覃艷春等

【關(guān)鍵詞】 高良姜；提取液；抗菌作用

中圖分類號：R285.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B DOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.05.032

近年來，隨著合成及半合成抗菌藥物的增多和廣泛使用，細(xì)菌耐藥性問題日趨嚴(yán)重，各種耐藥性細(xì)菌引發(fā)院內(nèi)感染等疾病的發(fā)病率不斷增長，長期以來西藥對耐藥一直束手無策[1]。高良姜（Alpinia officinarumHance）性辛、熱，歸脾、胃經(jīng)，具有溫胃、止嘔、散寒止痛之功效[2]，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，高良姜還具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗胃腸道出血、抗?jié)兒臀葛つけＷo(hù)等作用[3]。本研究利用野生高良姜提取液，研究其抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的情況，為高良姜的抗菌作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌種的收集

本次實驗收集2014年5月～2015年4月右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院從臨床分離的菌株，采集的標(biāo)本來自臨床感染患者咽拭子、痰、氣管沖洗物、血液、膿液、糞便等標(biāo)本。所有菌株經(jīng)VITEK微生物分析儀鑒定確認(rèn)。收集到的金黃色葡萄球菌25株，綠膿桿菌15株，白色念珠菌16株，不動桿菌15株，大腸桿菌12株。

1.2 藥物

本試驗所用高良姜來自廣西百色周邊的山地，經(jīng)乙醇提取后使用。

1.3 高良姜藥液的制備

高良姜水提液的提?。焊吡冀谐伤槠蠹铀?0倍的水煎煮3次，每次1小時，濃縮至1 g/ml。高良姜乙醇液提取：取高良姜碎片，用75%乙醇回流提取3次，每次1小時，濃縮至1 g/ml。上述藥液都配制成0.5 g/ml，0.25 g/ml，0.125 g/ml，0.0625 g/ml四種濃度備用。

1.4 KB藥敏紙片法

將純培養(yǎng)后的菌種接種于普通培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24 h，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似菌落4～5個，接種于5 ml的MH肉湯中，37℃培養(yǎng)3 h，用生理鹽水配制成0.5麥?zhǔn)?比濁標(biāo)準(zhǔn)，即含1～2108 CFU/ml的菌懸液。無菌操作下將空白藥敏紙片（6 mm）放到不同濃度的高良姜藥液中，浸泡1 h。用棉簽取上述菌懸液涂布到MH平板中，再將含有藥樣的藥敏紙片濾水，微干后鋪在平板中，37℃培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。

1.5 瓊脂稀釋法測最低抑菌濃度（MIC）

采用美國CLS標(biāo)準(zhǔn)瓊脂稀釋法測定各種中藥提取液對所采集菌種的最低抑菌濃度（minimum inbibition concentration，MIC）[4]。本次實驗高良姜測定濃度范圍為1～4 g/ml。各濃度的高良姜分別加入經(jīng)過高壓滅菌后在50℃水浴的MH瓊脂中，充分混勻后傾倒入平皿，瓊脂厚度為5～6 mm。制備濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管的菌懸液，再以1∶10稀釋，用微量移液器吸取制備好的菌液2 μL接種于瓊脂平板表面，每點(diǎn)菌數(shù)約為104 CFU，形成5～8 mm的菌斑。接種好后置37℃培養(yǎng)箱24 h后將平板置于暗色、無反光的物體表面判斷結(jié)果，以抑制細(xì)菌生長的最低藥物濃度為MIC。

2 結(jié) 果

2.1 KB藥敏紙片法檢測高良姜提取液的抗菌作用

結(jié)果顯示：高良姜醇提液和水提液對金黃色葡萄球菌均敏感，對銅綠假單胞菌、白假絲酵母菌、不動桿菌、大腸埃希菌不敏感。見表1。

2.2 瓊脂稀釋法檢測結(jié)果

高良姜醇提液和水提液濃度為0.0625 g/ml，0.125 g/ml，0.25 g/ml時對金黃色葡萄球菌均耐藥，濃度為0.5 g/ml時對金黃色葡萄球菌均敏感，結(jié)果表明，高良姜醇提液和水提液對金黃色葡萄球菌的MIC均為0.5 g/ml。

