HPLC測定貴州不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸的含量

李香

【摘 要】 目的：建立HPLC測定貴州不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸含量的方法。方法：以70%乙醇90℃水浴回流1h，過濾，濾液揮干，加濃鹽酸，70%乙醇回流4h。流動相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（87∶13∶0.04∶0.02）；檢測波長210nm；流速為1.0ml/min；柱溫為30℃。結(jié)果：齊墩果酸分離效果好，在0.0654～2.616μg（r=0.9999）呈良好線性關(guān)系。結(jié)論：不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸含量存在一定差異。

【關(guān)鍵詞】 八月瓜；不同產(chǎn)地；齊墩果酸；HPLC

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）09-0012-02

Abstract：[JP+3]Objective To establish the content of oleanolic acid in different places of Guizhou in August melon in the determination method of HPLC.Methods Using 70% ethanol，90℃ water bath reflux for 1h，the reflux for 1 times，filtering，adding concentrated hydrochloric acid，70% ethanol，refluxing for 4h，the mobile phase：methanol water acetic acid-three triethy lamine（87∶13∶0.04∶0.02）；the detection wavelength of 210nm；the flow rate was 1ml/min；column temperature was 30℃.Results Oleanolic acid separation effect is good，in the 0.0654～2.616μg（r=0.9999）showed a good linearrelationship.Conclusion There were significant differences among different areas in the content of oleanolic acid in August melon.

Keywords：Akebia trifoliate；different habitats；Oleanolic acid；HPLC

八月瓜為木通科植物木通Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz的果實，又稱木通子、八月扎、八月炸、預(yù)知子、臘瓜等，分布于我國南部、長江流域和西北地區(qū)。民間多用于治療小便赤澀、淋濁水腫、胸中煩熱、喉痹咽痛、遍身拘痛、婦女經(jīng)閉、乳汁不通等疾病。八月瓜的主要化學(xué)成分為齊墩果酸類三萜、三萜皂甙，具有較強(qiáng)生物活性[1]。本實驗采用HPLC法測定4個不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸含量，為不同產(chǎn)地八月瓜質(zhì)量研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AT/SPD-20A UV/vis Detector高效色譜儀（日本島津）；Shim-pack VP-ODS色譜柱（150×4.6mm，5μm）；WS205電子天平（瑞士梅特公司）；DZG-6000電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）；HA-4恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）。

1.2 試劑 甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其余試劑均為分析純。

1.3 試藥 齊墩果酸對照品（批號：110709-200505，購于中國藥品生物制品檢定所）；八月瓜藥材采于貴州云頂、大定、云霧、都勻，由黔南民族醫(yī)專魏學(xué)軍老師鑒定為木通科木通屬落葉木質(zhì)藤本植物Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz的果實。

2 方法與結(jié)果[2-5]

2.1 色譜條件 Shim-pack VP-ODS色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（87∶13∶0.04∶0.02）；檢測波長210nm；流速為1.0ml/min；柱溫為30 ℃。

2.2 對照品溶液制備 精密稱量干燥至恒重的齊墩果酸對照品16.36mg，加入一定量甲醇定容至25ml，搖勻，配制得濃度為0.654mg/ml齊墩果酸對照品母液。

2.3 供試液的制備 取干燥到恒重并過四號篩的八月瓜粉末0.582g，加入6ml 70%乙醇，90℃水浴回流1h，回流1次，過濾，濾液揮干，加0.54ml濃鹽酸，加5.44ml 70%乙醇，回流4h，揮干溶劑，用甲醇定容至25ml，備用。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取0.2、0.4、0.8、1、2、4、8ml對照品母液用甲醇定容至10ml，搖勻，分別配成濃度0.01308、0.02616、0.05232、0.0654、0.1308、0.2616 、0.5232mg/ml的齊墩果酸對照品溶液。精密量取5μl，注入高效液相色譜儀，測定結(jié)果，以齊墩果酸對照品溶液的質(zhì)量濃度X（mg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2.3430×106X-6.8714×103，r=0.9999，線性范圍為：0.0654 ～2.616 μg。結(jié)果表明齊墩果酸與峰面積值在線性范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 專屬性實驗 據(jù)“2.3”項制備供試液，分別精密量取5μl對照品溶液、供試液、色譜甲醇溶液注入高效液相色譜儀，結(jié)果表明，陰性樣品在相應(yīng)位置無干擾。結(jié)果見圖1。

2.4.3 精密度試驗 稱取干燥至恒重藥材粉末約0.5 g，依“2.3”項下制備供試液，精密吸取供試液5μl，注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定齊墩果酸峰面積，計算RSD=1.83%。結(jié)果表明儀器精密度良好。