絨毛狀腺瘤4例；輕、中度非典型增生28例，重度非典型增生4例；腺瘤最大徑<1 cm者26例, ≥1 cm者6例；息肉數(shù)量<5個(gè)22例，≥5個(gè)10例。B、C組病理類型、腺瘤大小、息肉數(shù)目差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 APC和Survivin表達(dá)檢測(cè)及結(jié)果判定方法 采用免疫組織化學(xué)染色法。標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)，用0.3%雙氧水(H2O2)37 ℃孵育10 min，每例樣本分為兩份，其中1份滴加兔抗人APC單克隆抗體，另1份滴加兔抗人Survivin單克隆抗體。4 ℃冰箱孵育過夜，滴加通用型IgG抗體(二抗)于37 ℃溫箱孵育45 min，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，自來水清洗，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水，中性樹膠封片。用已知陽性片做陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對(duì)照。

APC主要定位于細(xì)胞質(zhì)，以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞；Survivin主要定位于細(xì)胞核，以胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。每張切片由兩位觀察者雙盲交換判斷，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞。參照Kawasaki等[5]的標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)陽性細(xì)胞百分比和染色著色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評(píng)分。①根據(jù)陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分：陽性細(xì)胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。②根據(jù)細(xì)胞著色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)評(píng)分相乘即為該標(biāo)本陽性表達(dá)強(qiáng)度：0分為陰性-，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性(+++)。弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性均視為標(biāo)本陽性表達(dá)。陽性表達(dá)率=陽性表達(dá)標(biāo)本數(shù)/入組標(biāo)本數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 APC和Survivin陽性表達(dá)率 A、B、C、D組APC陽性表達(dá)率分別為20.0%、56.3%、65.6%和95.0%。APC蛋白陽性表達(dá)率B、C組高于A組，低于D組(P均<0.05)；B、C組APC陽性表達(dá)率相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A、B、C、D組Survivin陽性表達(dá)率分別為75.0%、40.6%、28.1%和0。Surrivin蛋白陽性表達(dá)率B、C組低于A組，高于D組(P均<0.05)；B、C組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 APC和Survivin表達(dá)強(qiáng)度 B組APC表達(dá)+者10例、++者6例、+++者2例，C組分別為2、9、10例，B、C組APC蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度相比P<0.05。B組多為+，C組多為++和+++，B組APC蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度低于C組。B組Survivin表達(dá)+者3例、++者10例、+++者0例，C組分別為7、2、0例，B、C組Survivin蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度相比P<0.05。B組多為++，C組多為+，B組Survivin蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度高于C組。

3 討論

大腸癌家族史是大腸癌發(fā)生的高危因素，有大腸癌家族史的人群患大腸癌的風(fēng)險(xiǎn)是無大腸癌家族史人群的2～4倍[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，在有大腸癌家族史的人群中，大腸腺瘤的發(fā)病率以及腺瘤癌變的風(fēng)險(xiǎn)也高于普通人群[1, 2, 7]。在探究其具體機(jī)制的研究中，Hao等[8]發(fā)現(xiàn)在有大腸癌家族史的人群中，肉眼觀察正常的結(jié)腸黏膜也有多種基因表達(dá)異常，并且這種分子學(xué)異常改變先于腺瘤性息肉的發(fā)生，這些改變可能是有大腸癌家族史人群大腸腺瘤發(fā)生率高的原因之一。

APC基因是一種抑癌基因，是Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的調(diào)控因子。APC基因突變時(shí)，Wnt信號(hào)通路持續(xù)激活，導(dǎo)致β-catenin降解減少，積聚于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/ LEF結(jié)合形成復(fù)合體，激活靶基因的轉(zhuǎn)錄，促使腫瘤發(fā)生[9, 10]。Survivin是細(xì)胞凋亡抑制蛋白(IAP)家族的一個(gè)新成員，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂和抑制凋亡的雙重功能。Survivin基因過表達(dá)失去抑制細(xì)胞凋亡的功能，細(xì)胞增殖和分化的平衡被破壞，促使腫瘤發(fā)生[11]。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)APC在正常結(jié)腸黏膜、腺瘤及腺癌中的陽性表達(dá)率依次降低[10, 12]，與本研究結(jié)果一致。APC基因突變發(fā)生于腺瘤癌變的早期，在散發(fā)性大腸癌形成的過程中是腺瘤惡化的必要條件[10, 12]。Jonathan等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Survivin過表達(dá)在大腸癌的形成中是一個(gè)早期事件，在組織惡變過程中表達(dá)逐漸增高，與本研究結(jié)果一致。相霞等[12]發(fā)現(xiàn)Survivin在組織中的表達(dá)強(qiáng)度是個(gè)漸進(jìn)的過程，在正常大腸組織—腺瘤—腺癌病變進(jìn)展過程中，其陽性表達(dá)逐漸增高。APC及Survivin基因表達(dá)異常在一定程度上反映了大腸腫瘤的進(jìn)展程度，可以作為大腸腺瘤惡變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的生物學(xué)標(biāo)志[3, 4, 12]。

