陳樹霞 葛恒德 蔣法成 蔣鎖俊 孫浩

摘要：禽流感病毒是由A型流感病毒引起的禽類（包括家禽和野禽）的感染和（或）感染綜合征。目前危害最嚴(yán)重是H5N1亞型高致病性禽流感病毒及其變異株，不僅給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，而且威脅人的公共衛(wèi)生安全。世界衛(wèi)生組織（OIE）和我國(guó)都將高致病性禽流感列為A類動(dòng)物傳染病。我國(guó)高致病性禽流感的防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是主要通過接種疫苗來控制H5N1病毒，實(shí)行強(qiáng)制免疫政策，所以疫苗的免疫效果對(duì)養(yǎng)禽業(yè)尤為重要。為了解不同企業(yè)生產(chǎn)的禽流感疫苗的免疫效果，為防疫疫苗的選擇提供參考依據(jù)，我們進(jìn)行了比對(duì)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)選擇六種不同企業(yè)生產(chǎn)的H5亞型禽流感重組疫苗（以下分別稱為：“A疫苗”、“B疫苗”、“C疫苗”、“D疫苗”、“E疫苗”、“F疫苗”）分別免疫雞群，定期對(duì)雞場(chǎng)開展禽流感免疫抗體檢測(cè)，比較不同企業(yè)禽流感疫苗的免疫效果，對(duì)不同企業(yè)的禽流感疫苗進(jìn)行免疫效果評(píng)價(jià)，選擇免疫效果好的疫苗作為本市防疫之用。

關(guān)鍵詞：禽流感；疫苗；免疫效果

禽流感病毒（Avian Influenza Virus. AIV）是正黏病毒科，流感病毒屬，單鏈負(fù)股分階段RNA病毒。禽流感病毒的亞型眾多，病毒表面糖蛋白血凝素（HA）有16種為H1-H16和神經(jīng)氨酸酶（NA）有9種為N1-N9共9個(gè)亞型，HA和NA的抗原變異是相互獨(dú)立的，各亞型之間缺乏交叉保護(hù)，同一亞型病毒有不同的變異株，所有亞型的病毒均可以在這些宿主中分離到，野生鳥類是其天然宿主，禽流感病毒根據(jù)其致病性分為高致病性和低致病性，H5N1為高致病性禽流感病毒。禽流感的發(fā)生給養(yǎng)禽業(yè)帶來的經(jīng)濟(jì)損失不可估量，同時(shí)還嚴(yán)重威脅到人類的身體健康，因此控制禽流感病毒尤為重要。我國(guó)主要采取“撲殺與強(qiáng)制免疫相結(jié)合”的綜合防制措施，取得比較理想的預(yù)防與防制的效果。目前國(guó)內(nèi)有多家企業(yè)生產(chǎn)H5亞型禽流感滅活苗，為了解不同疫苗的免疫效果，提高疫苗的保護(hù)水平，本次比對(duì)實(shí)驗(yàn)選擇A、B、C、D、E、F六種禽流感重組二價(jià)滅活疫苗分別免疫雞群，并制定了嚴(yán)格的免疫程序，免疫后定期檢測(cè)血清的HI抗體效價(jià)，觀察不同企業(yè)生產(chǎn)的六種疫苗免疫雞群后雞體內(nèi)產(chǎn)生抗體的消長(zhǎng)規(guī)律及差異，為我市防疫工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

96孔V型微量血凝板、可調(diào)微里移液器，微量振蕩器、普通離心機(jī)、1%紅細(xì)胞懸液、0.85%生理鹽水。

1.2 試劑

H5禽流感病毒抗原和H5禽流感病毒陽性血清，由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)疫苗

禽流感重組二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株），來自不同生產(chǎn)企業(yè)，分別為：“A疫苗”，“B疫苗”，“C疫苗”，“D疫苗”，“E疫苗”“F疫苗”。

1.4 試驗(yàn)雞群和方法

試驗(yàn)在淮安市四個(gè)雞場(chǎng)實(shí)施，分別為XY場(chǎng)、HZ場(chǎng)、HA場(chǎng)、JH場(chǎng)。每個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)自由選擇兩種H5亞型禽流感疫苗對(duì)雞場(chǎng)進(jìn)行高致病性禽流感免疫。試驗(yàn)動(dòng)物：每個(gè)雞場(chǎng)整棟中的雞群分成二組，每組約1000只雞左右，XY場(chǎng)用“A疫苗”和“B疫苗”免疫二組雛雞；HZ場(chǎng)用“C疫苗”和“D疫苗”免疫二組雛雞；HA場(chǎng)用“E疫苗”和“F疫苗”免疫二組雛雞；JH場(chǎng)“C疫苗”和“E疫苗”免疫二組雛雞。雞場(chǎng)在雛雞15日齡進(jìn)行首免，頸部注射0.5mL/只，首免后每隔一周進(jìn)行一次抗體檢測(cè)水平（首免后第一周、第二周、第三周共三次）；首免2ld后進(jìn)行第二次免疫，第二次免疫以后繼續(xù)每隔一周監(jiān)測(cè)一次抗體，抗體水平達(dá)到峰值時(shí)每隔4周監(jiān)測(cè)一次抗體，直到下次強(qiáng)化免疫開始時(shí)結(jié)束抗體監(jiān)測(cè)。

