陳少文 吳東海 吉明柱

同型半胱氨酸及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)性

陳少文 吳東海 吉明柱

目的 觀察同型半胱氨酸(Hcy)及代謝酶基因遺傳多態(tài)性、葉酸和維生素B12與潰瘍性結(jié)腸炎(UC)之間的關(guān)系。方法 100例UC患者作為臨床研究對(duì)象, 并將其作為研究組, 另選同期行體檢的100例健康人員作為對(duì)照組。觀察兩組的Hcy、甲硫氨酸合成酶(MS)和亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的基因多態(tài)性、葉酸及維生素B12水平。結(jié)果 治療前研究組患者的Hcy水平明顯高于對(duì)照組, 葉酸和維生素B12水平明顯低于對(duì)照組, 治療后研究組的Hcy水平明顯低于對(duì)照組, 葉酸和維生素B12水平明顯高于對(duì)照組, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率比較, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)Logistic回歸分析可得, UC患者的Hcy水平和維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等因素之間有明顯的相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)論 UC與Hcy及代謝酶基因多態(tài)性、葉酸、維生素B12之間有著密切的聯(lián)系。

潰瘍性結(jié)腸炎；同型半胱氨酸；代謝酶基因遺傳多態(tài)性；葉酸；維生素B12

為了觀察Hcy在UC發(fā)病機(jī)制中的作用, 本次研究選取2012年10月～2014年10月深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院、深圳市第二人民醫(yī)院、深圳市蛇口人民醫(yī)院收治的100例UC患者作為臨床研究對(duì)象, 對(duì)其臨床資料進(jìn)行回顧性分析,現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究選取2012年10月～2014年10月深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院、深圳市第二人民醫(yī)院、深圳市蛇口人民醫(yī)院收治的100例UC患者作為臨床研究對(duì)象, 并將其作為研究組, 所有患者均經(jīng)病理檢查和內(nèi)鏡檢查明確診斷［1］, 且均已排除具有慢性肝炎、糖尿病及其他癌癥疾病的患者, 其中男58例, 女42例；年齡51～79歲, 平均年齡(61.37±8.24)歲。另選同期于三家醫(yī)院進(jìn)行體檢的100例健康體檢人員作為對(duì)照組, 其中男54例, 女46例；年齡54～82歲, 平均年齡(67.53±6.87)歲。兩組性別和年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 兩組均于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取5 ml外周血作為血液標(biāo)本, 給予肝素進(jìn)行抗凝, 放置于低溫環(huán)境下, 以2500 r/min的速度進(jìn)行10 min的離心, 然后取上清液待測(cè)。使用北京九強(qiáng)公司提供的Hcy試劑, 通過循環(huán)酶法［2］對(duì)Hcy的濃度進(jìn)行測(cè)定；采用Waters公司產(chǎn)出的高效液相色譜儀器和德國(guó)拜耳公司提供的維生素B12試劑, 通過放射免疫法對(duì)葉酸和維生素B12進(jìn)行測(cè)定。研究組患者在治療結(jié)束之后根據(jù)以上方法對(duì)相應(yīng)的指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè), 注意試驗(yàn)的所有步驟均嚴(yán)格遵循儀器和試劑的說明書進(jìn)行操作。通過RT-PCR方法［3］對(duì)MS和MTHFR的基因多態(tài)性進(jìn)行測(cè)定, 具體方法為：清晨空腹?fàn)顟B(tài)抽取5 ml外周血, 提取DNA后采用紫外分光光度儀對(duì)其濃度進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)中采用德國(guó)QIAGEN公司生產(chǎn)的RT-PCR試劑盒和引物合成, 南京諾唯贊生物科技有限公司生產(chǎn)的總蛋白提取試劑盒, 深圳華因康基因科技有限公司生產(chǎn)的PCR儀；MS：A2756G引物序列：上游：5c-CATGAAGAATATGAAGATATTAGA-3c, 下游：5c-GAAC TAGAAGAGAGAAATTCTCTA-3c；MTHFR：C677T引物序列：上游：5c-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3c, 下游：5c-AGGACGGTCCGTGAGGTC-3c；分別進(jìn)行2 min的91℃變性和預(yù)變性, 給予1 min的56℃退火, 45 s的74℃30個(gè)循環(huán), 5 min 72℃、12 h 4℃, 將cDNA的產(chǎn)物放在-20℃的環(huán)境下進(jìn)行保存。分析利用3%濃度的瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；多因素采用Logistic回歸分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Hcy、維生素B12及葉酸水平對(duì)比 治療前研究組患者的Hcy水平明顯高于對(duì)照組, 葉酸和維生素B12水平明顯低于對(duì)照組, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療后研究組的Hcy水平明顯低于對(duì)照組, 葉酸和維生素B12水平明顯高于對(duì)照組, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率對(duì)比 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率比較, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1 兩組Hcy、維生素B12及葉酸水平對(duì)比( x-±s)

