孔德偉 聶強(qiáng) 朱永
【摘 要】目的:探討食品中色素的測(cè)定方法,對(duì)現(xiàn)行GB/T5009.35-2003,《食品中合成色素測(cè)定》進(jìn)行提出修訂建議。方法:樣品經(jīng)提取后,經(jīng)聚酰胺粉吸附,用氨-乙醇溶液解吸附,中和后水浴濃縮,定容過濾,以甲醇與乙酸銨溶液為流動(dòng)相,梯度洗脫,紫外254nm檢測(cè),外標(biāo)定量。
【關(guān)鍵詞】食品 合成色素 檢測(cè) 方法 改進(jìn)
色素作為食品添加劑,可分為食用天然色素和人工合成色素兩大類,前者一般較為安全,人工合成色素是用人工化學(xué)合成方法所得的有機(jī)色素,主要是以煤焦油中分離出來的苯胺染料為原料制成。本身無營養(yǎng)價(jià)值,但由于成本低廉,色澤鮮艷,著色力強(qiáng),配色方面,可以增加食品的美觀,在食品生產(chǎn)過程中被廣泛使用。近幾年,在巨大的經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下,導(dǎo)致食品合成色素超標(biāo),研究資料表明,過量的攝入人工合成色素,將會(huì)在體內(nèi)蓄積,對(duì)腎臟、肝臟產(chǎn)生一定傷害,因此加強(qiáng)人工合成色素管理,提高人工合成色素快速、準(zhǔn)確檢驗(yàn)十分必要。
1 《食品中合成著色劑的測(cè)定》GB/T5009.35-2003在檢驗(yàn)中遇到的問題
《食品中合成著色劑的測(cè)定》GB/T5009.35-2003,第一法為高效液相色譜法,該方法具有檢測(cè)靈敏度高、混合色素分離性能完全等優(yōu)點(diǎn),且隨著液相色譜儀的普及,該方法已被廣泛的采用,但該方法在分析過程中存在以下幾個(gè)方面的問題:①固體樣品由于本身有很大的粘稠性,在G3垂融漏斗抽濾時(shí),很難抽濾,有的樣品抽濾8、9個(gè)小時(shí)還不能完全抽濾干凈,嚴(yán)重的造成了檢驗(yàn)效率低、人工合成色素?fù)p失率高等問題。②在聚酰胺吸附法中,GB/T5009.35-2003要求試樣溶液加檸檬酸調(diào)PH值到6,這樣會(huì)因PH過高引起人工合成色素在PH為6的弱酸環(huán)境內(nèi)有一定的溶解度,導(dǎo)致在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時(shí),工合成色素?fù)p失,造成檢驗(yàn)結(jié)果偏低。③流動(dòng)相: GB/T5009.35-2003的 5.3.2中規(guī)定,流動(dòng)相:甲醇:乙酸銨溶液(PH=4.0),這樣會(huì)因流動(dòng)相成酸性,導(dǎo)致人工合成色素在流動(dòng)相內(nèi)的溶解度降低,會(huì)引起結(jié)果不出峰和C18柱子的使用壽命縮短。④梯度洗脫:GB/T5009.35-2003的5.3.3中規(guī)定:甲醇:20%~35%,3%/min;35%~98%,9%/min;98%繼續(xù)6 min,該規(guī)定缺少甲醇:98%~20%以及甲醇:20%的持續(xù)時(shí)間這兩個(gè)梯度洗脫過程,甲醇:20%的持續(xù)時(shí)間應(yīng)根據(jù)柱壓是否穩(wěn)定來確定,否則會(huì)引起保留時(shí)間發(fā)生嚴(yán)重漂移,造成無法對(duì)人工合成色素的峰進(jìn)行定性。⑤由于亮藍(lán)既溶于酸又溶于堿,被吸附的亮藍(lán)極易被甲醇-甲酸溶液洗脫,回收率幾乎為0,造成檢驗(yàn)結(jié)果嚴(yán)重偏低,因此應(yīng)對(duì)亮藍(lán)的檢驗(yàn)進(jìn)行修定。
2 對(duì)《食品中合成著色劑的測(cè)定》GB/T5009.35-2003的幾點(diǎn)建議
針對(duì)上述問題,本中心根據(jù)多年的對(duì)食品人工合成色素檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),提出以下建議:
