葉二妹

(池州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物技術(shù)系，安徽 池州 247000)

生物安全柜的應(yīng)用技術(shù)

葉二妹

(池州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物技術(shù)系，安徽 池州 247000)

生物安全柜是處理危險性微生物時所用的箱形負壓空氣凈化安全設(shè)備，是為避免暴露操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物對人、樣品和環(huán)境造成危害而設(shè)計的生物安全防護裝置。但擁有生物安全柜不等于就擁有了“安全”，只有掌控和拿捏好它的應(yīng)用技術(shù)，具備駕馭它的能力，才能有效地發(fā)揮其生物安全性能，減少生物危害因子的逃逸，最大限度地保障操作人員、實驗對象和實驗環(huán)境的安全。

生物安全柜；安全性能；應(yīng)用技術(shù)；生物安全

1 生物安全柜的安全選購

生物安全柜有效工作的前提是選購相關(guān)技術(shù)性能符合行業(yè)標準且能滿足實驗室防護級別需要的安全柜。2002年，衛(wèi)生部頒布了《WS 233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準則》[4]，規(guī)范了各級微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室的生物安全防護，明確指出不同安全防護級別的實驗室要安裝相應(yīng)級別的生物安全柜。使用者在選購之前，應(yīng)根據(jù)實驗室開展研究工作的性質(zhì)，在進行實驗室病原微生物、放射性核素和揮發(fā)性有毒化學(xué)試劑的危害評估基礎(chǔ)上，選擇適當?shù)陌踩瘢畲笙薅鹊販p少危害因子給人、環(huán)境和樣品帶來的危害。

1.1 生物安全柜的分類和應(yīng)用

根據(jù)結(jié)構(gòu)設(shè)計、入口氣流網(wǎng)速、排氣方式、循環(huán)方式以及保護對象和程度的不同，生物安全柜通常可分為三個級別，即I級、II級(A1、A2、B1和B2)和III級，可以滿足不同的生物研究和實驗要求[5]。

1)I級BSC。適合操作中等以下的傳染性材料，可保護工作人員和環(huán)境而不保護樣品。因不能對實驗樣品和新產(chǎn)品進行保護，目前已很少使用。

3)III級BSC。它是為生物安全防護等級為四級的實驗室而設(shè)計的，柜體完全氣密，工作人員通過連接在柜體的手套進行操作，試驗品通過雙門的傳遞箱進出安全柜，以確保不受污染，適用于高風險的生物實驗。

1.2 生物安全水平

1)BSL -1。適用非常熟悉的病原，不會經(jīng)常引發(fā)健康成人發(fā)病，對實驗人員和環(huán)境潛在危險小或不會產(chǎn)生氣溶膠的微生物試驗品或產(chǎn)品，可在開放的實驗臺面開展工作，一般不使用生物安全柜。

2)BSL-2。適用對人和環(huán)境有中度潛在危險的病原。對于一些可能涉及或產(chǎn)生有害物質(zhì)的操作過程都應(yīng)該在安全柜內(nèi)進行，最好使用二級的安全柜。二級生物安全水平的試驗品或產(chǎn)品可以通過液體傳播，所以操作人員對于污染的銳器要特別注意，在選購安全柜時，注意確保沒有突出的銳角，可選用Ⅰ、Ⅱ級生物安全柜。

3)BSL-3。應(yīng)用于臨床、診斷、教學(xué)和研究等有關(guān)內(nèi)源性和外源性病原。在該級別中所有與傳染源操作有關(guān)的步驟都應(yīng)在安全柜內(nèi)進行，最好選用Ⅱ級或Ⅱ級以上生物安全柜。

4)BSL-4。應(yīng)用于可通過氣溶膠而致實驗室感染或未知傳染風險，且對生命有高度危險的有關(guān)病原或外源性病原，應(yīng)選用Ⅲ級生物安全柜。操作新型不明微生物時，必須在四級生物安全防護實驗室中進行，待有充分證據(jù)后再決定此種微生物或毒素應(yīng)在哪一級別的實驗室中處理。

總之，應(yīng)根據(jù)使用單位所從事工作的性質(zhì)和防護要求進行綜合考慮，選購恰當級別和型號的生物安全柜。各種安全柜所能提供的保護和應(yīng)用如表1所示[7]。

