陳大宇，黃麗華，謝 莉，譚建強(qiáng)，鄭 敏

(廣西壯族自治區(qū)柳州市婦幼保健院遺傳代謝科 545001)

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·臨床研究·

串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在低出生體質(zhì)量兒先天性代謝異常的應(yīng)用及價(jià)值*

陳大宇，黃麗華，謝 莉，譚建強(qiáng)，鄭 敏△

(廣西壯族自治區(qū)柳州市婦幼保健院遺傳代謝科 545001)

目的 探討分析柳州市低出生體質(zhì)量兒先天性代謝異常的發(fā)生率及串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)在其中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇2013年1～12月柳州市婦幼保健院新生兒疾病篩查中心接收的柳州市接產(chǎn)醫(yī)院共800例低出生體質(zhì)量兒患兒干血濾紙片標(biāo)本，使用美國AB公司API3200串聯(lián)質(zhì)譜儀器，通過衍生化法處理標(biāo)本后檢測分析氨基酸及?；鈮A水平。結(jié)果 800例低出生體質(zhì)量患兒采用串聯(lián)質(zhì)譜檢測氨基酸及酰基肉堿結(jié)果，初篩結(jié)果異?；純?67例，初篩可疑陽性率21.0%，其中氨基酸初篩異常56例，占33.5%；?；鈮A初篩異常89例，占53.3%；氨基酸及?；鈮A共同異常22例，占13.2%。結(jié)論 低出生體質(zhì)量兒氨基酸譜和酰基肉堿譜異常比例較高，初篩結(jié)果可為低出生體質(zhì)量兒先天性代謝異常疾病的診斷和治療提供更多更可靠的依據(jù)和線索，進(jìn)一步提高柳州市臨床醫(yī)生對(duì)低出生體質(zhì)量兒先天性代謝異常的認(rèn)識(shí)，增強(qiáng)臨床醫(yī)生對(duì)該群體患兒的干預(yù)及后期指導(dǎo)能力，從而進(jìn)一步提高診療水平，減少漏診、誤診，降低嬰幼兒病死率及致殘率。

串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)； 低出生體質(zhì)量兒； 先天性代謝異常； 氨基酸； ?；鈮A

低出生體質(zhì)量兒(LBW)是指在出生1 h內(nèi)體質(zhì)量低于2 500 g的新生兒，因?qū)m內(nèi)發(fā)育不良、營養(yǎng)基礎(chǔ)差，容易在發(fā)育的關(guān)鍵期出現(xiàn)代謝缺陷，影響疾病治療及恢復(fù)、并發(fā)癥的預(yù)防及后期成長基礎(chǔ)和保障，一部分還并發(fā)成為先天性代謝異常[1]。先天性代謝異常往往一經(jīng)確診，對(duì)患兒的身體智力、神經(jīng)系統(tǒng)等的損害已不可逆轉(zhuǎn)，失去治療的機(jī)會(huì)，病死率很高，相當(dāng)一部分患兒在確診和治療之前已死亡，是導(dǎo)致嬰幼患兒不明原因死亡或殘疾的主要病因之一[2]。為進(jìn)一步了解柳州市低出生體質(zhì)量兒的先天性代謝異常情況，本文將本院2013年1～12月收治的800例LBW進(jìn)行臨床分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1～12月本院新生兒疾病篩查中心接收柳州市接產(chǎn)醫(yī)院的800例LBW作為研究對(duì)象，男406例，女394例，胎齡(35.2±2.33)周，體質(zhì)量(1 990.0±432.2)g。

1.2 采集方法 研究對(duì)象出生72 h且充分哺乳3次以上，空腹采集足跟末梢血滴注于新生兒篩查專用濾紙上，使血斑直徑大于或等于8 mm，濾紙兩面完全滲透，室溫自然晾干后置4 ℃冰箱保存待檢。

1.3 儀器與試劑 使用高效液相色譜法級(jí)別甲醇、正丁醇、乙酰氯、乙腈試劑，配制濃度為3 mol/L鹽酸正丁醇；50%甲醇水為沖洗相；80%乙腈作為流動(dòng)相。氮?dú)饧兌葹?9.999%。檢測儀器為美國生物應(yīng)用系統(tǒng)AB公司產(chǎn)的API3200串聯(lián)質(zhì)譜儀，高效液相色譜儀LC-20AD購自日本島津公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 串聯(lián)質(zhì)譜所有檢測原始數(shù)據(jù)由美國生物應(yīng)用系統(tǒng)AB公司數(shù)據(jù)分析軟件ChemoView 1.4處理后，得到65項(xiàng)檢測結(jié)果，包括25項(xiàng)氨基酸和40項(xiàng)?；鈮A及比值。

