朱菊紅 周宏艷 周東方 王 菁

一種奧沙拉秦鈉膠囊苯胺雜質(zhì)考察方法

朱菊紅 周宏艷 周東方 王 菁

目的 建立奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質(zhì)考察方法。方法 采用高效液相色譜（HPLC）法。色譜柱為Agilent C18（4.6×250 mm, 5 μm）, 流動(dòng)相為甲醇：混合溶劑（含1.41 g/L磷酸二氫鉀和0.47 g/L磷酸磷酸氫二鈉二水化合物的混合溶液并用42 g/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0）15∶85, 流速1.0 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)為205 nm, 柱溫為40℃, 進(jìn)樣量50 μl。結(jié)果 苯胺峰與相鄰峰能夠分離, 檢測(cè)限為2.78×10-4μg。結(jié)論 本法可用于奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質(zhì)考察。

高效液相色譜法；奧沙拉秦鈉；苯胺雜質(zhì)

奧沙拉秦鈉膠囊為水楊酸類藥物, 通過(guò)偶氮鍵連接兩分子5-氨基水楊酸, 到達(dá)結(jié)腸部位后其偶氮橋在細(xì)菌作用下斷裂, 分解為二分子5-氨基水楊酸并作用于結(jié)腸炎癥黏膜,抑制前列腺素合成, 抑制炎癥介質(zhì)白三烯的形成, 降低腸壁細(xì)胞膜的通透性, 減輕腸黏膜水腫, 用于輕中度急慢性潰瘍性結(jié)腸炎的治療［1］。EP7.0美沙拉秦原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)苯胺雜質(zhì)檢查控制, 苯胺雜質(zhì)對(duì)人體健康能產(chǎn)生高鐵血紅蛋白血癥、溶血性貧血和肝、腎損害, 由于奧沙拉秦鈉含有二分子美沙拉秦［2］, 因此對(duì)苯胺雜質(zhì)進(jìn)行考察、控制。本文參考EP7.0美沙拉秦原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下雜質(zhì)K檢查方法［3］, 建立了HPLC法測(cè)定奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質(zhì)的含量, 方法專屬性、靈敏度、耐用性等符合要求, 可以滿足奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質(zhì)檢查。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（包括VWD檢測(cè)器、G1311C自動(dòng)調(diào)配泵、G1329B標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A可調(diào)柱溫恒溫箱、Agilent色譜化學(xué)工作站等）；電子分析天平。

1.2 藥品與試劑 苯胺對(duì)照品（99%, Aladdin Industrial Corporation）；奧沙拉秦鈉膠囊（批號(hào)：110203、110206、110209）；甲醇（色譜級(jí), 美國(guó)Tedia有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇和系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent C18（4.6×250 mm, 5 μm）；流動(dòng)相：甲醇：混合溶劑（含1.41 g/L磷酸二氫鉀和0.47 g/L磷酸磷酸氫二鈉二水化合物的混合溶液并用42 g/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0）15∶85；流速1.0 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)為205 nm；柱溫為40℃；取苯胺鹽酸鹽對(duì)照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 作為對(duì)照品溶液, 進(jìn)樣量50 μl。對(duì)照溶液主峰信噪比至少為10。

2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查 精密稱取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物的細(xì)粉適量（約40 mg）, 置于20 ml容量瓶中, 加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 濾過(guò), 取續(xù)濾液作為供試品溶液。取苯胺鹽酸鹽對(duì)照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻過(guò)濾即得。

精密量取上述兩種溶液各50 μl, 分別注入液相色譜儀。供試品中苯胺雜質(zhì)峰不得大于對(duì)照品溶液中苯胺峰面積（10 ppm）。

2.3 方法的專屬性 取苯胺鹽酸鹽對(duì)照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 作為苯胺定位用溶液。精密量取50 μl, 注入液相色譜儀。

取奧沙拉秦鈉膠囊裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物的細(xì)粉適量（約40 mg）, 精密稱定, 置20 ml容量瓶中, 加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 過(guò)濾, 取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取50 μl,注入液相色譜儀。

