馬來酸氯苯那敏的荷移分光光度測(cè)定方法

孫海冰 余蘭▲

遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義563000

馬來酸氯苯那敏的荷移分光光度測(cè)定方法

孫海冰 余蘭▲

遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義563000

目的建立快速便捷測(cè)定馬來酸氯苯那敏片劑含量的新方法。方法采用分光光度法研究2，3-二氯-5，6-二氰-1，4-苯醌（DDQ）與馬來酸氯苯那敏之間的電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)。結(jié)果荷移反應(yīng)生成的絡(luò)合物在588 nm有最大吸收波長，表觀摩爾吸光系數(shù)為3.9×103L/（mol·cm），藥物質(zhì)量濃度在10～100mg/L范圍內(nèi)服從比爾定律，回收率分別為99.0%、98.8%、99.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.37%、0.54%、0.39%。結(jié)論應(yīng)用本方法測(cè)定片劑中馬來酸氯苯那敏，精密度好、準(zhǔn)確度高，含量測(cè)定結(jié)果與藥典基本一致。

馬來酸氯苯那敏；2，3-二氯-5，6-二氰-1，4-苯醌；荷移反應(yīng)；分光光度法

馬來酸氯苯那敏（chlorphenamine maleate）又稱撲爾敏，是第一代抗組胺類藥物，具有鎮(zhèn)靜和抗膽堿作用。臨床上主要用于治療各種過敏性疾病，是抗感冒類藥物中常見組分。目前已報(bào)道的定量測(cè)定方法主要有紫外可見分光光度法[1-2]、高效液相色譜[3-7]、氣相色譜法[8]、近紅外光譜法[9]、毛細(xì)管電泳法[10-12]、化學(xué)發(fā)光[13]、共振光散射光譜[14]和荷移分光光度法[15]等，而以2，3-二氯-5，6-二氰-1，4-苯醌（DDQ）作為電子受體與馬來酸氯苯那敏反應(yīng)還未見報(bào)道。本文研究并優(yōu)化了反應(yīng)條件，測(cè)定了絡(luò)合物組成，初探了反應(yīng)機(jī)制，建立了馬來酸氯苯那敏片劑含量測(cè)定新方法。

1 儀器與試藥

T9CS分光光度計(jì)，北京普析通用；AL204電子天平，梅特勒托利多（上海）有限公司；HWCL-3磁力攪拌反應(yīng)浴，鄭州長城科工貿(mào)有限公司。

馬來酸氯苯那敏（中國食品藥品檢定研究院）：精密稱定馬來酸氯苯那敏對(duì)照品0.012 50 g，置于25 ml容量瓶中，用乙腈溶解稀釋至刻度，得0.5 g/L乙腈溶液；DDQ（上海晶純生化科技股份有限公司）：精密稱取DDQ 0.5000 g，置于250ml容量瓶中，用乙腈溶解稀釋至刻度，得2mg/ml乙腈溶液；乙腈（色譜純，F(xiàn)ishercheical公司）；乙醇、甲醇、三氯甲烷、丙酮，所有試劑均為分析純（成都市科龍化工試劑廠）；馬來酸氯苯那敏片劑（130801，山東仁和堂藥業(yè)股份有限公司；140513，河南九勢(shì)制藥股份有限公司；140115大同市云崗制藥有限公司，規(guī)格均為4 mg/片），實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水（18.25MΩ·cm）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液制備

取同一批號(hào)（140115）馬來酸氯苯那敏10片，準(zhǔn)確稱量，研磨混勻后準(zhǔn)確稱取樣品總量的3/5，加適量乙腈，微熱攪拌，使其充分溶解，冷卻至室溫后過濾，濾液用乙腈定容于50 ml容量瓶中（馬來酸氯苯那敏濃度約為0.5 g/L）。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟

取適量馬來酸氯苯那敏溶液（≤1.0mg）于10ml比色管中，加入2.00 ml DDQ溶液，用乙腈稀釋至刻度，于60℃下反應(yīng)20 min。冷卻至室溫，以試劑空白為參比，在588 nm處測(cè)量其吸光度值。

2.3 吸收光譜

按實(shí)驗(yàn)方法配制溶液后在T9CS分光光度計(jì)上于300～800 nm范圍內(nèi)掃描，并繪制吸收光譜圖（圖1）。實(shí)驗(yàn)表明，在此波長范圍內(nèi)馬來酸氯苯那敏無吸收，DDQ最大吸收峰在378 nm，而荷移絡(luò)合物產(chǎn)生3個(gè)吸收峰，分別在458、548、588 nm，最大吸光度產(chǎn)生于588 nm處，所以選此波長作為實(shí)驗(yàn)測(cè)定波長。

圖1 DDQ、馬來酸氯苯那敏及絡(luò)合物的吸收光譜圖

2.4 溫度與時(shí)間對(duì)荷移反應(yīng)的影響

分別在不同溫度（25、30、40、50、60℃）下，考察時(shí)間對(duì)反應(yīng)體系的影響，測(cè)定其吸光度值，結(jié)果見表1。

由表1可知，馬來酸氯苯那敏與DDQ絡(luò)合物在25、30、40℃的吸光度變化緩慢，而50、60℃下，反應(yīng)均快速、完全，且在60℃時(shí)僅經(jīng)20 min，吸光度即達(dá)到最大，故實(shí)驗(yàn)選擇在60℃水浴中放置20min。

表1 溫度與時(shí)間對(duì)荷移反應(yīng)的影響（A）

2.5 DDQ用量對(duì)荷移反應(yīng)的影響

取1 ml馬來酸氯苯那敏標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 ml比色管中，依次改變加入DDQ用量，分別測(cè)定其吸光度值，見圖2。結(jié)果表明，DDQ的最佳用量為2ml。

圖2 DDQ用量對(duì)荷移反應(yīng)的影響

2.6 溶劑種類對(duì)荷移反應(yīng)的影響

分別考察了水、甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷作為稀釋溶劑對(duì)絡(luò)合物吸光度的影響。按照實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定的其吸收光度值，結(jié)果表明，用乙腈作溶劑時(shí)，靈敏度最高。

2.7 馬來酸氯苯那敏標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制

準(zhǔn)確移去不同量的馬來酸氯苯那敏標(biāo)準(zhǔn)溶液，在確立的最佳實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，并以馬來酸氯苯那敏的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制工作曲線（圖3）。馬來酸氯苯那敏在10～100 mg/L范圍內(nèi)服從比爾定律，線性回歸方程為A=0.0101C+0.0189，r=0.9997，檢出限為5 mg/L，表觀摩爾吸收系數(shù)為3.9×103L/（mol·cm）。

圖3 馬來酸氯苯那敏的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.8 方法精密度試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml，按照“2.2”項(xiàng)下的方法操作，連續(xù)測(cè)定6次。測(cè)得吸光度分為0.531、0.531、0.532、0.532、0.532、0.533。通過計(jì)算，馬來酸氯苯那敏平均吸光度是0.532，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.7%，RSD值較小，說明儀器精密度良好。

2.9 絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)測(cè)定

用等摩爾連續(xù)變化法測(cè)定馬來酸氯苯那敏與DDQ絡(luò)合物的組成，結(jié)果如圖4所示。由圖可知，等摩爾連續(xù)變化法切線交點(diǎn)大約在0.5，即CM/C=0.5，由此可以推出，絡(luò)合物組成比為1∶1。根據(jù)曲線上最大吸光度與其理論吸光度不同，計(jì)算求得穩(wěn)定常數(shù)是2.11×104。