2 結(jié) 果

2.1 800例LBW血斑氨基酸譜及?；鈮A譜檢測結(jié)果 初篩異?；純?67例，初篩可疑陽性率21.0%，其中氨基酸初篩異常56例，占33.5%；?；鈮A初篩異常89例，占53.3%；氨基酸及?；鈮A共同異常22例，占13.2%。

2.2 56例氨基酸譜異常結(jié)果 亮氨酸代謝異常28例，占50.0%；精氨酸代謝異常11例，占19.6%；甲硫氨酸代謝異常9例，占16.1%;其余為混合氨基酸代謝異常。

2.3 89例?；鈮A異常結(jié)果 丙?；鈮A代謝異常26例，占29.2%；游離肉堿代謝異常19例，占21.3%；其余為混合?；鈮A代謝異常。

3 討 論

先天性代謝異常是由于基因突變因素，導(dǎo)致機(jī)體生化物質(zhì)在合成、代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)存等方面出現(xiàn)的各種異常的總稱，包括氨基酸、有機(jī)酸、糖、脂肪、激素等多種物質(zhì)的代謝缺陷[3]。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、圍生醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，新生兒疾病譜也發(fā)生很大變化，感染性疾病日益減少，窒息相關(guān)疾病發(fā)病率和嚴(yán)重程度降低，出生缺陷疾病所占比例日益增多。據(jù)報(bào)道，先天性代謝異常群體的患病率高達(dá)1/100或以上,所占比例也在逐年升高[4-5]。

有文獻(xiàn)表明，LBW在出生早期極易出現(xiàn)代謝指標(biāo)的異常，并發(fā)癥牽涉多個(gè)系統(tǒng)，而一部分最終發(fā)展為先天性代謝異常[6]。先天性代謝異常臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，可造成體內(nèi)任何器官和系統(tǒng)損害，80%的患兒有神經(jīng)系統(tǒng)損害，如腦癱、智力低下、頑固性驚厥、拒食、嘔吐等表現(xiàn)，嚴(yán)重者導(dǎo)致昏迷或死亡。當(dāng)先天性代謝異常一旦確診，身體和智力的損害已不可逆轉(zhuǎn)，失去最佳治療的機(jī)會(huì)，是導(dǎo)致嬰幼兒不明原因死亡或殘疾的主要病因之一。因此，在LBW出生早期，應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜檢測其氨基酸譜及?；鈮A譜，已經(jīng)成為早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)防先天性代謝異常的重要手段[7]。

本研究結(jié)果表明，氨基酸譜異常的結(jié)果中，亮氨酸、精氨酸及甲硫氨酸代謝異常占大部分，也說明了LBW的基礎(chǔ)條件代謝能力差，肝臟及腎臟代謝功能未成熟，直接導(dǎo)致氨基酸譜物質(zhì)代謝紊亂，若不能及時(shí)進(jìn)行早期干預(yù)，往往會(huì)成為高氨基酸血癥代謝異常疾病。?；鈮A譜異常的結(jié)果中，丙?；鈮A代謝異常占大部分，為29.2%。文獻(xiàn)表明，在先天性代謝異常發(fā)病病種中，由丙酰基肉堿代謝異常引起的甲基丙二酸血癥是有機(jī)酸代謝血癥中最常見遺傳代謝疾病[8]。游離肉堿代謝異常比例占21.3%，在人體內(nèi)，肉堿以游離肉堿和酯酰肉堿兩種形式存在，肉堿通過線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)運(yùn)長鏈脂肪酸的β氧化途徑起很重要的作用。LBW由于生理原因，肉堿基礎(chǔ)水平不穩(wěn)定，特別是極低(或超低)出生體質(zhì)量兒在早期需要全靜脈的營養(yǎng)維持動(dòng)態(tài)平衡，若不能早發(fā)現(xiàn)、早介入，患兒就有可能因?yàn)閿z取不足、合成減少及腎臟吸收障礙，導(dǎo)致肉堿缺乏癥[9]。