圖1 高效液相色譜圖A：對(duì)照品；B供試品

在苯胺對(duì)照品溶液和奧沙拉秦鈉樣品色譜圖中, 苯胺峰保留時(shí)間位置處無(wú)干擾峰。

2.4 檢測(cè)限 對(duì)照品溶液：取本胺鹽酸鹽對(duì)照品27.8 mg,至100 ml容量瓶, 用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml至20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動(dòng)相稀釋至刻度。精密量取對(duì)照品溶液10 μl進(jìn)樣。性噪比3時(shí), 檢測(cè)限［4］為2.78×10-4μg。

2.5 強(qiáng)制破壞試驗(yàn)

2.5.1 酸破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 滴加7 mol/L的鹽酸5滴, 再加10 ml流動(dòng)相溶解,室溫下放置2 h后, 用2 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性,后加流動(dòng)相稀釋至刻度。

2.5.2 堿破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 滴加2 mol/L的氫氧化鈉溶液10滴, 再加10 ml流動(dòng)相溶解, 室溫下放置2 h后, 用2 mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至中性, 后加流動(dòng)相稀釋至刻度。

2.5.3 高溫破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 后放置水浴中3 h。

2.5.4 光照破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度, 在光照（4500±500）Lx條件放置2 d。

2.5.5 氧化破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加入30%雙氧水1 ml, 再加10 ml流動(dòng)相溶解, 室溫下放置2 h后, 后加流動(dòng)相稀釋至刻度。

分別取上述溶液各50 μl注入液相色譜儀, 均未檢出苯胺雜質(zhì), 說(shuō)明奧沙拉秦鈉較為穩(wěn)定, 在較為劇烈條件下未降解產(chǎn)生苯胺雜質(zhì)。

2.6 溶液穩(wěn)定性 取上述樣品溶液, 分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣50 μl注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 耐用性 將色譜條件中的參數(shù)作適度變化, 采用不同色譜柱、不同柱溫、不同流速, 考察對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響情況,性噪比均能達(dá)到10, 方法耐用性良好。

2.8 有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果 對(duì)某制藥企業(yè)111203、111206、111209三批按“2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查”方法檢查, 均未檢出苯胺雜質(zhì)。

3 小結(jié)

奧沙拉秦鈉樣品在酸、堿、高溫、光照、氧化條件下破壞,均未檢出苯胺雜質(zhì)。EP7.0奧沙拉秦鈉原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下未將苯胺訂入標(biāo)準(zhǔn)。但苯胺作為特定雜質(zhì), 奧沙拉秦鈉含有美沙拉秦結(jié)構(gòu), 本法可作為奧沙拉秦鈉可能含有苯胺雜質(zhì)檢查的檢查方法。

為使奧沙拉秦鈉在色譜系統(tǒng)中盡快洗脫, 可以在苯胺峰保留時(shí)間之后, 設(shè)定較高比例甲醇, 對(duì)奧沙拉秦鈉等相關(guān)成分洗脫。

［1］ 范竹萍, 曾民德.國(guó)產(chǎn)奧沙拉秦鈉膠囊治療潰瘍性結(jié)腸炎149例.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 1999, 4（1）:12-16.

［2］ 陳龍珠, 陳玨.奧沙拉秦鈉膠囊溶出度測(cè)定.西北藥學(xué)雜志, 2000, 15（3）:168.

［3］ 曾國(guó)明.柳氮磺胺吡啶片與奧沙拉秦鈉膠囊對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的治療效果比較.醫(yī)學(xué)信息旬刊, 2011, 24（7）:196-197.

［4］ 石晶波.奧沙拉秦鈉膠囊和柳氮磺胺吡啶片在治療潰瘍性結(jié)腸炎中的療效比較.吉林醫(yī)學(xué), 2012, 33（18）:168.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.10.192

2014-12-17］

323000 浙江眾益制藥股份有限公司（朱菊紅周宏艷 周東方）；平邑縣食品藥品監(jiān)督管理局（王菁）