圖4 等摩爾連續(xù)變化法測(cè)定絡(luò)合物組成

2.10 干擾物對(duì)荷移反應(yīng)的影響

考察了常用片劑中常見輔料對(duì)含量測(cè)定影響。當(dāng)馬來酸氯苯那敏濃度是1.28×10-4mol/L，相對(duì)誤差小于±5%時(shí)，500倍的葡萄糖、淀粉、蔗糖，100倍的果糖、硬脂酸鎂，均對(duì)反應(yīng)無影響。

2.11 試樣測(cè)定

取0.4 ml樣品溶液（濃度約0.5 g/L）于10 ml比色管中，加入2mlDDQ溶液在60℃水浴中反應(yīng)20min，冷卻至室溫后在最大波長處進(jìn)行測(cè)定，平行測(cè)定5次。測(cè)定3個(gè)不同廠家馬來酸氯苯那敏片劑含量，另按照中國藥典方法[1]測(cè)定馬來酸氯苯那敏片劑含量，并作回收率試驗(yàn)結(jié)果分別列于表2、3。

表2 樣品中馬來酸氯苯那敏的測(cè)定（n=5）

表3 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=6）

2.12 反應(yīng)機(jī)制

馬來酸氯苯那敏分子的嘧啶環(huán)上氮原子含有一對(duì)孤對(duì)電子，可以作為電子供體，而DDQ是一個(gè)強(qiáng)平面型電子受體，兩者可以形成n-π配合物。根據(jù)測(cè)物質(zhì)組成測(cè)定結(jié)果可知，馬來酸氯苯那敏與DDQ化學(xué)反應(yīng)計(jì)量比是1∶1，由此可推出荷移反應(yīng)方程式如圖5所示。

圖5 荷移絡(luò)合物的形成過程

3 討論

本實(shí)驗(yàn)是基于馬來酸氯苯那敏與DDQ之間的電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)而建立的一種測(cè)定馬來酸氯苯那敏含量的新方法。實(shí)驗(yàn)過程中注意稀釋溶劑及溫度的選擇，不同溶劑體系靈敏度會(huì)有很大差別，較高的溫度可以使反應(yīng)較快速達(dá)到平衡。

結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏和DDQ以乙腈作為稀釋溶劑，在60℃水浴中，反應(yīng)20min，形成1∶1紅褐色絡(luò)合物。應(yīng)用該方法對(duì)馬來酸氯苯那敏劑含量測(cè)定結(jié)果與藥典基本一致，重現(xiàn)性好，表明可以作為該藥物片劑的含量測(cè)定質(zhì)量控制方法。

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Charge transfer spectrophotometric determ ination method of chlorpheniram inemaleate

SUN Hai-bing YU Lan▲
School of Pharmacy,ZunyiMedical College in Guizhou Province,Zunyi 563000,China

Objective To create a new method to determine the content of chlorpheniramine maleate tablet fast and conveniently.M ethods Charge transfer reaction between 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone(DDQ)and chlorpheniramine maleate was studied by spectrophotometry.Results Clathrate generated in charge transfer reaction had maximum absorption wavelength in 588 nm.The apparentmolar absorption coefficientwas 3.9×103L/(mol·cm)and drug concentration ranged from 10-100 mg/L complied with Bill law.The recovery rate was 99.0%,98.8%,99.5% respectively,and relative standard deviation was 0.37%,0.54%,0.39%respectively.Conclusion Determination of chlorpheniramine maleate tablet by this method is good in precision and high in accuracy,and outcome of content determination is basically consistentwith that stipulated in pharmacopeia.

Chlorpheniraminemaleate;2,3-Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone;Charge transfer reaction;Spectrophotometry

R927.2

A

1674-4721（2015）04（c）-0007-04

2015-01-27本文編輯：許俊琴）

遵義醫(yī)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金（ZMKD2013-006）

孫海冰（1988-），女，江蘇徐州人，2012級(jí)在讀碩士研究生，研究方向：天然產(chǎn)物活性成分分離

▲通訊作者：余蘭（1971-），女，貴州遵義人，教授，研究方向：藥物分析及天然產(chǎn)物活性成分分離