表2 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率對(duì)比［n(%)］

2.3 Logistic回歸分析 將患者的Hcy水平作為因變量, 維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等作為自變量, 采用Logistic回歸分析對(duì)研究組患者的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析得出, Hcy水平和維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等因素之間有明顯的相關(guān)性(P＜0.05)。

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎簡(jiǎn)稱潰結(jié), 是臨床上一種侵及結(jié)腸和直腸的慢性非特異性炎癥, 其炎性病變會(huì)對(duì)結(jié)腸黏膜和黏膜下層造成損傷, 通常主要位于乙狀結(jié)腸與直腸上, 甚至也可以蔓延至整個(gè)結(jié)腸上［4］。目前, 臨床上對(duì)于UC的發(fā)病機(jī)制尚未明確, 其具有病程漫長(zhǎng)、易反復(fù)發(fā)作等特點(diǎn)。Hcy是一種具有非常高的生物活性的分子, 其實(shí)質(zhì)上是甲硫氨酸代謝的中間產(chǎn)物, 能夠通過誘導(dǎo)機(jī)體中的氧化應(yīng)激反應(yīng)而加快炎性反應(yīng)的進(jìn)程, 并且還可以引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激反應(yīng)而使機(jī)體長(zhǎng)期維持在腸黏膜上皮炎癥狀態(tài)中, 同時(shí)Hcy還能夠?qū)δc黏膜和腸道菌群間的相互作用進(jìn)行調(diào)節(jié)［5］。目前, 相關(guān)學(xué)者對(duì)于Hcy及代謝酶基因多態(tài)性和UC之間的關(guān)系越來越重視。本次研究結(jié)果顯示, 研究組治療后的Hcy水平降低, 葉酸、維生素B12水平上升, UC患者Hcy水平的降低和葉酸、維生素B12之間呈負(fù)相關(guān)性, 當(dāng)免疫力降低時(shí), 葉酸、維生素B12水平會(huì)降低, 導(dǎo)致Hcy出現(xiàn)堆積現(xiàn)象［6］。此外, 兩組MS和MTHFR基因頻率和等位基因頻率比較, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這表明Hcy代謝的基因多態(tài)性會(huì)對(duì)其自身活性造成影響。而經(jīng)Logistic回歸分析顯示, UC患者的Hcy水平和維生素B12、葉酸、MS和MTHFR等因素之間有明顯的相關(guān)性(P＜0.05)。這表明在UC治療時(shí)增加患者的葉酸和維生素B12水平有助于降低Hcy水平。

綜上所述, UC與Hcy及代謝酶基因多態(tài)性、葉酸、維生素B12之間有著密切的聯(lián)系。

［1］ 阿衣努爾·買提斯迪克, 吾爾古麗·阿卜杜來海提, 哈木拉提·吾甫爾, 等.129例潰瘍性結(jié)腸炎患者維醫(yī)異常體液分型的量化診斷入選項(xiàng)專家咨詢研究.科技導(dǎo)報(bào), 2013, 31(36):64-70.

［2］ 劉維新, 張紳, 任益, 等.潰瘍性結(jié)腸炎及潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)直腸癌小鼠模型中血管生成因子的表達(dá)及其與血管新生的關(guān)系.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 42(3):231-234, 266.

［3］ 劉樹利, 常桂琴, 郭麗琴, 等.血清同型半胱氨酸與抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的診斷意義.重慶醫(yī)學(xué), 2014, 33(23):3069-3070.

［4］ 王敬軍.潰瘍性結(jié)腸炎患者血清同型半胱氨酸的檢測(cè)及其臨床意義.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐, 2014, 19(20):2773-2774.

［5］ 蔣益, 趙杰, 徐昌隆, 等.亞甲基四氫葉酸還原酶G1793A基因多態(tài)性及高同型半胱氨酸血癥與潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)性.中華內(nèi)科雜志, 2010, 49(8):675-679.

［6］ 周旭軍, 關(guān)秀軍.潰瘍性結(jié)腸炎患者血清同型半胱氨酸與葉酸和維生素B12的相關(guān)性研究.北京醫(yī)學(xué), 2015, 25(2):175-176.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.14.017

2015-04-01］

深圳市寶安區(qū)科技局(項(xiàng)目編號(hào)：2013241)

518121 深圳市大鵬新區(qū)南澳人民醫(yī)院內(nèi)科

(陳少文)；深圳市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科(吳東海)；深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院消化內(nèi)科(吉明柱)