表1 各種生物安全柜的防護水平和應(yīng)用

2 生物安全柜的安全安裝

生物安全柜在安裝和驗證時應(yīng)該按照有關(guān)標準執(zhí)行，必須由具有資質(zhì)的專業(yè)人員來進行。用戶在安裝前應(yīng)主動與制造商或服務(wù)單位進行有效溝通，要求安排有資質(zhì)的專業(yè)人員，配備必要的專用儀器，科學(xué)合理地安裝、驗證生物安全柜。由于進入安全柜低速率的定向氣流極易受到干擾，因此，安裝室內(nèi)的送、排風必須滿足物理防護參數(shù)要求。生物安全柜應(yīng)盡量安放在遠離門口、風口和窗戶，遠離人員、物品流動以及可能會擾亂氣流的地方，遠離其他可能干擾的儀器，避免破壞安全柜的氣流而影響其物理防護功能；應(yīng)盡量安放在有利于形成氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域的單向氣流流型的地方。安全柜后方與兩個側(cè)面應(yīng)各留出30 cm的空隙，便于清潔和維護；在安全柜的上面應(yīng)留有30～35 cm的空間，以便準確測量排風過濾器的氣流和更換過濾器。安裝后，應(yīng)按照YY-0569《生物安全柜》[8]的要求對其運行性能以及完整性進行檢測認證，出具具有法律效力的檢測報告，以確認相關(guān)參數(shù)在正常的范圍之內(nèi)，符合國家的性能標準，方能投入使用。

3 生物安全柜的安全使用

選購了安全柜不等于買了安全保險。生物安全柜如果使用不當，其防護作用將會大大受到影響，絕不能單純地利用它替代管理制度和操作規(guī)范。很多安全事故是疏于管理或?qū)嶒炄藛T違反操作規(guī)程或操作不當所致。在安全柜投入使用后，作為使用單位的管理層，必須建立科學(xué)的管理制度和操作規(guī)程，并嚴格執(zhí)行，加強監(jiān)督；作為操作者，必須具備良好的操作技術(shù)規(guī)范和良好的行為習慣，科學(xué)規(guī)范地使用之。

3.1 安全培訓(xùn)

所有的操作者必須經(jīng)過正規(guī)嚴格的培訓(xùn)，熟練掌握各種感染物質(zhì)和其他危險物質(zhì)的操作準則和技術(shù)要點，具備規(guī)范化、標準化地使用安全柜的能力，通過考核，成績合格才能上崗。

3.2 安全評估

在開展相關(guān)工作之前應(yīng)對相關(guān)操作進行危險評估，根據(jù)評估的結(jié)果，制定全面細致的操作規(guī)程，對于關(guān)鍵的、危險的步驟設(shè)計出可行的防護措施并對這些細節(jié)了然于胸。

3.3 安全檢查

為確保安全柜應(yīng)用的有效性、安全性和可靠性，安全柜應(yīng)采用單獨供電，以免發(fā)生意外導(dǎo)致安全柜失效；每次使用前要檢查其使用狀態(tài)，對重點部位和薄弱環(huán)節(jié)進行重點排查，以便及時發(fā)現(xiàn)和消除安全隱患。

3.4 安全操作

1) 操作者應(yīng)做好個人防護工作，在生物安全1～2級實驗室中工作的人員應(yīng)穿外套式工作服；在3～4級實驗室工作的人員應(yīng)穿手術(shù)衣式工作服，手術(shù)衣的手套應(yīng)能包住腕關(guān)節(jié)，必要時應(yīng)戴面罩和眼罩。

2) 操作前應(yīng)將本次操作的全部物品移入安全柜，避免雙臂頻繁穿過氣幕破壞氣流；柜內(nèi)物品擺放應(yīng)做到清潔區(qū)、半污染區(qū)與污染區(qū)基本分開，方便操作過程中取用物品，且三區(qū)之間無交叉，物品應(yīng)盡量靠后放置，但不得擋住氣道口，以免干擾氣流正常流動。柜內(nèi)不放與本次實驗無關(guān)的物品。

3) 打開風機5～10 min，待柜內(nèi)空氣凈化、氣流穩(wěn)定后方可操作。將雙臂緩緩伸入柜內(nèi)，靜止一會兒，待柜內(nèi)氣流穩(wěn)定后按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的順序輕柔、舒緩地操作，避免影響氣流和交叉污染。操作時不可打開玻璃視窗，面部應(yīng)處在工作窗口之上，盡量減少背后人員走動和快速開關(guān)房門，嚴禁使用明火，以免干擾柜內(nèi)氣流穩(wěn)定，且明火也容易損壞HEPA濾器。