1.5 血凝（HA）與血凝抑制（HI）試驗(yàn)方法

采用中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18936-2003《高致性禽流感診斷技術(shù)》。

2 試驗(yàn)結(jié)果

4個(gè)雞場(chǎng)在首免前14日齡都進(jìn)行了母源抗體水平監(jiān)測(cè)，14日齡母源抗體水平平均值在3.97～4.23（log2）之間，雛雞在14日齡前都具體相對(duì)好的抗體保護(hù)水平。4個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)母源抗體水平、首免和二免抗體水平平均值具體檢測(cè)數(shù)據(jù)見表1-5。

3 討論

1）XY雞場(chǎng)選擇A疫苗和B疫苗進(jìn)行免疫（見表1）首免后兩種疫苗1周后抗體滴度基本相同，2周后A疫苗抗體上升明顯，第2周抗體水平已經(jīng)高達(dá)5以上，具有很好免疫保護(hù)作用，B疫苗2周抗體水平略有下降，兩種疫苗首免后第2周后抗體滴度兩者相差l（log2）滴度以上，兩種疫苗差異明顯。二免后抗體水平兩組都急劇上升，二免第3周抗體滴度達(dá)最高值，12周后稍有降低，但是仍維持在較高的抗體水平，兩種疫苗在二免后抗體滴度沒有顯著差異。兩種疫苗免疫效果均較好、抗體水平較為整齊。

2） HZ雞場(chǎng)用C疫苗和D疫苗進(jìn)行免疫（見表2），首免后2周內(nèi)兩種疫苗的抗體水平下降明顯，呈漸下降趨勢(shì)，3周后C疫苗抗體滴度明顯高于D疫苗3.43（log2）抗體滴度。二免后C疫苗抗體上升幅度大，增長(zhǎng)速度明顯比D疫苗快，兩種疫苗抗體水平前三周相差有至少l（log2）滴度，兩組疫苗存在明顯差異。

3） HA雞場(chǎng)用E疫苗和F疫苗進(jìn)行免疫（見表3），首免后雞群出現(xiàn)抗體滴度下降，1周抗體水平為0，到第2周才產(chǎn)生抗體，F(xiàn)疫苗首免后第2周、3周抗體高出E疫苗2（log2）滴度，首免情況兩種疫苗存在顯著差異。二免后兩種疫苗產(chǎn)生的抗體明顯增長(zhǎng)，高出首免2（log2）滴度以上，到第8周達(dá)到高峰，二免后兩種疫苗的抗體增長(zhǎng)水平基本相同，無明顯差異。

4） JH雞場(chǎng)用E疫苗和C疫苗進(jìn)行免疫（見表4），首免后的1-2周內(nèi)，兩種疫苗抗體滴度都不高，但是3周后的E疫苗的抗體滴明顯低于C疫苗，兩種疫苗首免后抗體水平稍有差異。二免后兩種疫苗的抗體增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯，E疫苗抗體上升幅度大于C疫苗，而且高峰值維持的時(shí)間也比C疫苗長(zhǎng)。

5）由表5可知，A疫苗首免后抗體水平快速上升，免疫效果顯著，二免后3周抗體滴度達(dá)到10（log2），12周后抗體滴度才略有下降；B疫苗首免后第1、2周抗體滴度相近，第3周抗體滴度與A疫苗有一點(diǎn)差異。二免后A疫苗和B疫苗抗體水平基本相同，沒有明顯差異，抗體水平都很高，對(duì)雞群都有較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用；F疫苗首免后第一周沒有抗體，略遜于A疫苗，第2周、3周抗體水平與A疫苗基本相同，二免后抗體滴度平均在9（log2）左右與A疫苗和B疫苗也沒有明顯的差異；E疫苗（2014092）和C疫苗首免后2周抗體水平都低，2周后抗體滴度E疫苗（2014092）高于C疫苗，到第3周抗體水平基本相同，差異不明顯，相比較前三種疫苗有顯著差異；D疫苗和E疫苗（2014110）首免后抗體滴度很低，二免后抗體滴水平增長(zhǎng)明顯，達(dá)到保護(hù)雞群的水平，但是E疫苗（2014110）抗體滴度明顯高于D疫苗，二者相比E疫苗（2014110）免疫效果顯著些；E疫苗（2014110）和E疫苗（2014092）同一廠家不同批次的疫苗，首免后E疫苗（2014092）產(chǎn)生的抗體滴度明顯高于E疫苗（ 2014110），二者有明顯差異，二免抗體水平基本相同，說明同一廠不同批號(hào)的疫苗，免疫效果也存在一定的差異。