①對(duì)于固體樣品在G3垂融漏斗難以抽濾問題建議稱取5.00g~10.00g粉碎樣品放入100mL燒杯中,加30mL10%的氨水?dāng)嚢?5min進(jìn)行溶解,然后用快速濾紙進(jìn)行過濾、洗滌,每次用10%的氨水5mL,洗滌3~5次,收集濾液再用檸檬酸調(diào)PH值到3左右,這樣就可以把固體樣品轉(zhuǎn)化為液體樣品,再用G3垂融漏斗抽濾就比較容易抽濾了,因?yàn)槿斯ず铣缮厥窃趬A性溶液中有較高的溶解度,樣品經(jīng)過上述方法處理后,絕大部分人工合成色素都轉(zhuǎn)化到濾液中了,這樣就解決了固體樣品在G3垂融漏斗抽濾難的問題和人工合成色素?fù)p失率較高的問題。②在聚酰胺吸附法中,GB/T5009.35-2003的5.2.1中要求試樣溶液加檸檬酸調(diào)PH值到6,這樣會(huì)因PH過高引起人工合成色素在PH為6的弱酸環(huán)境內(nèi)有一定的溶解度,導(dǎo)致在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時(shí),工合成色素?fù)p失,造成檢驗(yàn)結(jié)果偏低。建議用檸檬酸試樣的PH值到3,這樣就可以避免人工合成色素在用甲酸-甲醇洗滌天然色素時(shí),工合成色素?fù)p失的問題。③流動(dòng)相: GB/T5009.35-2003的 5.3.2中規(guī)定,流動(dòng)相:甲醇:乙酸銨溶液(PH=4.0),這樣會(huì)因流動(dòng)相成酸性,導(dǎo)致人工合成色素在流動(dòng)相內(nèi)的溶解度降低而析出,會(huì)引起結(jié)果不出峰和C18柱子的使用壽命縮短,建議調(diào)流動(dòng)相乙酸銨溶液的PH值到7左右。④梯度洗脫:GB/T5009.35-2003的5.3.3中規(guī)定:甲醇:20%~35%,3%/min;35%~98%,9%/min;98%繼續(xù)6 min,建議應(yīng)增加甲醇:98%~20%以及甲醇:20%的持續(xù)時(shí)間這兩個(gè)梯度洗脫過程,確保在進(jìn)行下一樣品時(shí)流動(dòng)相的比例過度到起始狀態(tài),甲醇:20%的持續(xù)時(shí)間應(yīng)根據(jù)柱壓是否穩(wěn)定來確定,否則會(huì)引起保留時(shí)間發(fā)生嚴(yán)重漂移,造成無法對(duì)人工合成色素的峰進(jìn)行定性。⑤如樣品中含有亮藍(lán)人工合成色素,由于亮藍(lán)既溶于酸又溶于堿,被吸附的亮藍(lán)極易被甲醇-甲酸溶液洗脫,回收率幾乎為0,造成檢驗(yàn)結(jié)果嚴(yán)重偏低,建議取兩份樣品(若是固體樣品用上述方法轉(zhuǎn)化為液體樣品),一份直接進(jìn)行調(diào)PH值、濃縮、定容、過濾后用于測(cè)定亮藍(lán),一份按照5.2規(guī)定的處理方法測(cè)定其他色素。
3 試驗(yàn)與結(jié)果
3.1 儀器
Agilent1200高效液相色譜儀(帶自動(dòng)進(jìn)樣器);真空泵;超聲波清洗器;抽濾器;G3垂融漏斗;0.45 μm過濾頭。
3.2 試劑
色譜純甲醇;二級(jí)水(電導(dǎo)率<0.10 mS/m,25℃);色素標(biāo)準(zhǔn)溶液[GBW(E)];乙酸銨溶液(0.02 mol/L);甲醇一甲酸混合溶液(6+4);無水乙醇一2%氨水一水混合溶液(7+2+1);聚酰胺粉(過200目);乙酸溶液(20%)。
3.3 色素提取
稱取固體樣品綠豆糕7.00g共12份,其中6份用于加標(biāo)回收試驗(yàn)(檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)均為0.1mg),按上述建議①至⑤制成的樣品溶液調(diào)pH到3,加熱至60℃,將1 g聚酰胺粉加少量水調(diào)成粥狀,倒人樣品溶液中,攪拌片刻,以G3垂融漏斗抽濾,用60℃pH=6的水洗滌3~5次,然后用甲醇一甲酸溶液洗滌3~5次,再用水洗至中性,用乙醇一氨水一水混合液解吸3~5次,每次3 ml,收集解吸液,加乙酸溶液中和,80℃~85℃水浴蒸發(fā)濃縮至20%,加水定容至10 ml,經(jīng)針頭過濾器(0.45μm)過濾,待測(cè)。
3.4 色譜條件
色譜柱:SinoChrom ODS—BP柱(250 mm×4.6 mm×5μm),C18預(yù)柱,柱溫為25℃,流動(dòng)相:A為甲醇,B為乙酸銨溶液(0.02 mot/L,PH值為7),梯度洗脫,流速:1.0 mL/min,進(jìn)樣量10μl,檢測(cè)波長254 nm。
3.5 流動(dòng)相編程(見表1)
4 結(jié)語
實(shí)驗(yàn)表明,在應(yīng)用GB/T5009.35—2003第一法過程中,按照上述5點(diǎn)建議控制實(shí)驗(yàn)條件:吸附、解吸附、濃縮溫度及體積,梯度洗脫,結(jié)果:樣品抽濾快捷、工合成色素?fù)p失低、各色素保留時(shí)間漂移較小、各色素分離度良好,同時(shí)解決了亮藍(lán)不能檢出的問題,各色素回收率滿意。