4) 操作時為防液滴濺出，可在臺面鋪上用消毒劑浸泡過的毛巾或紗布，但不能覆蓋住安全柜格柵。處理溢出物時，不可將頭伸入安全柜內(nèi)，面部不可直接對著前操作口，而應(yīng)處于前視面板的后方。如果溢出量少，可直接用消毒劑浸濕紙巾擦拭；如溢出量大或容器破碎時，要求廣泛消毒，則先將柜內(nèi)的所有物品表面進行消毒，再移出安全柜按操作規(guī)程消毒，選擇消毒劑時需考慮其對安全柜的腐蝕性，使用消毒液的作用時間應(yīng)維持在20～30 min。如果溢出物流入安全柜內(nèi)部，則需要對其進行熏蒸。

5) 當出現(xiàn)報警或系統(tǒng)失效時應(yīng)停止使用，查明原因確保安全后再使用。當安全柜或?qū)嶒炇页霈F(xiàn)持續(xù)正壓時，室內(nèi)人員應(yīng)立即停止操作并戴上防護面具，采取措施恢復(fù)負壓。如不能及時恢復(fù)和保持負壓，應(yīng)停止實驗，及早按規(guī)程退出，并采取相應(yīng)處理措施和通知相關(guān)人員。

3.5 清潔和消毒

4 生物安全柜的安全檢測和維護

2004年國家頒布的《GB 19489-2004實驗室生物安全通用要求》指出，生物安全柜對保護實驗室工作人員是必不可少的，安裝或更換后要進行現(xiàn)場生物和物理的檢測，并且每年進行驗證。鑒于它危險的使用環(huán)境，使用單位在安裝、移動、檢修以及更換過濾器以后必須由專業(yè)技術(shù)人員按照規(guī)定對其整體性能進行認證，檢測至少包括柜體防泄漏、高效過濾器完整性、下降氣流流速、流入氣流流速、氣流模式，人員、產(chǎn)品與交叉污染保護[9]?？蛇x擇生產(chǎn)廠家或?qū)I(yè)維護公司提供定期或不定期的維保，每臺安全柜應(yīng)每年至少進行一次測試和認證，確保安全使用。

5 結(jié)束語

近年來，隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展和生物安全柜的廣泛應(yīng)用，其使用的安全性和可靠性已引起社會各界的關(guān)注和重視。市場上的生物安全柜種類繁多，質(zhì)量參差不齊，互有優(yōu)勢和局限。作為使用者需了解各種生物安全柜的安全性能，選購設(shè)計合理、質(zhì)量合格的安全柜，并對其進行科學(xué)規(guī)范的安裝、檢測、使用和維護。生物安全柜對提高實驗室生物安全及社會公共衛(wèi)生安全有著十分重要的意義。

[1]陸永綏.臨床檢驗管理與技術(shù)規(guī)程[M].杭州：浙江大學(xué)出版社，2004：3-31.

[2]李金松.生物安全柜應(yīng)用指南[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：11.

[3]車鳳翔，李勁松，王秋娣，等.實驗室生物安全通用要求(GB 19489-2004)[S].北京：中國標準出版社，2004.

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部.微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準則(WS 233-2002)[S].北京：中國標準出版社，2002.

[5]蔣健敏，陳民利.實用醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)[M].杭州：浙江人民出版社，2009：148.

[6]World Health Organization.Laboratory biosafety manua1[M].3rd. Geneva：World Health Organization，2004.

[7]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范[S].北京：中國標準出版社，2003.

[8]國家食品藥品監(jiān)督管理局.YY 0569-2005生物安全柜[S].北京：中國標準出版社，2005.

[9]溫占波，趙建軍.生物安全柜的使用選擇和生物防護性能檢測及評價[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2008，29(4)：14-16.

Scientific Application of Biological Safety Cabinets

YE Ermei

(Department of Biotechnology, Chizhou Vocational and Technical College, Chizhou 247000, China)

Biological safety cabinet is used in the handling of hazardous microorganisms box-safety negative pressure air-purifying equipment, which is to avoid exposure to infectious aerosols that may arise during the operation and splashing out on people, samples and environmental hazards and biological safety protection device design. But it does have the biological safety cabinet does not mean you have a “safe”, so we have to control and handle its application, with the ability to wield it, in order to effectively perform their biological security, reduce biological hazards factors escapes maximum guarantee the safety of operators, experiments and experimental environment.

biological safety cabinet; security; technology; bio-safety

2014-05-06；修改日期: 2014-12-17

安徽省教育廳2013年教學(xué)質(zhì)量工程基金資助項目(2013sjjd045)。

葉二妹(1968-)，女，學(xué)士，實驗師，主要從事畜牧獸醫(yī)實驗教學(xué)與研究工作。

R446；Q-337

B

10.3969/j.issn.1672-4550.2015.02.066