3 討 論

高良姜，別名小良姜，又名徐聞良姜，藥學(xué)名Alpiniaofficinarum Hance，為姜科植物，是一種熱帶多年生長的山姜，屬食藥兼用的植物資源。追溯高良姜的歷史，高良姜始載于《名醫(yī)別錄》，因出于古高涼郡（今廣東省湛江、茂名一帶）故名高涼姜，后因諧音而訛稱為高良姜。高良姜在我國古代的諸多藥典如《本草綱目》及《中國藥典》均有記載。而在《圖經(jīng)本草》中則對高良姜有更詳細(xì)的記載：“春生莖葉如姜苗而大，高一、二尺許，花紅紫色如山姜”。高良姜對人體造血機(jī)能有顯著促進(jìn)作用，據(jù)《本草綱目》記載，“其性甘辣、清涼，除煩熱、利津小便，通三焦團(tuán)壅、塞氣抗寒、散氣之功效，且明目驅(qū)瘴?！逼湮缎?，性溫，有溫胃散寒、行氣、消食止痛之功效[5～7]。

近20年來，隨著合成及半合成抗菌藥物的增多和廣泛使用，細(xì)菌耐藥性問題日趨嚴(yán)重，各種耐藥性細(xì)菌引發(fā)院內(nèi)感染等現(xiàn)象不斷增多，長期以來西藥對此一直束手無策，而高良姜是研究開發(fā)新的抗菌藥物的理想資源，但目前有關(guān)研究較少，并且還僅僅處于對粗提物的研究階段，為明確其中的活性成分，有待進(jìn)一步深入研究[8～10]。

本實驗用廣西野生的高良姜提取液，研究其對金黃色葡萄球菌等五種菌的抗菌作用，為中藥治療臨床常見細(xì)菌感染提供新的思路，研究結(jié)果顯示：高良姜提取液對金黃色葡萄球菌有很好的抑菌作用，對銅綠假單胞菌、白假絲酵母菌、不動桿菌、大腸埃希菌無抑菌作用。下一步研究將進(jìn)一步提取高良姜提取液中的各有效成分，研究其抗菌作用。本研究為高良姜的抗菌作用提供理論依據(jù)，也為以后進(jìn)一步深入研究開發(fā)廣西野生高良姜這一寶貴中藥資源奠定研究基礎(chǔ)。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 黃慧珍，楊 丹.高良姜的化學(xué)成分及其藥理活性研究進(jìn)展[J].廣東化工，2009，36（1）：7780.

[2] 嚴(yán) 波，白筱璐，胡竟一，等.高良姜的解熱和抗炎作用[J].中藥藥理與臨床， 2013，29（1）：8587.

[3] 王麗峰，彭敬東，王 寧.高良姜藥材高效液相指紋圖譜研究[J].西南師范大學(xué)學(xué)報，2008，33（6）：3338.

[4] 趙 炯，呂 瑋，段宏泉，等.高良姜中的抗白念珠菌化學(xué)成分[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，38（7）：604606.

[5] 呂 瑋，蔣伶活.高良姜的化學(xué)成分及藥理作用[J].中國藥業(yè)，2006，15（3）：1921.

[6] 龐啟華，嚴(yán) 萍，趙 翾，等.南藥高良姜基因組DNA提取方法的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（5）：11871189.

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[8] 康愛榮，閆 明，彭 英，等.高良姜中高良姜素的醇提和純化工藝研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2011，5（18）：4446.

[9] 霍仕霞，彭曉明，高 莉，等.不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)高良姜素對人黑色素瘤A375細(xì)胞黑素合成及相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].中草藥，2014，45（2）：244249.

[10] 許云霞，趙新淮.高良姜素對人胃癌SGC7901細(xì)胞增殖、周期循環(huán)和凋亡的體外影響[J].中國藥學(xué)雜志，2013，48（15）：12741278.

（收稿日期：2015-09-09 修回日期：2015-10-22）

（編輯：潘明志）