近年來隨著科技進(jìn)步，許多新技術(shù)廣泛應(yīng)用在先天性代謝異常的臨床診斷，其中串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)目前已廣泛應(yīng)用于各種高端實(shí)驗(yàn)室。串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)近年來發(fā)展較快，只需數(shù)滴血，就能在2～3 min對(duì)一個(gè)標(biāo)本進(jìn)行幾十種代謝產(chǎn)物的快速分析，可協(xié)助診斷40余種先天性代謝異常，它的價(jià)值在于能夠在無癥狀時(shí)或癥狀早期發(fā)現(xiàn)疾病，從而及時(shí)介入治療。目前，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)已在許多國家廣泛應(yīng)用，對(duì)氨基酸代謝障礙、有機(jī)酸代謝障礙、尿素循環(huán)障礙及脂肪酸氧化障礙等疾病的早期防治起到了重要作用[10-12]。國內(nèi)多個(gè)文獻(xiàn)表明，通過串聯(lián)質(zhì)譜檢測疑似先天性代謝異常高?；純旱陌被峒磅；鈮A譜，可為快速診斷早期先天性代謝異常提供更快、更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

綜上所述，顯示本地區(qū)低出生體質(zhì)量兒先天性代謝初篩異?？梢砂l(fā)生率達(dá)21.0%，在診療的同時(shí)應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)及其他檢驗(yàn)指標(biāo)，有針對(duì)性地進(jìn)行下一步氣相色譜-質(zhì)譜、DNA突變、酶學(xué)分析檢測。盡管只是一部分會(huì)發(fā)展成為先天性代謝異常疾病，但早期對(duì)LBW進(jìn)行檢測代謝性相關(guān)指標(biāo)，將會(huì)對(duì)臨床診療低出生體質(zhì)量兒先天性代謝缺陷及相關(guān)并發(fā)癥提供依據(jù)，達(dá)到早期診斷、早期治療、減少后遺癥[13]。

[1]宋朝敏，楊長儀，王程毅，等．早期營養(yǎng)支持策略對(duì)極低出生體重兒生長代謝及并發(fā)癥的影響[J]．中國新生兒科雜志，2013，28(6)：379-383．

[2]劉麗，李紅，陸彪，等．液相串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在高危嬰幼兒遺傳代謝病臨床篩查診斷中的應(yīng)用研究[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2013，42(35)：4252-4254．

[3]趙立明，王福順，劉海燕，等．無高危因素的精神發(fā)育遲滯患兒遺傳代謝病的篩查及隨訪[J]．中國全科醫(yī)學(xué)，2013，16(9)：1043-1044．

[4]Cakir B,Teksam M,Kosehan D,et al.Inborn errors of metabolism presenting in childhood[J].J Neuroimaging,2011,21(2):e117-e133.

[5]Sahai I,Zytkowicz T,Rao Kotthuri S,et al.Neonatal screening for inborn errors of metabolism using tandem mass spectrometry:experience of the pilot study in Andhra Pradesh,India[J].Indian J Pediatr,2011,78(8):953-960.

[6]楊姿榮．低出生體重兒并發(fā)癥的臨床分析[J]．中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8(7)：183-185．

[7]江劍輝，曹偉鋒，姜迪剛，等．748例遺傳性代謝病高危兒童串聯(lián)質(zhì)譜篩查研究[J]．廣東醫(yī)學(xué)，2008，29(3)：357-359．

[8]楊楠，韓連書，葉軍，等．新生兒期氨基酸、有機(jī)酸及脂肪酸氧化代謝病疾病譜分析[J]．臨床兒科雜志，2012，30(9)：805-808．

[9]梁冬芳．兒童肉堿缺乏癥護(hù)理體會(huì)[J]．臨床合理用藥雜志，2012，5(17)：156．

[10]Honda A,Yamashita K,Miyazaki H,et al.Highly sensitive analysis of sterol profiles in human serum by LC-ESI-MS/MS[J].J Lipid Res,2008,49(9):2063-2073.

[11]Frazier DM,Millington DS,Mccandless SE,et al.The tandem mass spectrometry newborn screening experience in North Carolina:1997-2005[J].J Inherit Metab Dis,2006,29(1):76-85.

[12]Krijt J,Dutá A,Kozich V.Determination of S-Adenosylmethionine and S-Adenosylhomocysteine by LC-MS/MS and evaluation of their stability in mice tissues[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2009,877(22):2061-2066.

[13]胡建秀，辛虹．串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查新生兒遺傳代謝疾病120例[J]．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20(26)：3322．

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳課題(Z2013608)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.033

A

1672-9455(2015)03-0370-02

2014-08-07

2014-10-18)

△通訊作者,E-mail:zhengmin08@126.com。