在有大腸癌家族史的人群中大腸腺瘤及大腸癌的發(fā)病率均高于無家族史人群[1]，大腸癌多為大腸腺瘤惡變發(fā)展而來，腺瘤的癌變需要較長(zhǎng)的時(shí)間，而腺瘤組織中某些基因?qū)W的改變發(fā)生于腺瘤癌變的早期[10]，可對(duì)腺瘤癌變起到一定的預(yù)示作用。本研究發(fā)現(xiàn)有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤組APC蛋白的陽性強(qiáng)度低于無家族史組，Survivin蛋白陽性強(qiáng)度高于無家族史組，說明有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤的基因表達(dá)異常程度高于無家族史組，從分子生物學(xué)上說明前者有更高癌變的風(fēng)險(xiǎn)。因此，對(duì)此類高危人群合理規(guī)劃大腸癌篩查方案具有重要意義。美國(guó)胃腸病學(xué)會(huì)2008年結(jié)直腸癌篩查指南建議：普通人群從50歲開始，每10年進(jìn)行一次結(jié)腸鏡檢查；一級(jí)親屬有大腸癌病史人群從40歲開始每5年進(jìn)行一次結(jié)腸鏡檢查，或者比患大腸癌的一級(jí)親屬診斷時(shí)年齡提前10年開始，每5年進(jìn)行一次結(jié)腸鏡檢查[14]。然而，Bujanda等[15]對(duì)大腸癌患者的一級(jí)親屬行結(jié)腸鏡篩查的依從性進(jìn)行了多中心的前瞻性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其依從率僅有38%。其原因可能是對(duì)這類人群高風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估的理論證據(jù)不足。因此需要更多的證據(jù)證實(shí)有大腸癌家族史人群患大腸癌風(fēng)險(xiǎn)高于普通人群。本研究發(fā)現(xiàn)APC及Survivin在有大腸癌家族史的大腸多發(fā)性腺瘤中的表達(dá)異常程度高于無家族史者，為有大腸癌家族史人群進(jìn)行結(jié)腸鏡篩查提供了新的依據(jù)，有助于提高有大腸癌家族史人群篩查結(jié)腸鏡的依從性，以早發(fā)現(xiàn)大腸腺瘤并予以切除，減少大腸癌的患病率及病死率，降低因大腸癌引起的診斷及治療費(fèi)用[16]。

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Expressions and significances of APC and Survivin protein in colorectal multiple adenomas with a family history of colorectal cancer

ZHAOJing,JINGYang,LVZong-shun,ZHOULu

(GeneralHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin300052,China)

Objective To investigate the expressions and significances of tumor suppressor gene APC and apoptosis inhibiting gene Survivin in colorectal multiple adenomas with a family history of colorectal cancer. Methods The expressions of APC and Survivin gene were detected by immunohistochemical staining among the cases from 20 colorectal adenocarcinomas, 32 colorectal multiple adenomas with a family history of colorectal cancer, 32 colorectal multiple adenomas without a family history of colorectal cancer, 20 normal colorectal mucosas. Results There had differences in positive rate for expressions of APC and Survivin among the colorectal adenocarcinomas, the colorectal multiple adenomas with a family history of colorectal cancer, the colorectal multiple adenomas without a family history of colorectal cancer, the normal colorectal mucosas, the positive rate of APC protein was 20.0%, 56.3%, 65.6%, 95.0%, respectively (P<0.01). The positive rate of Survivin protein was 75.0%, 40.6%, 28.1%, 0%, respectively (P<0.01). In colorectal multiple adenomas with a family history of colorectal cancer, the positive intensity of APC protein was lower and the positive intensity of Survivin protein was higher than that in the colorectal multiple adenomas without a family history of colorectal cancer (allP<0.05). Conclusion Compared with the normal colorectal mucosas, the APC protein down-regulated expression and Survivin protein up-regulated expression in colorectal multiple adenomas. In colorectal multiple adenomas with a family history of colorectal cancer, the expression of APC protein was lower and the expression of Survivin protein was higher than that in the colorectal multiple adenomas without a family history of colorectal cancer.

colorectal cancer; family history; colorectal adenoma; adenomatous polyposis coli; Survivin

天津市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20120513)。

趙婧(1987-)，女，碩士，主要研究方向?yàn)橄到y(tǒng)疾病,郵箱：zhaojing200808@163.com

呂宗舜(1956-)，男，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要研究方向?yàn)橄到y(tǒng)疾病，郵箱：lzs_zyy@163.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.06.008

R735.3

A

1002-266X(2015)06-0024-04

2014-08-13)